OR-1896

PDE3/PDE Ⅲ; K+ Channel; Levosimendan metabolite

越来越多的证据已经证明了 OR-1896 的许多有利的多效性作用。 OR-1896 可诱导显着的血管舒张，并且有效的血管舒张机制似乎涉及平滑肌细胞中 ATP 敏感的肌膜 K+ 通道的激活。激活线粒体中 ATP 敏感的 K+ 通道还可以提出心脏保护的药理学策略，并扩大细胞可用于控制线粒体 ATP 生成的控制范围 [1]。

---

Ca2+敏感性[1]
左西孟旦与Ca2+饱和的cTnC相互作用，这构成了其Ca2+增敏机制的基础。左西孟旦在cTnC上的结合位点已定位在其N结构域的疏水区域，靠近所谓的D/E接头区域。在哒嗪酮环和左西孟旦与cTnC结合的中恶腈腙部分上有重要的氢键供体和受体基团。因此，这些基团很可能与cTnC的Ca2+饱和N端结构域的疏水口袋中的极性或带电氨基酸形成氢键。左西孟旦结合的结果是，Ca2+饱和的cTnC在药物存在下是稳定的。基于这种构象变化提出的方案涉及cTnC和心肌肌钙蛋白I之间的长期相互作用，从而在左西孟旦存在的情况下促进收缩力，而不会增加细胞内Ca2+瞬变的振幅。左西孟旦或OR-1896诱发的Ca2+敏化程度似乎小于其他已知Ca2+敏化剂的最大作用，尽管与Frank–Starling机制激活期间长度依赖性Ca2+敏化的预期相似。左西孟旦不会损害舒张功能，这可能是因为轻度的Ca2+敏感性，也可能是因为Ca2+在细胞内Ca2+的舒张水平上与cTnC分子的解离排除了它与左西孟丹的相互作用。 活性代谢产物OR-1896通过Ca2+敏化表现出与左西孟旦相当的血流动力学效应：因此可以推测OR-1896和cTnC之间存在类似的相互作用。然而，OR-1896和cTnC之间相互作用的结构生化数据尚不可用。

---

血管舒张[1]
左西孟旦和OR-1896引起显著的血管舒张反应。左西孟旦具有打开ATP敏感K+通道的潜力，因此血管平滑肌细胞的超极化被认为可以解释该药物的血管舒张作用。根据这一建议，ATP敏感K+通道的抑制剂可以减轻左西孟旦或OR-1896引起的血管舒张，尽管这些药理学方法也表明其他类型的K+通道（如Ca2+激活的K+渠道和电压门控的K+途径）也可能参与其中。介导血管舒张反应的K+通道的组成可能取决于血管类型和血管直径。有趣的是，最近的实验数据表明，左西孟旦诱导的血管舒张是内皮成分，ATP敏感的K+通道激活与NO产生之间存在相互作用。左西孟旦给药期间，肺、冠状动脉和外周循环的动脉侧以及门静脉和隐静脉系统的静脉侧都出现了血管舒张。

---

磷酸二酯酶抑制[1]
左西孟旦和OR-1896都是磷酸二酯酶（PDE）III亚型的高选择性抑制剂。一些实验研究表明，左西孟旦诱发的正性肌力或负性肌力与cAMP信号传导之间存在相互作用。然而，人们认识到，通过PDE抑制增加细胞内cAMP浓度取决于可用PDE异构体、其亚细胞定位和平行信号级联之间的复杂相互作用，并且清楚地表明，左西孟旦及其活性代谢产物在治疗浓度下均不影响其他PDE同工酶的功能。因此，高于治疗浓度的左西孟旦和环核苷酸信号传导的物种依赖性特征可能有助于解释实验观察到的cAMP信号传导与正性肌力/正性肌力之间的相互作用，因为几项研究的结果表明，细胞内Ca2+浓度的改变（由PDE抑制引起的cAMP升高引起）不是左西孟丹心脏作用的先决条件。然而，也应承认，处于心血管疾病不同阶段的患者的心肌细胞在细胞内环核苷酸的调节以及细胞内Ca2+浓度方面可能存在显著差异，因此单独抑制PDE III的结果可能会有所不同。可以预见的是，左西孟旦在低剂量下引起细胞内cAMP增加的可能性最小，毫无疑问，其他PDE亚型（如PDE IV）可以替代PDE III。

