COX-2; IL-1;βCaspase-3; Caspase-8; Caspase-9

多巴胺的盐酸氧化（0-500 μM，24 小时）以浓度依赖性方式降低 Neuro-2a 细胞和 SH-SY5Y 细胞的活力 [1]。盐酸氧化多巴胺（75-150 μM，0-24 小时）以促进 COX-2 表达。 OxydopamineHClide (75-150 μM, 0-24 h) 诱导 PGE 2 生物合成和促炎细胞因子 IL-1β 的产生。 [1]。盐酸奥羟停胺（0-150 μM，12 小时）和核转位 [1]。 ）促进碱性电泳细胞癌PC12细胞中线粒体膜离域和线粒体膜离域[3]。盐酸奥多巴明（75 μM，0-12 小时）促进 p38 磷酸化 [3]。 [1]

当盐酸羟多巴胺（5μg/2μL）单侧注射到右侧纹状体时，黑质中的多巴胺能神经元发生退化[2]。

环氧合酶-2（COX-2）主要通过产生激活四种膜受体EP1-EP4的前列腺素E2（PGE2）来触发促炎过程，从而在许多神经疾病中加重神经元变性和功能损伤。然而，哪种EP受体是COX-2/PGE2介导的神经元炎症和变性的罪魁祸首在很大程度上仍不清楚，可能取决于损伤类型和反应成分。在此，我们证明了用神经毒素6-羟基多巴胺（6-OHDA）处理后，COX-2在小鼠Neuro-2a和人SH-SY5Y两种神经元细胞系中被诱导并显示出核移位，导致PGE2的生物合成和促炎细胞因子白细胞介素-1β的上调。抑制COX-2或微粒体前列腺素E合成酶-1抑制了这些细胞中6-OHDA-三重PGE2的产生。用PGE2或EP2选择性激动剂布他前列素而不是EP4激动剂CAY10598处理，增加了两种细胞系中的cAMP反应。PGE2在这些细胞中引发的cAMP产生被我们最近开发的新型选择性EP2拮抗剂TG4-155和TG6-10-1阻断，但没有被EP4选择性拮抗剂GW627368X阻断。6-OHDA驱动的细胞毒性在很大程度上被TG4-155、TG6-10-1或COX-2选择性抑制剂塞来昔布阻断，但没有被GW627368X阻断。我们的结果表明，PGE2受体EP2是6-OHDA处理后Neuro-2a和SH-SY5Y细胞中COX-2活性启动的cAMP信号传导的关键介质，并有助于氧化多巴胺介导的神经毒性[1]。

细胞活力测定[1]
细胞类型： Neuro-2a 细胞和 SH-SY5Y 细胞
测试浓度： 0-500 µM
孵育持续时间：24或48小时
实验结果：以浓度依赖性方式诱导Neuro-2a细胞和SH-SY5Y细胞产生神经毒性细胞毒性。在 Neuro-2a 细胞中，EC50=111 µM（孵育 24 小时）和 109 µM（孵育 48 小时）；在 SH-SY5Y 细胞中，24 小时EC50=118 µM，48 小时EC50=107 µM。

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RT-PCR[1]
细胞类型： Neuro-2a 细胞和 SH-SY5Y 细胞
测试浓度： 75 或 150 µM
孵育持续时间：0、6 或 24 小时
实验结果：一次快速、稳健地诱导 COX-2依赖方式。诱导 COX-2 激活，其特征是诱导表达和核转位。培养基中的 PGE2 在 Neuro-2a 细胞 (75 µM) 中显着增加近 5 倍，在 SH-SY5Y 细胞 (150 µM) 中显着增加 3 倍。 Neuro-2a 细胞和 SH-SY5Y 细胞中促炎细胞因子白细胞介素 1β (IL-1β) 显着上调。

