| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PARP-1 (pIC50 = 8.22); PARP-2 (pIC50 = 8.44); PI3Kα (pIC50 = 8.25); PI3Kδ (pIC50 = 8.13); PI3Kγ (pIC50 = 6.08); PI3Kβ (pIC50 = 6.54)
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| 体外研究 (In Vitro) |
施用 PARP/PI3K-IN-1（化合物 15；1 μM；72 小时）时，细胞凋亡显着增加 [1]。用1μM的PARP/PI3K-IN-1处理细胞72小时后，AKT和S6的自磷酸化水平降低，而ERK的自磷酸化水平升高。这表明该化合物具有抑制和激活 PI3K 和 ERK 通路的能力 [1]。 PARP/PI3K-IN-1 (1 μM) 可在 mRNA 水平显着下调 MDA-MB-468 癌细胞中的 BRCA1/2 表达 [1]。除了对富含 BRCA 的细胞 MDA-MB-231 和 MDA-MB-468 表现出强大的抗增殖作用外，PARP/PI3K-IN-1 还对 BRCA 缺陷细胞 HCC1937 和 HCT116 显示出相当大的抑制作用 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
PARP/PI3K-IN-1（腹膜内注射；50 mg/kg；每天两次（BID），持续 34 天）显着抑制肿瘤生长[1]。
体内抗肿瘤作用研究[1] 基于化合物14和CAY10749（PARP/PI3K-IN-1；化合物15）在体外具有优异的酶活性和抗增殖活性，我们在MDA-MB-468异种移植物小鼠模型中评估了它们的体内抗肿瘤活性。化合物14和15、奥拉帕尼、BKM120以及奥拉帕尼和BKM120的组合通过腹腔注射每天两次（BID）给药，连续34天。如图9所示，化合物14和CAY10749（PARP/PI3K-in-1；化合物15）在50mg kg–1的剂量下显著抑制了肿瘤生长，并且它们都具有良好的耐受性，没有死亡。14（TGI:52.7%）和15（TGI:73.4%）的肿瘤抑制效果均优于奥拉帕尼（TGI:28.5%）和BKM120（TGI:33.4%），甚至奥拉帕尼与BKM120的组合（TGI:48.4%）。同样值得注意的是，在整个过程中没有观察到明显的重量波动。结果表明，双PARP/PI3K抑制剂在抗肿瘤疗效方面优于单靶点抑制剂。 体内蛋白质印迹分析[1] 由于CAY10749（PARP/PI3K-IN-1；化合物15）在体内显示出更有前景的抗肿瘤活性，因此进行了机理研究，以支持我们的结论，即CAY10749PARP/PI3K双重靶向能力确实产生了显著的抗肿瘤作用。对MDA-MB-468荷瘤小鼠切除的肿瘤组织进行了蛋白质印迹分析。与体外Western blot分析一致，化合物15强烈抑制pAKT和pS6的表达，同时刺激pERK和pETS1的表达（图10）。此外，15显著下调了BRCA1/2的表达，并增加了切割的PARP水平。总之，我们的药物化学努力导致了化合物15的发现，证明了用单一化学实体对PARP和PI3K的双重抑制是可行的。 |
| 酶活实验 |
体外PARP抑制试验[1]
根据先前报道的程序进行PARP-1和PARP-2抑制试验。通过ELISA在96孔板中测定受试化合物对无细胞系统中PARP-1和PARP-2酶活性的抑制作用。每个孔都用稀释在100μL PBS缓冲液（10 mM NaH2PO4、10 mM Na2HPO4、150 mM NaCl，pH 7.4）中的组蛋白（20μg/mL）预涂，并在37°C下孵育过夜。孵育后，使用200μL PBST缓冲液（含0.05%（v/v）吐温20的1x PBS）洗涤平板三次，并在室温下用200μL阻断缓冲液（含有5%（v/v”脱脂乳的1x PBST）阻断60分钟。随后，如上所述，用200μL PBST缓冲液洗涤平板三遍。将稀释在70μL反应缓冲液（50 mM Tris-HCl，2 mM MgCl2，pH 8.0）中的生物素化NAD+（8μM）和活化剂脱氧寡核苷酸（100μg/mL）加入每个孔中，然后加入10μL不同浓度的化合物或溶剂对照。待测化合物在10%（v/v）DMSO中稀释，以1μM的浓度开始以3倍的连续稀释度进行10次剂量测试。通过在37°C下加入20μL PARP-1或PARP-2（10 ng/孔）1小时来引发反应。丢弃反应混合物，用200μL PBST缓冲液洗涤板三次，并如上所述轻拍在干净的纸巾上。