左西孟旦通过大肠代谢，其中约 5% 的药物转化为代谢物 OR-1855。然后在肝脏中乙酰化形成代谢物OR-1896。 OR-1896 与血浆蛋白的结合率仅为 40%，而左西孟旦的结合率为 98%。 OR-1896 的消除半衰期约为 75 至 80 小时，使得心血管效应在结束 24 小时输注后可持续长达 7 至 9 天。这与左西孟旦形成鲜明对比，左西孟旦的半衰期为 1-1.5 小时。左西门旦。虽然代谢物 (OR-1896) 的消除时间可以延长，但在严重肾功能不全或轻度肝功能不全的患者中，母体药物的药代动力学保持不变[1]。

---

左西孟旦通过Ca（2+）增敏增强心脏收缩性，并通过激活ATP依赖性K（+）和大电导Ca（2-）依赖性钾（+）通道诱导血管舒张。然而，左西孟旦及其代谢产物OR-1896和OR-1855相对于血浆浓度的血流动力学效应尚不清楚。因此，左西孟旦、OR-1896、OR-1855或赋形剂以0.01、0.03、0.1和0.3 mumol.kg（-1）的剂量输注30分钟（-1），靶向治疗至超治疗浓度的总左西孟丹（62.6 ng/ml）。结果与β1激动剂多巴酚丁胺和磷酸二酯酶3抑制剂米力农的结果进行了比较。左西孟旦、OR-1896和OR-1855的峰值浓度分别为455+/-21、126+/-6和136+/-6 ng/ml。左西孟旦和OR-1896可剂量依赖性地降低平均动脉压（分别为-31+/-2和-42+/-3 mmHg）和全身阻力，而不影响脉压，其作用与心率增加平行；OR-1855在任何测试剂量下都没有产生影响。多巴酚丁胺而非米力农会增加平均动脉压和脉压（分别为17+/-2和23+/-2 mmHg）。关于降低峰值压力和收缩压恢复时间的效力：OR-1896>左西孟旦>米力农>多巴酚丁胺。左西孟旦和OR-1896引起压力随时间变化的剂量依赖性增加（分别为118+/-10%和133+/-13%），同时左心室舒张末期压力和射血时间减少。然而，左西孟旦和OR-1896在变力和血管舒张浓度下均未增加心肌耗氧量，而多巴酚丁胺增加了心肌耗氧量（比基线高79%）。左西孟旦和OR-1896的作用仅限于体循环；两种化合物均未引起肺压变化，而多巴酚丁胺引起了显著升高（74+/-13%）。因此，在临床观察到的浓度下，左西孟旦和OR-1896在麻醉犬体内具有血流动力学活性，并引发与K（+）通道激活和Ca（2+）致敏一致的心血管效应，而OR-1855在本研究测量的终点上没有活性。[3]

---

左西孟旦的静脉制剂已在几项针对失代偿性心力衰竭患者的随机比较研究中进行了研究，其疗效和耐受性已在缺血性和非缺血性病因的心力衰竭患者中得到证实。在一项针对诊断为心力衰竭的患者的开放标签、非随机II期研究中评估了与左西孟旦疗效相关的血浆浓度，其中连续输注左西孟丹24小时产生的峰值血浆浓度为62.6 ng/ml；在相同的患者中，左西孟旦的两种主要循环代谢产物OR-1896和OR-1855的峰值浓度分别达到5.5和6.8 ng/ml。
由于左西孟旦在人体内减少为OR-1855，随后乙酰化为OR-1896，因此无法明确描述母体与每种代谢物对患者观察到的血流动力学和心血管效应的贡献。然而，在狗身上，左西孟旦和OR-1855都不会代谢为OR-1896。此外，左西孟旦及其代谢产物（与达到的血浆浓度相关）对犬心血管功能的影响的全面评估尚未得到充分描述。因此，本研究试图描述左西孟旦、OR-1896和OR-1855在被认为具有治疗性至超治疗性的血浆浓度下对综合仪器狗心肌和血流动力学功能的影响。将结果与治疗心力衰竭的另外两种常规药物进行比较：β1-受体激动剂多巴酚丁胺和PDE3抑制剂米力农[3]。

