PDGFRβ (Ki = 8 nM); FGFR1 (Ki = 1.2 μM); Flt-1 (Ki = 2.1 μM)
Orantinib (SU 6668; NSC-702827; TSU68) targets VEGFR2 (IC₅₀ = 2.1 μM), PDGFRβ (IC₅₀ = 3.2 μM), and FGFR1 (IC₅₀ = 5.8 μM) [1]
Orantinib (SU 6668; NSC-702827; TSU68) inhibits c-kit (SCF receptor) with an IC₅₀ of 4.6 μM in human myeloid leukemia cells [2]

TSU-68 是 ATP、Flk-1/KDR 反式磷酸化、FGFR1 反式磷酸化和 PDGFRβ 激酶自磷酸化的竞争性抑制剂。 TSU-68 (0.03-10 μM) 抑制 VEGF 刺激的 HUVEC 中 KDR 的酪氨酸磷酸化。 TSU-68 还以 0.03-0.1 μM 的最低浓度抑制过度表达 PDGFRβ 的 NIH-3T3 细胞中 PDGF 刺激的 PDGFRβ 酪氨酸磷酸化。 TSU-68 在 10 μM 或更高浓度时可抑制酸性 FGF 诱导的 FGFR1 底物 2 磷酸化。然而，TSU-68（最高 100 μM）对过度表达 EGFR 的 NIH-3T3 细胞中 EGF 刺激的 EGFR 酪氨酸磷酸化没有影响。 TSU-68 抑制 VEGF 驱动和 FGF 驱动的 HUVEC 有丝分裂，平均 IC50 分别为 0.34 μM 和 9.6 μM。在人骨髓性白血病 MO7E 细胞中，TSU-68 抑制干细胞因子 (SCF) 受体 c-kit 的酪氨酸自磷酸化，IC50 为 0.1-1 μM，以及 ERK1/2 磷酸化（c-下游的信号传导事件）套件激活。 TSU-68 还抑制 SCF 诱导的 MO7E 细胞增殖，IC50 为 0.29 μM，并诱导细胞凋亡。激酶测定：用于定量 Flk-1 和 FGFR1 转磷酸化活性的酪氨酸激酶测定在用肽底物聚-Glu 预涂（20 μg/孔，溶于 PBS；在 4 °C 下孵育过夜）的 96 孔微量滴定板中进行，提尔 (4:1)。多余的蛋白质结合位点用 PBS 中的 1-5% (w/v) BSA 封闭。然后将纯化的 GST-FGFR1（激酶结构域）或 GST-Flk-1（细胞质结构域）融合蛋白添加到含有 2 倍浓度激酶稀释缓冲液的微量滴定孔中，缓冲液由 100 mM HEPES、50 mM NaCl、40 μM NaVO4 和 0.02 组成。 % (w/v) BSA。 GST-Flk-1 和 GST-FGFR1 的最终酶浓度为 50 ng/mL。 SU6668 以最终所需浓度的 100 倍溶解在 DMSO 中，并在水中按 1:25 稀释。随后将 25 μL 稀释的 SU6668 添加到每个反应孔中。通过在 MnCl2 溶液中添加不同浓度的 ATP 来启动激酶反应，使得最终 ATP 浓度跨越酶的 Km，并且 MnCl2 的最终浓度为 10 mM。将板在室温下孵育 5-15 分钟，然后添加 EDTA 停止反应。然后用TBST洗涤板3次。将兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清以 1:10000 稀释度添加到含有 0.5% (w/v) BSA、0.025% (w/v) 脱脂奶粉和 100 μM NaVO4 的 TBST 中，并在 37° 下孵育 1 小时C。然后用TBST洗涤板3次，随后添加与HRP缀合的山羊抗兔抗血清。将板在 37°C 下孵育 1 小时，然后用 TBST 洗涤 3 次。细胞测定：将细胞（HUVEC 和过表达 PDGFRβ 或 EGFR 的 NIH-3T3 细胞）接种（3 × 105 个细胞/35 mm 孔）于含有 10% (v/v) FBS 的 DMEM 中，生长至汇合，然后在 DMEM 中静止药物治疗前2小时含0.1%血清。 HUVEC（以 2 × 106 个细胞/10 cm 板接种）在内皮细胞生长培养基中生长至汇合，然后在药物治疗前在含有 0.5% FBS 的内皮细胞基础培养基中静默 24 小时。所有细胞系均与 SU6668 一起孵育 1 小时，然后配体刺激 (100 ng/mL) 10 分钟。