接下来，向每个孔中加入50μL链霉抗生物素蛋白-HRP，并在室温下孵育30分钟。用200μL PBST缓冲液洗涤该板三次，并如上所述轻拍在干净的纸巾上。最后，加入100μL ECL溶液，在室温下孵育15分钟。使用多孔分光光度计测量发光信号。PARP-1或PARP-2酶活性的抑制率计算为（Lu对照-Lu处理/Lu对照）×100%。使用Prism GraphPad软件，使用归一化剂量-反应拟合的非线性回归计算PARP-1或PARP-2酶活性50%抑制所需的浓度（IC50）。 体外PI3K抑制试验[1] 该测定使用ADP-Glo Plus发光激酶测定试剂盒进行。50μL PI3K异构体反应混合物含有10 mM Tris-HCl、pH 7.5、25μM ATP、9.75μM PIP2、5%（v/v）甘油、4 mM MgCl2、50 mM NaCl、0.05%（v/v”Chaps）、1 mM二硫苏糖醇和2%（v/v“DMSO，每种异构体的浓度如下：PI3Kα、β为60 ng/mL；8 ng/mL的PI3Kγ；待测化合物在10%（v/v）DMSO中稀释，以1μM的浓度开始以3倍的连续稀释进行10次剂量测试。将测定板覆盖并在室温下孵育（PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ孵育1小时，PI3Kδ孵育2小时）。接下来，加入50μL ADP-Glo试剂，在室温下孵育40分钟，然后用50μL激酶检测混合物再孵育30分钟。使用多孔分光光度计测量发光信号。IC50值使用Prism GraphPad软件通过归一化剂量-反应拟合的非线性回归计算。 |
| 细胞实验 |
细胞凋亡分析[1]
细胞类型： MDA-MB-468 癌细胞 测试浓度： 1 μM 孵育时间：72小时 实验结果：导致细胞凋亡显着增加。 蛋白质印迹分析 [1] 细胞类型： MDA-MB-468 癌细胞 测试浓度： 1 μM 孵育时间：72小时 实验结果：处理细胞后，AKT和S6的自磷酸化水平降低，ERK的自磷酸化水平降低增加。 细胞增殖抑制试验[1] 人癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468、HCT116、HCC1937、BxPC-3、A2780、Jurkat、DU145、A549、Caki-1、Ramos和SW620在含有10%（v/v）FBS的RPMI1640培养基中，在37°C下，在5%（v/v）CO2湿润培养箱中维持。细胞增殖试验通过Cell Titer Glo细胞活力试验确定。简而言之，在给药前一天将细胞传代到96孔板中，使其生长12小时，然后在5%CO2、37°C下用不同浓度的化合物处理7天（详见表S2）。孵育后，将100μL Cell Titer Glo试剂加入到测定板中，然后在室温下孵育10分钟以稳定发光信号，并由Envision平板阅读器读取。抑制率（%）=（1–（RLU化合物–RLU空白）/（RLU DMSO–RLU空））×100%。IC50值使用非线性回归计算，并使用XLFit软件进行归一化剂量-反应拟合。 蛋白质印迹分析[1] 将MDA-MB-468细胞接种到六孔板中并孵育过夜，然后用或不用不同浓度的化合物（BKM120（1μM）、Olaparib（2μM），BKM120+1μM+Olaparib2μM、14μM和15μM）处理6小时；使用含有1‰（v/v）DMSO的培养基作为对照。在冰冷的裂解缓冲液中收集细胞样本。在4°C下以14000 rpm的速度离心10分钟，清除裂解物，取出上清液，使用Pierce BCA蛋白检测试剂盒检测蛋白质浓度。将细胞裂解物装载至8-12%SDS-PAGE，并通过电泳进行分离。然后将分离的蛋白质电转移到聚偏二氟乙烯膜上，用5%牛血清白蛋白/TBST封闭1小时。膜与以下一抗杂交：磷酸化AKT（pAKT-Ser473）、总AKT、磷酸化S6（pS6-Ser240）、总S6、磷酸化ERK（pERK-Thr202）、总ERK、磷酸化ETS1（pETS1-Thr38）、总ETS1、BRCA1、BRCA2、切割PARP和1%脱脂奶粉中的β-actin。在与HRP偶联的二抗杂交后，使用增强化学发光法对条带进行可视化，然后通过ImageJ软件进行定量。 实时荧光定量PCR[1] 使用实时PCR检测BRCA1或BRCA2 mRNA的相对表达。简而言之，根据制造商的说明，用TRIzol试剂从培养的细胞中提取总RNA。使用带有gDNA橡皮擦的PrimeScript RT试剂盒进行逆转录反应。对于转录物定量，使用实时PCR系统，使用PrimeScript RT Master Mix进行基于SYBR Green的qPCR。人BRCA1正向引物为5′-GTCCCCATCTGTGAGTGA-3′，反向引物为5’-AAAGGACACTGTGAAGGCCC-3′。人BRCA2正向引物为5′-AAAGGACACTGTGAAGGCCC-3′，反向引物为5’-TTCTCTCTTCATCATCGG-3′。GAPDH被用作内部控制。结果以相对于内部控制的倍数变化表示。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 6周龄雄性BALB/c裸鼠，MDA-MB-468细胞[1]