---

左西孟旦通过Ca（2+）增敏增强心脏收缩性，并通过激活ATP依赖性K（+）和大电导Ca（2-）依赖性钾（+）通道诱导血管舒张。然而，左西孟旦及其代谢产物OR-1896和OR-1855相对于血浆浓度的血流动力学效应尚不清楚。因此，左西孟旦、OR-1896、OR-1855或赋形剂以0.01、0.03、0.1和0.3 mumol.kg（-1）的剂量输注30分钟（-1），靶向治疗至超治疗浓度的总左西孟丹（62.6 ng/ml）。结果与β1激动剂多巴酚丁胺和磷酸二酯酶3抑制剂米力农的结果进行了比较。左西孟旦、OR-1896和OR-1855的峰值浓度分别为455+/-21、126+/-6和136+/-6 ng/ml。左西孟旦和OR-1896可剂量依赖性地降低平均动脉压（分别为-31+/-2和-42+/-3 mmHg）和全身阻力，而不影响脉压，其作用与心率增加平行；OR-1855在任何测试剂量下都没有产生影响。多巴酚丁胺而非米力农会增加平均动脉压和脉压（分别为17+/-2和23+/-2 mmHg）。关于降低峰值压力和收缩压恢复时间的效力：OR-1896>左西孟旦>米力农>多巴酚丁胺。左西孟旦和OR-1896引起压力随时间变化的剂量依赖性增加（分别为118+/-10%和133+/-13%），同时左心室舒张末期压力和射血时间减少。然而，左西孟旦和OR-1896在变力和血管舒张浓度下均未增加心肌耗氧量，而多巴酚丁胺增加了心肌耗氧量（比基线高79%）。左西孟旦和OR-1896的作用仅限于体循环；两种化合物均未引起肺压变化，而多巴酚丁胺引起了显著升高（74+/-13%）。因此，在临床观察到的浓度下，左西孟旦和OR-1896在麻醉犬体内具有血流动力学活性，并引发与K（+）通道激活和Ca（2+）致敏一致的心血管效应，而OR-1855在本研究中测量的终点上没有活性[3]。

左西孟旦及其活性代谢产物OR-1896 在左西孟旦的代谢过程中，大约5%的药物在大肠中转化为代谢物OR-1855（4-（1,4,5,6-四氢-4-甲基-6-氧代-3-哒嗪基）苯胺的（-）对映异构体），然后在肝脏中乙酰化形成活性代谢物OR-1896。左西孟旦与血浆蛋白的结合率为98%，但OR-1896仅为40%：这解释了为什么相对较低的代谢物总血浆水平可能会引起临床显著影响。与左西孟旦的消除半衰期为1-1.5小时不同，OR-1896的半衰期约为75至80小时，在停止24小时输注左西孟丹后，心血管影响可持续7至9天。母体药物的药代动力学在严重肾功能损害或中度肝功能损害的受试者中没有变化，而其代谢物的消除可以延长。

动物被随机分为六个治疗组或载体组（5%葡萄糖溶液）。手术完成后，动物稳定1小时，并在治疗前30分钟每隔5分钟收集一次基线数据。活性药物以30分钟输注（0.02 ml·kg−1·min−1）的方式给药，分四次递增剂量，溶于5%葡萄糖溶液中；高剂量输注结束后，观察动物30分钟。左西孟旦、OR-1896和OR-1855的输注剂量分别为0.01、0.03、0.10和0.33 μmol·kg−1·30 min−1。每隔 15 分钟抽取血样，通过高效液相色谱-质谱法测定血浆中左西孟旦及其各代谢物的浓度。多巴酚丁胺和米力农的输注剂量比左西孟旦和 OR-1896 高 1 个对数单位，以达到与左西孟旦和 OR-1896 相似的全身抵抗力降低效果（图 1）。为了更深入地了解情况，本研究的结果还与先前在麻醉犬心血管模型中研究过的三种钾离子通道开放剂（KCOs）A-278637、ZD-6169、WAY-133537 和 A-325100，以及二氢吡啶类钙离子通道阻滞剂硝苯地平[3]的结果进行了比较。\n\n