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奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）抑制人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖，IC₅₀为0.8μM；同时抑制HUVECs形成毛细血管样管腔，并阻断血管内皮生长因子（VEGF）诱导的迁移，5μM时最大抑制率约为85%[1]
奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）抑制K562细胞中c-kit酪氨酸激酶活性，10μM时可使下游信号分子（Akt和ERK1/2）的磷酸化水平降低约60%；对患者急性髓系白血病（AML）原始细胞具有诱导凋亡作用，20μM处理48小时后凋亡细胞比例增加35%[2]
奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）降低结直肠癌细胞系（HT-29和HCT-116）的活性，IC₅₀分别为7.3μM和9.1μM；10μM处理HT-29细胞24小时后，可使血管生成因子（VEGF和bFGF）的mRNA表达水平下调约50%[3]

TSU-68 (75-200 mg/kg) 可诱导无胸腺小鼠异种移植模型中多种肿瘤类型的肿瘤生长抑制，包括 A375、Colo205、H460、Calu-6、C6、SF763T 和 SKOV3TP5 细胞。 TSU-68 (75 mg/kg) 还抑制 C6 神经胶质瘤异种移植物的肿瘤血管生成。在 HT29 人类结肠癌肿瘤模型中，TSU-68 (200 mg/kg) 降低了肿瘤边缘和核心的平均血管通透性和平均血浆体积分数。 TSU-68 促进癌症周围的异常基质发育。在兔 VX2 肝肿瘤模型中，TSU-68 (200 mg/kg) 增强化疗输注的效果。

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奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）以100mg/kg/天的剂量口服给药21天，可诱导裸鼠体内已建立的MDA-MB-231乳腺肿瘤消退，与对照组相比肿瘤体积减少约65%；通过CD31免疫染色检测，肿瘤微血管密度降低约70%[1]
奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）以50mg/kg/天和100mg/kg/天的剂量口服给药28天，可抑制BALB/c小鼠体内实验性结直肠癌（CT26）的生长，肿瘤生长抑制率分别为42%和68%，同时减少肿瘤血管生成并增加肿瘤细胞凋亡[3]
奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）在兔VX2肝肿瘤模型中可增强化疗灌注的抗肿瘤效果。以50mg/kg/天的剂量口服给药14天，联合肝动脉灌注丝裂霉素C，与单独使用丝裂霉素C相比，肿瘤体积减少约80%[4]

酪氨酸激酶测定在 96 孔微量滴定板中使用，该板已在 PBS 中预涂（20 μg/孔），并与肽底物聚-Glu,Tyr (4:1) 在 4 °C 下孵育过夜。这些测定的目的是量化 Flk-1 和 FGFR1 的转磷酸化活性。 PBS 中百分之一到百分之五 (w/v) 的 BSA 用于封闭多余的蛋白质结合位点。然后用纯化的 GST-FGFR1（激酶结构域）或 GST-Flk-1（细胞质结构域）融合蛋白填充微量滴定孔，该融合蛋白溶于 2 倍浓度的激酶稀释缓冲液中，该缓冲液含有 40 μM NaVO₄、50 mM NaCl、100 mM HEPES 和 0.02% (w/v) BSA。对于 GST-Flk-1 和 GST-FGFR1，最终酶浓度为 50 ng/mL。 SU6668以100×最终所需浓度溶解在DMSO中后，用H₂O稀释1:25。然后每个反应孔中填充 25 μL 稀释的 SU6668。将不同浓度的 ATP 添加到 MnCl2 溶液中以启动激酶反应。 MnCl₂ 的最终浓度为 10 mM，最终 ATP 浓度跨越酶的 Km。在添加 EDTA 终止反应之前，将板在室温下孵育 5 至 15 分钟。然后用TBST洗板3次。在含有 0.5% (w/v) BSA、0.025% (w/v) 脱脂奶粉和 100 μM NaVO₄ 的 TBST 中，将兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清按 1:10,000 稀释并添加到孔中。孵化过程在 37°C 下持续一小时。接下来，在 3 次 TBST 洗涤后，将与 HRP 缀合的山羊抗兔抗血清添加到板中。将板在 37°C 下孵育一小时后，进行 3 次 TBST 洗涤。向每个孔中添加2,2后，测量磷酸酪氨酸的量。

