AOH1996

别名: NSC789796; NSC 789796; 2089314-64-5; EZ94L3M5SX; N-[2-[[2-(3-methoxyphenoxy)phenyl]amino]-2-oxoethyl]-1-Naphthalenecarboxamide; N-(2-((2-(3-Methoxyphenoxy)phenyl)amino)-2-oxoethyl)-1-naphthalenecarboxamide; RefChem:1090906; AOH1,996; N-(2-((2-(3-Methoxyphenoxy)phenyl)amino)-2-oxoethyl)-1-naphthamide; N-[2-[[2-(3-Methoxyphenoxy)phenyl]amino]-2-oxoethyl]-1-naphthamide; NSC-789796; AOH1996; AOH-1996; AOH 1996; N-(2-((2-(3-甲氧基苯氧基)苯基)氨基)-2-乙酰氧基)-1-萘甲酰胺
目录号: V60132 纯度: ≥98%
AOH1996 是复制体 PCNA(增殖细胞核抗原)成分的口服活性配体,针对转录复制冲突 (TRC)。
AOH1996 CAS号: 2089314-64-5
产品类别: NEW3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
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纯度/质量控制文件

纯度: =98.63%

产品描述
AOH1996 是 PCNA 的强抑制剂。 AOH1996仅具有杀死癌细胞的能力。 AOH1996 将 PCNA 从活跃转录的染色质区域解离,并改善 PCNA 和 RPB1(RNA 聚合酶 II 的最大亚基)之间的相互作用。它还会诱导 DNA 中转录依赖性双链断裂。对 AOH1996 的抗性是通过 RPB1 与 PCNA 相互作用的减弱而赋予的,这是由 RPB1 的 PCNA 结合区的点突变引起的。 AOH1996 是一种代谢稳定的口服药物,单独使用或与其他疗法联合使用时可抑制肿瘤生长。它没有已知的副作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
Proliferating cell nuclear antigen (PCNA), especially the cancer - associated variant of PCNA. [2]
体外研究 (In Vitro)
AOH1996选择性杀死癌症细胞。AOH1996增强了PCNA与RNA聚合酶II最大亚基RPB1之间的相互作用,并将PCNA从主动转录的染色质区域解离,同时以转录依赖的方式诱导DNA双链断裂。RPB1与PCNA相互作用的减弱,通过RPB1的PCNA结合区的点突变,赋予对AOH1996的抗性[2]。
AOH1996可选择性靶向PCNA,增强PCNA与RPB1之间的相互作用,导致RPB1的整体降解和主动转录染色质区域中DNA复制叉的崩溃。它能诱导癌细胞发生细胞周期停滞(G2/M期或S期停滞)和凋亡,而对非恶性细胞无此作用。该药物在约300 nM的中位药物浓度下可抑制约50%的肿瘤细胞生长。研究团队在70多个癌细胞系和几组正常对照细胞中测试了AOH1996,结果表明,它可以阻止带有损伤DNA的细胞在G2/M期分裂,并阻止S期错误DNA的复制。[2]
体内研究 (In Vivo)
AOH1996几乎可以完全抑制异种移植肿瘤的生长,且对实验动物未造成任何明显毒性。它作用于癌细胞中的PCNA,破坏癌细胞中的PCNA - TRC界面,发挥有效的选择性抗癌作用。[2]
AOH1996口服且代谢稳定,可作为单一疗法或联合疗法抑制肿瘤生长,但不会产生明显的副作用。转录复制冲突解决抑制剂可能为利用这种癌症选择性脆弱性提供一种新的独特治疗途径[2]。
酶活实验
PCNA-AOH1996相互作用的热变性分析[2]
使用BioRad CFX Connect实时PCR检测系统进行测定。将蛋白质(PCNA)、抑制剂(AOH1996和AOH1160–1LE)和200x SYPRO橙色染料稀释到磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。重组PCNA的最终浓度为9μM,最终化合物浓度为0、10或30μM。将样品板从25°C加热到95°C,加热增量为0.5°C/分钟。在470–505/540–700 nm的激发/发射范围内测量荧光强度
肝微粒体中的化合物代谢[2]
AOH1160类似物在不存在或存在NADPH的情况下与人肝微粒体在37°C下孵育。然后在不同的孵育时间后取反应混合物的等分试样,并如前所述通过液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定化合物的浓度。
细胞实验
细胞周期分析[2]
将细胞以1×105/ml的速度接种在6孔板中。用化合物处理后,将细胞固定在60%乙醇中,并用碘化丙啶(PI)染色。通过流式细胞术测量细胞内的PI荧光强度,并使用FlowJo程序分析数据
细胞生长和凋亡测定[2]
根据细胞系,将细胞以5×103/ml或3×104/ml接种到96孔板中,并在允许附着过夜后用不同浓度的AOH1996处理72小时。根据制造商的说明,通过CellTiter-Glo测定法测量细胞生长。或者,通过IncuCyte S3活细胞分析系统分析细胞生长,该系统通过周期性成像测量细胞融合。美国国家癌症研究所(NCI)使用含有磺基罗丹明B(SRB)的标准5-糖测定法检查了AOH1996对NCI60细胞系的影响。有关测定的详细信息,请访问(https://dtp.cancer.gov/discovery_development/nci-60/methodology.htm). 通过NCI计算50%生长抑制浓度(GI50)。 在室载玻片上以1×105/ml的接种密度测量细胞凋亡。用500nM AOH1996处理24小时后,使用含有TMR红原位细胞死亡检测试剂盒的末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法固定并分析细胞。
将70多个癌细胞系和几组正常对照细胞接种于合适的培养容器中,在标准培养条件下用适宜的培养基培养。向培养体系中加入用合适溶剂溶解的不同浓度的AOH1996,孵育一定时间。然后,采用流式细胞术等方法检测细胞周期分布,判断是否出现细胞周期停滞;采用TUNEL法或检测凋亡相关蛋白表达等方式判断是否诱导细胞凋亡。同时,观察细胞生长状态,通过MTT法等计算细胞生长抑制率,评估AOH1996的抗增殖作用。[2]
动物实验
动物药代动力学 (PK) 研究[2]
将 AOH1996 (40 mg) 溶解于 Kolliphor EL (840 mg) 和 Poloxamer P124 (120 mg) 的混合物中,制备口服给药溶液。在小鼠研究中,分别于给药后 10、20 和 30 分钟以及 1、2、4、6 和 24 小时,通过心脏穿刺从每个给药组的 ES1e/SCID 小鼠(3 只雄性,3 只雌性)采集血样。在犬研究中,分别于给药后 5、15 和 30 分钟以及 1、2、4、8、12 和 24 小时,通过外周静脉穿刺从每个给药组的 3 只雄性比格犬采集血样。去除血细胞后,采用LC-MS/MS法测定AOH1996的血浆浓度,具体方法见文献17。口服药代动力学采用标准非房室模型方法测定[2]。化合物在ES1e/SCID小鼠中进行测试,该小鼠最初由圣裘德儿童研究医院的Philip M. Potter博士提供49。收集SK-N-BE(2)c和SK-N-AS神经母细胞瘤细胞,并用PBS洗涤两次后,分别以5 × 107/ml和4 × 107/ml的浓度悬浮于Matrigel基质胶中。将细胞悬液(0.1 mL)皮下注射到每只ES1e/SCID小鼠的右侧腹部。AOH1996采用口服给药。CPT-11采用腹腔注射给药。每周测量肿瘤大小和动物体重。实验结束时,从处死的小鼠中分离出肿瘤,并用针对磷酸化 Chk1 和 γH2A.X 的抗体进行免疫组织化学染色分析。
药代性质 (ADME/PK)
与 AOH1160 相比,小鼠口服药代动力学研究表明,AOH1996 的半衰期延长了约 27%,更适合口服给药。[3]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在临床前研究中,AOH1996未显示出明显的毒性,也没有关于半数致死剂量、肝肾毒性、药物相互作用和血浆蛋白结合等信息的报告。[2]
参考文献