---

\n雄性Sprague-Dawley大鼠（325-400 g）用长效巴比妥类药物硫喷妥钠（100 mg/kg，腹腔注射）麻醉。随后，将大鼠用作实验工具，记录其血流动力学和心血管功能，具体方法如前所述（Liu et al., 2007）。简而言之，将聚乙烯导管（PE240）置入气管以保持气道通畅，大鼠继续自主呼吸。将血管导管（PE50）置入股动脉以测量平均动脉压……[2]

---

\n\n左西孟旦主要通过Ca2+敏化增强心肌收缩力，并通过激活ATP敏感性钾通道和大电导Ca2+激活钾通道诱导血管舒张。然而，左西孟旦及其代谢物(R)-N-(4-(4-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢哒嗪-3-基)苯基)乙酰胺(OR-1896)和(R)-6-(4-氨基苯基)-5-甲基-4,5-二氢哒嗪-3(2H)-酮(OR-1855)的浓度依赖性血流动力学效应尚未明确。因此，左西孟旦（0.03、0.10、0.30 和 1.0 μmol/kg/30 min；n = 6）以四次递增的 30 分钟静脉输注剂量给药，目标是达到治疗浓度至超治疗浓度的左西孟旦（Cmax 约为 62.6 ng/ml）；与多巴酚丁胺（β1 受体激动剂）和米力农（磷酸二酯酶 3 抑制剂）相比，代谢物的输注剂量和反应均降低了半个对数单位。在高剂量结束时，左西孟旦、OR-1896 和 OR-1855 的峰浓度分别为 323 ± 14、83 ± 2 和 6 ± 2 ng/ml（OR-1855 迅速代谢为 OR-1896；峰浓度 = 82 ± 3 ng/ml）。左西孟旦和OR-1896均能剂量依赖性地降低血压和外周阻力，其效价（基于ED15值）排序为：OR-1896 (0.03 μmol/kg) > OR-1855 > 左西孟旦 > 米力农 (0.24 μmol/kg)；多巴酚丁胺的ED15值无法确定。仅多巴酚丁胺可使脉压（30 ± 5%）和心率血压乘积（34 ± 4%）升高。除OR-1855外，所有化合物均能剂量依赖性地增加dP/dt，其效价（基于ED50值）排序为：多巴酚丁胺 (0.03 μmol/kg) > 左西孟旦 > OR-1896 > 米力农 (0.09 μmol/kg)，但仅左西孟旦可使心输出量持续升高（9 ± 4%）。因此，左西孟旦和 OR-1896 在亚治疗浓度到超治疗浓度下具有血液动力学活性（而 OR-1855 在大鼠中的作用被认为主要通过转化为 OR-1896 来介导），并产生直接的正性肌力作用以及直接舒张外周血管，这明显区别于多巴酚丁胺，后者不引起 K+ 通道激活，这表明对心脏收缩状态和 K+ 通道介导的血管阻力变化具有更平衡的作用。[2]

[1]. Levosimendan: molecular mechanisms and clinical implications: consensus of experts on the mechanisms of action of levosimendan. Int J Cardiol. 2012 Aug 23;159(2):82-7.

[2]. Evoked changes in cardiovascular function in rats by infusion of levosimendan, OR-1896 [(R)-N-(4-(4-methyl-6-oxo-1,4,5,6-tetrahydropyridazin-3-yl)phenyl)acetamide], OR-1855 [(R)-6-(4-aminophenyl)-5-methyl-4,5-dihydropyridazin-3(2H)-one], dobutamine, and milrinone: comparative effects on peripheral resistance, cardiac output, dP/dt, pulse rate, and blood pressure. J Pharmacol Exp Ther, 325 (2008), pp. 331-340

[3]. Comparative effects of levosimendan, OR-1896, OR-1855, dobutamine, and milrinone on vascular resistance, indexes of cardiac function, and O2 consumption in dogs. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2008 Jan;294(1):H238-48.