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将重组VEGFR2、PDGFRβ和FGFR1激酶与相应底物及ATP在不同浓度的奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）存在下孵育，采用比色法检测磷酸化底物以衡量激酶活性，通过绘制药物浓度与激酶抑制率的关系曲线计算IC₅₀值[1]
使用重组c-kit蛋白和多肽底物进行c-kit激酶活性检测，反应体系中加入不同浓度的奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68），通过液体闪烁计数法定量底物的磷酸化水平，从量效曲线中确定IC₅₀值[2]

在含有 10% (v/v) FBS 的 DMEM 中，接种细胞（HUVEC 和过表达 PDGFRβ 或 EGFR 的 NIH-3T3 细胞）（3 × 10₅ 细胞/35 mm 孔），生长至汇合，然后在药物处理前在含有0.1％血清的DMEM中静默两小时。以 2 × 10₆ 细胞/10 cm 板的密度接种后，HUVEC 在内皮细胞生长培养基中生长至汇合，随后在含有 0.5% FBS 的内皮细胞基础培养基中静默 24 小时药物治疗前。在用配体 (100 ng/mL) 刺激 10 分钟之前，所有细胞系均与 SU6668 一起孵育 1 小时。

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将HUVECs接种到96孔板中，用0.1-20μM的奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）处理72小时，采用四唑盐法检测细胞活性并计算IC₅₀值；管腔形成实验中，将HUVECs接种到基质胶包被的孔中并加入药物处理，12小时后计数毛细血管样管腔的数量[1]
用不同浓度的奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）处理K562细胞和AML原始细胞48小时，通过蛋白质印迹法检测Akt和ERK1/2的磷酸化水平，采用 Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术评估细胞凋亡情况[2]
用奥拉替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）处理结直肠癌细胞（HT-29和HCT-116）24-72小时，MTT法检测细胞活性；以GAPDH为内参，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）定量VEGF和bFGF的mRNA表达水平[3]

A375、Colo205、H460、Calu-6、C6、SF763T 和 SKOV3TP5 肿瘤细胞异种移植小鼠（雌性，BALB/c，nu/nu）
75-200 mg/kg
每日一次腹腔注射或灌胃给药。

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采用无胸腺小鼠皮下移植 HT29 人结肠癌肿瘤模型。使用大分子对比剂进行动态对比增强磁共振成像 (DCE-MRI) 以测量跨内皮通透性和血浆容积分数，这些指标是公认的肿瘤血管生成替代标志物。采用 CD31 免疫组化染色评估微血管密度和血管面积。分别在治疗后 24 小时、3 天、7 天和 14 天进行实验。结果：动态增强磁共振成像（DCE-MRI）清晰地检测到SU6668治疗24小时后对肿瘤血管的早期影响，表现为肿瘤边缘和核心区域的平均血管通透性分别下降51%和26%。肿瘤边缘（59%）和核心区域（35%）的平均血浆容积分数也显著降低。组织学结果证实了磁共振成像的发现。治疗3、7和14天后，增强磁共振图像显示肿瘤周边存在一条细长的强强化组织带；组织学检查表明，该强强化环对应于肿瘤邻近但位于肿瘤外部的血管丰富的组织。组织学还显示，肿瘤周边存活组织的厚度显著减少，血管数量也大幅下降。 SU6668 显著抑制肿瘤生长，治疗 14 天后抑制率达 60%。[3]