剂量： 50 mg/kg 给药途径： 腹腔注射；每日两次（BID），持续34天 实验结果： 肿瘤生长显著受到抑制。 体内抗肿瘤活性研究[1] 使用6周龄雄性BALB/c裸鼠。动物实验许可号为SCXK（北京）2016-0011。在接种前，于指数生长期收集MDA-MB-468细胞。将2 × 10⁶个细胞皮下接种于每只BALB/c裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为五组治疗组和一组对照组。每组6只小鼠，每2天腹腔注射一次奥拉帕尼（50 mg kg⁻¹）、BKM120（27.5 mg kg⁻¹）、奥拉帕尼+BKM120（50 mg kg⁻¹ + 27.5 mg kg⁻¹）、化合物14（50 mg kg⁻¹）和化合物15（50 mg kg⁻¹），持续34天。以等体积的PBS（5% DMSO，v/v）作为阴性对照。治疗期间，每2天测量一次肿瘤大小和小鼠体重。肿瘤体积（V）采用公式V = ab²/2计算，其中a和b分别代表游标卡尺测量的肿瘤最长径和最短径。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
同时抑制PARP和PI3K通路已被认为是一种有前景的癌症治疗策略，有望拓展PARP抑制剂的临床应用。本文报道了我们发现的双重PARP/PI3K抑制剂，该抑制剂融合了PARP和PI3K抑制剂的药效团。其中，化合物15脱颖而出，成为最有希望的候选药物，其对PARP-1/2和PI3Kα/δ均具有强效抑制活性，pIC50值大于8。细胞实验表明，化合物15对BRCA缺陷型和BRCA正常型癌细胞均表现出优异的抗增殖活性。通过全面的生化和细胞机制研究，阐明了同时抑制这两个靶点所产生的显著协同效应。在体内，化合物 15 在 MDA-MB-468 异种移植瘤模型中显示出比相应药物组合（奥拉帕尼 + BKM120）更有效的抗肿瘤活性，肿瘤生长抑制率达 73.4%，且未观察到明显的毒性作用。所有结果表明，化合物 15 作为首个高效的双重 PARP/PI3K 抑制剂，是一种高效的抗癌化合物。[1]
PARP 抑制剂的临床疗效仅限于携带 BRCA 突变的一小部分患者。最近有报道称，PI3K 抑制可以促进同源重组 (HR) 缺陷，并使 BRCA 功能正常的肿瘤对 PARP 抑制剂更加敏感。因此，PARP 和 PI3K 的联合靶向被认为是一种有前景的化疗策略，可以扩大 PARP 抑制剂的应用范围。为了获得双重 PARP/PI3K 抑制剂，我们结合 PARP 和 PI3K 抑制剂的药效团设计了先导化合物 1。随后进行了结构优化，重点在于提高抑制活性和改善抑制平衡，最终得到了候选化合物14和15。它们均表现出对PARP-1和PI3Kα的强效且平衡的抑制活性，pIC50值均大于8.22。化合物15对一系列BRCA功能正常的癌细胞表现出比奥拉帕尼更强的抗增殖活性。细胞机制研究表明，化合物14和15通过抑制PI3K信号通路、下调BRCA1/2表达以及诱导DNA损伤和细胞凋亡，显著抑制MDA-MB-468细胞的生长。在MDA-MB-468细胞来源的异种移植模型中，化合物14和15在50 mg kg⁻¹的剂量下表现出优异的抗肿瘤疗效，其疗效显著优于单用奥拉帕尼或BKM120，甚至优于二者联合用药。鉴于其结构以及令人鼓舞的体外和体内特性，化合物15作为首个双重PARP/PI3K抑制剂值得进一步研究。我们的数据表明，双重PARP/PI3K抑制剂具有良好的协同效应，应作为一种新型靶向疗法，针对多种肿瘤疾病进行广泛评估。[1] |
| 分子式 |
C33H28F4N8O3
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|---|---|
| 分子量 |
660.6208
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| 精确质量 |