OR-1896 是一种苯胺类化合物，属于乙酰胺类。左西孟旦的钙离子敏化作用的分子机制与其与心肌肌丝中钙离子传感器肌钙蛋白 C 分子的特异性相互作用有关。多年来，大量的临床前和临床证据积累，揭示了左西孟旦及其长效代谢物 OR-1896 的多种有益的多效性作用。首先，激活平滑肌细胞的 ATP 敏感性肌膜钾离子通道似乎是一种强效的血管舒张机制。此外，激活线粒体中的 ATP 敏感性钾离子通道可能扩展其细胞作用范围，进而调节线粒体 ATP 的产生，并提示其具有心脏保护作用的药理机制。最后，已证实左西孟旦具有亚型选择性磷酸二酯酶抑制作用。要解读左西孟旦复杂的作用机制，需要根据现有证据仔细分析所有潜在的药理学相互作用。这些数据表明，左西孟旦的心血管效应并非仅通过药物-受体相互作用产生，而是涉及与其他类型正性肌力药物相比独特的有利能量和神经激素变化。[1]

---

传统上，Ca2+ 敏化和血管舒张被认为是左西孟旦作用机制的基石。这些效应的产生是由于左西孟旦或OR-1896与心肌细胞中的 cTnC 以及左西孟旦或OR-1896与血管床中的 ATP 敏感性 K+ 通道之间的特异性相互作用。除了这些众所周知的正性肌力扩张作用外，左西孟旦在急性和慢性心力衰竭中的第三个作用是心脏保护。左西孟旦诱导心脏保护的分子机制可能包括通过心肌细胞线粒体ATP敏感性钾离子通道与线粒体能量保存相互作用，尽管也不能排除其他分子机制。左西孟旦诱导的心脏保护作用可在急性应激条件下被激活，并表现为急性抗缺血和抗顿抑作用。此外，左西孟旦还能调节细胞因子和神经体液信号传导，提示其可能干扰心肌细胞凋亡和心肌重塑。上述所有作用的综合作用可能使左西孟旦有效患者的长期临床疗效优于疗效欠佳的患者。总之，由于其独特的作用机制，左西孟旦可被视为首个具有心脏保护作用的正性肌力药物。我们衷心希望未来该领域的药物研发能够带来更多旨在支持心脏功能的更有效的药物。[1]

C₁₃H₁₅N₃O₂

245.28

245.116

C, 63.66; H, 6.16; N, 17.13; O, 13.05

220246-81-1

9816296

Light yellow to yellow solid powder

1.278 g/cm3

224-226ºC

1.342

70.56

2

3

2

18

370

1

C[C@@H]1CC(=O)NN=C1C2=CC=C(C=C2)NC(=O)C

GDZXNMWZXLDEKG-MRVPVSSYSA-N

InChI=1S/C13H15N3O2/c1-8-7-12(18)15-16-13(8)10-3-5-11(6-4-10)14-9(2)17/h3-6,8H,7H2,1-2H3,(H,14,17)(H,15,18)/t8-/m1/s1

N-[4-[(4R)-4-methyl-6-oxo-4,5-dihydro-1H-pyridazin-3-yl]phenyl]acetamide

OR1896; 220246-81-1; OR-1,896; (R)-N-ACETYL-6-(4-AMINOPHENYL)-4,5-DIHYDRO-5-METHYL-3(2H)-PYRIDAZINONE; IKC90B19NV; N-[4-[(4R)-4-methyl-6-oxo-4,5-dihydro-1H-pyridazin-3-yl]phenyl]acetamide; UNII-IKC90B19NV; OR-1896; N-(4-((4R)-1,4,5,6-Tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)phenyl)acetamide; OR 1896

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~62.5 mg/mL (~254.81 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。