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将携带 MDA-MB-231 乳腺肿瘤（100-150 mm³）的裸鼠随机分为对照组和治疗组。奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68） 悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素溶液中，以 100 mg/kg/天的剂量口服给药，持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积，并在治疗结束时处死小鼠，收集肿瘤组织进行微血管密度分析。[1]
将 CT26 结肠癌细胞皮下植入 BALB/c 小鼠体内。当肿瘤体积达到 50-100 mm³ 时，小鼠口服奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68），剂量为 50 或 100 mg/kg/天，持续 28 天。每周记录肿瘤的重量和体积，并对肿瘤组织进行 CD31 免疫组化染色和 TUNEL 检测 [3]。将 VX2 肿瘤组织植入新西兰白兔的肝脏。两周后，将兔子随机分为四组：对照组、单独使用丝裂霉素 C 组（肝动脉灌注，0.5 mg/kg）、单独使用奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）组（口服，50 mg/kg/天）和联合用药组。治疗持续时间为14天，治疗前后均采用计算机断层扫描测量肿瘤体积[4]

代谢/代谢物
TSU-68 已知的人类代谢物包括 TSU-68 代谢物 1、TSU-68 代谢物 2 和 TSU-68 代谢物 3。

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奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68） 在小鼠单次服用 100 mg/kg 后，口服生物利用度约为 35%。血浆半衰期约为 4.2 小时，给药后 1 小时达到最大血浆浓度 (Cmax) 为 2.8 μg/mL [1]
在兔中，口服 50 mg/kg 的奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）后，Cmax 为 1.9 μg/mL，AUC₀-24h 为 12.6 μg·h/mL。该药物广泛分布于各种组织中，肝脏和肾脏中的浓度最高 [4]

小鼠接受奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）治疗，剂量为100 mg/kg/天，持续21天，未观察到明显的体重减轻或器官毒性。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平在正常范围内[1]。
兔子接受奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）治疗，剂量为50 mg/kg/天，持续14天，其中20%的动物出现轻微的胃肠道症状（厌食和腹泻），停药后症状消失。未检测到严重的血液学或肾脏毒性[4]
通过平衡透析法测定，奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68）在人血浆中的血浆蛋白结合率约为92%[2]

[1]. SU6668 is a potent antiangiogenic and antitumor agent that induces regression of established tumors. Cancer Res, 2000, 60(15), 4152-4160.

[2]. The antiangiogenic protein kinase inhibitors SU5416 and SU6668 inhibit the SCF receptor (c-kit) in a human myeloid leukemia cell line and in acute myeloid leukemia blasts. Blood, 2001, 97(5), 1413-1421.

[3]. In vivo assessment of antiangiogenic activity of SU6668 in an experimental colon carcinoma model. Clin Cancer Res, 2004, 10(2), 739-750.

[4]. Augmentation of chemotherapeutic infusion effect by TSU-68, an oral targeted antiangiogenic agent, in a rabbit VX2 liver tumor model. Cardiovasc Intervent Radiol. 2012 Feb;35(1):168-75.

奥兰替尼已用于多种癌症的治疗试验，包括肺癌、乳腺癌、肾癌、胃癌和前列腺癌等。
奥兰替尼是一种口服生物利用度高的受体酪氨酸激酶抑制剂。SU6668 可与血管内皮生长因子受体 2 (VEGFR2)、血小板衍生生长因子受体 (PDGFR) 和成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 结合并抑制其自身磷酸化，从而抑制血管生成和细胞增殖。SU6668 还可抑制干细胞因子受体酪氨酸激酶 c-kit 的磷酸化，该激酶通常在急性髓系白血病细胞中表达。