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细胞凋亡分析 [3]
细胞类型： PC12 细胞浓度

The present study was undertaken to investigate the neuroprotective effects of resveratrol on 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced Parkinson's disease in rats. 6-OHDA-induced Parkinson's disease rat model involves chronic inflammation, mitochondrial dysfunction, and oxidative stress, and the loss of the dopaminergic neurons in the substantia nigra is the predominant lesion. Resveratrol has been shown to have anti-inflammatory actions, and thus was tested for its beneficial effects using 6-OHDA-induced Parkinson's disease rat model. Adult Sprague-Dawley (SD) rats were unilaterally injected with 6-OHDA (5 microg/2 microl) into the right striatum, and the striatum damage was assessed by rotational test, ultrahistopathology, and molecular alterations. Resveratrol (10, 20 and 40 mg/kg) was then given orally to Parkinson's disease rats, daily for 10 weeks to examine the protective effects. Rotational test (turns of rats) showed that resveratrol significantly attenuated apomorphine-induced turns of rats in 6-OHDA-injuried Parkinson's disease rat model as early as two weeks of administration. Ultrastructural analysis showed that resveratrol alleviated 6-OHDA-induced chromatin condensation, mitochondrial tumefaction and vacuolization of dopaminergic neurons in rat substantia nigra. Furthermore, resveratrol treatment also significantly decreased the levels of COX-2 and TNF-alpha mRNA in the substantia nigra as detected by real-time RT-PCR. COX-2 protein expression in the substantia nigra was also decreased as evidenced by Western blotting. These results demonstrate that resveratrol exerts a neuroprotective effect on 6-OHDA-induced Parkinson's disease rat model, and this protection is related to the reduced inflammatory reaction.[2].

[1]. Cyclooxygenase-2 contributes to oxidopamine-mediated neuronal inflammation and injury via the prostaglandin E2 receptor EP2 subtype. Sci Rep. 2017 Aug 25;7(1):9459.

[2]. Neuroprotective effect of resveratrol on 6-OHDA-induced Parkinson's disease in rats. Eur J Pharmacol. 2008 Dec 14;600(1-3):78-82.

[3]. Cell-permeable cAMP analog suppresses 6-hydroxydopamine-induced apoptosis in PC12 cells through the activation of the Akt pathway. Brain Res. 2006 Oct 3;1113(1):10-23.

[4]. Autoxidation and neurotoxicity of 6-hydroxydopamine in the presence of some antioxidants: potential implication in relation to the pathogenesis of Parkinson's disease. J Neurochem. 2000 Apr;74(4):1605-12.

6-hydroxydopamine hydrochloride is a beige solid. (NTP, 1992)
A neurotransmitter analogue that depletes noradrenergic stores in nerve endings and induces a reduction of dopamine levels in the brain. Its mechanism of action is related to the production of cytolytic free-radicals.

C₈H₁₂CLNO₃

205.64

205.051

C, 46.73; H, 5.88; Cl, 17.24; N, 6.81; O, 23.34

28094-15-7

1199-18-4; 28094-15-7 (HCl); 636-00-0 (HBr)

160157

White to gray solid

406ºC at 760 mmHg

232-233ºC (dec.)(lit.)

199.3ºC

3.58E-07mmHg at 25°C

1.806

86.71

5

4

2

13

142

0

OC1=CC(CCN)=C(O)C=C1O.[H]Cl

QLMRJHFAGVFUAC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C8H11NO3.ClH/c9-2-1-5-3-7(11)8(12)4-6(5)10;/h3-4,10-12H,1-2,9H2;1H

2,4,5-Trihydroxyphenethylamine hydrochloride

6-Hydroxydopamine hydrochloride; 28094-15-7; 6-Hydroxydopamine hydrochloride; 5-(2-aminoethyl)benzene-1,2,4-triol hydrochloride; 6-Hydroxydopamine chloride; Oxidopamine (hydrochloride); 2,4,5-Trihydroxyphenethylamine hydrochloride; 6-HYDROXYDOPAMINE HCL; 6-OHDA hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。  (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~100 mg/mL (~486.29 mM)
DMSO : ~83.33 mg/mL (~405.22 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (10.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (10.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 100 mg/mL (486.29 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。