[1]. Pharmacological targeting of transcription-replication conflict leads to anti-cancer efficacy with minimal side effects in preclinical models. Cancer Research, 2021, 81(13_Supplement): 1269-1269.

[2]. Small molecule targeting of transcription-replication conflict for selective chemotherapy. Cell Chem Biol . 2023 Oct 19;30(10):1235-1247.e6. .

其他信息
AOH1996是一种小分子口服药物。PCNA是DNA复制/修复通路中的核心“枢纽”,并与许多其他细胞通路相互作用。它是癌细胞生长和存活所必需的非癌基因蛋白之一。AOH1996已进入I期临床试验,该研究预计持续两年,旨在确定其最大耐受剂量,并评估其对标准治疗无效的实体瘤成人患者的初步疗效。[2]
AOH1996是一种仲酰胺,由N-(萘-1-基羰基)甘氨酸的羧基与2-(3-甲氧基苯氧基)苯胺的氨基缩合而成。它是首个PCNA小分子抑制剂,PCNA是一种对肿瘤内DNA复制和修复至关重要的蛋白质。它具有抗肿瘤活性,可诱导细胞凋亡,并抑制PCNA活性。它是一种芳香醚、萘甲酰胺、单甲氧基苯、仲甲酰胺和二醚。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C26H22N2O4
分子量
426.463886737823
精确质量
426.16
元素分析
C, 73.23; H, 5.20; N, 6.57; O, 15.01
CAS号
2089314-64-5
PubChem CID
126718388
外观&性状
Solid powder
密度
1.269±0.06 g/cm3(Predicted)
沸点
703.9±50.0 °C(Predicted)
LogP
4.9
tPSA
76.7Ų
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
7
重原子数目
32
分子复杂度/Complexity
627
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O(C1C=CC=C(C=1)OC)C1=CC=CC=C1NC(CNC(C1=CC=CC2C=CC=CC1=2)=O)=O
InChi Key
HDMONPHKMIZXDH-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C26H22N2O4/c1-31-19-10-7-11-20(16-19)32-24-15-5-4-14-23(24)28-25(29)17-27-26(30)22-13-6-9-18-8-2-3-12-21(18)22/h2-16H,17H2,1H3,(H,27,30)(H,28,29)
化学名
N-[2-[2-(3-methoxyphenoxy)anilino]-2-oxoethyl]naphthalene-1-carboxamide
别名
NSC789796; NSC 789796; 2089314-64-5; EZ94L3M5SX; N-[2-[[2-(3-methoxyphenoxy)phenyl]amino]-2-oxoethyl]-1-Naphthalenecarboxamide; N-(2-((2-(3-Methoxyphenoxy)phenyl)amino)-2-oxoethyl)-1-naphthalenecarboxamide; RefChem:1090906; AOH1,996; N-(2-((2-(3-Methoxyphenoxy)phenyl)amino)-2-oxoethyl)-1-naphthamide; N-[2-[[2-(3-Methoxyphenoxy)phenyl]amino]-2-oxoethyl]-1-naphthamide; NSC-789796; AOH1996; AOH-1996; AOH 1996;
HS Tariff Code
2934.99.9005
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: > 10 mM
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3449 mL 11.7244 mL 23.4489 mL
5 mM 0.4690 mL 2.3449 mL 4.6898 mL
10 mM 0.2345 mL 1.1724 mL 2.3449 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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