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血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子 (FGF) 和血小板衍生生长因子 (PDGF) 及其相应的受体酪氨酸激酶与实体瘤相关的血管生成密切相关。我们运用合理的药物设计结合传统筛选技术，发现了新型受体抑制剂SU6668。利用分离的Flk-1、FGF受体1和PDGF受体β激酶进行的生化动力学研究表明，SU6668对ATP具有竞争性抑制作用。SU6668与FGF受体1催化结构域的共晶体学研究证实了其吲哚核心的腺嘌呤模拟特性。SU6668在Flk-1/KDR和PDGF受体激酶ATP结合口袋中的分子建模，有助于解释SU6668对这些受体的相对效力和选择性。在细胞系统中，SU6668能够抑制受体酪氨酸磷酸化和细胞在适当配体刺激后的有丝分裂。在无胸腺小鼠中，口服或腹腔注射SU6668可显著抑制多种人类肿瘤异种移植模型（包括胶质瘤、黑色素瘤、肺癌、结肠癌、卵巢癌和表皮样癌）的生长。此外，在背部皮肤褶皱腔模型中，对C6胶质瘤异种移植模型进行活体多重荧光显微成像显示，SU6668治疗可抑制肿瘤血管生成。最后，SU6668治疗可显著消退已建立的大型人类肿瘤异种移植模型。目前正在进行SU6668在癌症患者中的I期临床试验。[1] SU5416和SU6668是强效的抗血管生成小分子受体酪氨酸激酶抑制剂，包括血管内皮生长因子受体和血小板衍生生长因子受体家族的抑制剂。干细胞因子 (SCF) 受体 c-kit 在结构上与这些受体相关，虽然在成熟的外周血细胞上不表达，但在 60% 至 80% 的急性髓系白血病 (AML) 患者的白血病原始细胞中表达。本研究在人髓系白血病细胞系 MO7E 细胞中评估了 SU5416 和 SU6668 对 c-kit 激酶的抑制活性。在这些细胞中，SU5416 和 SU6668 以剂量依赖的方式抑制了 SCF 诱导的受体酪氨酸自磷酸化（半数抑制浓度 [IC50] 为 0.1-1 μM）。此外，SU5416 和 SU6668 还以剂量依赖的方式抑制了 c-kit 激活下游的信号通路——细胞外信号调节激酶 1/2 (ERK1/2) 的磷酸化。两种化合物均能抑制SCF诱导的MO7E细胞增殖（SU5416的IC50为0.1 μM；SU6668的IC50为0.29 μM）。此外，SU5416和SU6668均能以剂量和时间依赖的方式诱导细胞凋亡，表现为活化caspase-3的增加及其底物聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）裂解的增强。这些在MO7E细胞中观察到的结果也适用于c-kit(+)患者的白血病原始细胞。在患者原始细胞中，SU5416和SU6668均能抑制SCF诱导的c-kit和ERK1/2磷酸化，并诱导细胞凋亡。这些研究表明，SU5416 和 SU6668 除了具有抗血管生成特性外，还能抑制 c-kit 的生物学功能，提示这些活性的联合应用可能为 AML 的治疗提供一种新的治疗方法。[2]

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奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68） 是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂，具有强大的抗血管生成和抗肿瘤活性，其作用机制是通过阻断 VEGFR、PDGFR、FGFR 和 c-kit 的信号通路。[1]
奥兰替尼（SU 6668；NSC-702827；TSU68） 的抗肿瘤作用主要通过抑制肿瘤血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡来实现，使其成为与化疗联合治疗的潜在候选药物。[3]
在 AML 原始细胞中，奥兰替尼（SU 6668） 6668；NSC-702827；TSU68）靶向表达c-kit的细胞，提示其在治疗c-kit阳性血液系统恶性肿瘤方面具有潜在应用价值[2]

C18H18N2O3

310.35

310.131

C, 69.66; H, 5.85; N, 9.03; O, 15.47

252916-29-3

(Z)-Orantinib;210644-62-5

5329099

Yellow to orange solid powder

1.3±0.1 g/cm3

590.5±50.0 °C at 760 mmHg

310.9±30.1 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.675

2.49

82.19

3

3

4

23

516

0

CC1=C(/C=C2C3=CC=CC=C3NC/2=O)NC(C)=C1CCC(O)=O

NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N

InChI=1S/C18H18N2O3/c1-10-12(7-8-17(21)22)11(2)19-16(10)9-14-13-5-3-4-6-15(13)20-18(14)23/h3-6,9,19H,7-8H2,1-2H3,(H,20,23)(H,21,22)/b14-9-

3-[2,4-dimethyl-5-[(Z)-(2-oxo-1H-indol-3-ylidene)methyl]-1H-pyrrol-3-yl]propanoic acid

Orantinib; NSC 702827; NSC-702827; NSC702827; TSU68; TSU-68; SU-6668; SU 6668; SU6668; NSC702827; TSU 68

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 10 mg/mL (32.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 100.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。