660.2220
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| 元素分析 |
C, 60.00; H, 4.27; F, 11.50; N, 16.96; O, 7.27
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| CAS号 |
2337386-47-5
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| PubChem CID |
146014481
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.2
|
| tPSA |
139Ų
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| SMILES |
FC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1C(N1C([H])([H])C2=C(C(=NC(C3=C([H])N=C(C([H])=C3C(F)(F)F)N([H])[H])=N2)N2C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C2([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)C([H])([H])C1([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(N=N1)=O
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| InChi Key |
LIQDGVXNWJAUNO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C33H28F4N8O3/c34-25-6-5-18(14-26-19-3-1-2-4-20(19)31(46)43-42-26)13-22(25)32(47)45-8-7-21-27(17-45)40-29(41-30(21)44-9-11-48-12-10-44)23-16-39-28(38)15-24(23)33(35,36)37/h1-6,13,15-16H,7-12,14,17H2,(H2,38,39)(H,43,46)
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| 化学名 |
4-[[3-[2-[6-amino-4-(trifluoromethyl)pyridin-3-yl]-4-morpholin-4-yl-6,8-dihydro-5H-pyrido[3,4-d]pyrimidine-7-carbonyl]-4-fluorophenyl]methyl]-2H-phthalazin-1-one
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| 别名 |
PARP/PI3KIN1; CAY10749; CAY-10749; PARP/PI3K-IN-1; CHEMBL4470724; SCHEMBL23493529; LIQDGVXNWJAUNO-UHFFFAOYSA-N; CAY 10749; BDBM50520037; PARP/PI3K IN 1
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~151.37 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.78 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5137 mL | 7.5686 mL | 15.1373 mL | |
| 5 mM | 0.3027 mL | 1.5137 mL | 3.0275 mL | |
| 10 mM | 0.1514 mL | 0.7569 mL | 1.5137 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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COA
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463611831
