JAK3 (IC50 = 33.1 nM)
The target of Ritlecitinib (PF-06651600) is Janus Kinase 3 (JAK3), and it is a highly potent and selective JAK3 inhibitor. [1]

Ritlecitinib 是一种强效的 JAK3 选择性抑制剂，抑制 JAK3 激酶活性的 IC50 为 33.1 nM，但对 JAK1、JAK2 和 TYK2 没有活性 (IC50>10,000 nM)。 Ritlecitinib 的 IC50 值分别为 244、340、407 和 266 nM，抑制 IL-2、IL-4、IL-7 和 IL-15 诱导的 STAT5 磷酸化。 Ritlecitinib 的 IC50 为 355 nM，还可以防止 IL-21 诱导的 STAT3 磷酸化。根据功能评估，Ritlecitinib 在 T 细胞分化测定中抑制 Th1 和 Th17 分化（在 Th1 环境下 5 天后通过 IFNγ 测量，在 Th17 设置下 6 天后通过 IL-17 产生测量）（IC50 值：分别为 30 nM 和 167 nM） ）。此外，ritlecitinib 可抑制 Th1 和 Th17 功能，如在 PF-06651600 治疗前已经历分化和休眠的细胞中抑制 IFNγ 产生 (IC50=48 nM) 和 IL-17 产生 (IC50=269 nM) 所证明的[1] 。

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1. 对γc细胞因子信号通路的抑制作用：Ritlecitinib (PF-06651600) 能高效抑制依赖JAK1和JAK3的γc细胞因子信号通路。在相关免疫细胞中，该药物展现出的抑制效力和选择性达到了此前未实现的水平[1]
2. 对Th1和Th17细胞的影响：Ritlecitinib (PF-06651600) 在体外可抑制Th1和Th17细胞的分化与功能，且该抑制作用仅针对JAK3依赖的通路，不会影响JAK1介导的功能[1]
3. 对JAK1依赖的抗炎信号的保留作用：与泛JAK抑制剂或JAK1选择性抑制剂不同，Ritlecitinib (PF-06651600) 不会影响JAK1的功能，因此能保留JAK1依赖的抗炎信号。例如，该药物可维持脂多糖（LPS）处理后的巨噬细胞中IL-10的抑制功能，同时也能保留IL-27预处理的巨噬细胞中对TNFα和IL-1β产生的抑制作用[1]

Ritlecitinib 可减少大鼠佐剂诱导的关节炎 (AIA) 模型中的爪肿胀，未结合的 EC50 为 169 nM。在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型中，以 30 或 100 mg/kg 治疗性给药或以 20 或 60 mg/kg 预防性给药，可显着降低疾病的严重程度。 Ritlecitinib 在这两种啮齿动物模型中治疗炎症和自身免疫性疾病的有效性表明，仅选择性抑制 JAK3 可能足以改变人类疾病[1]。

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1. 对大鼠佐剂性关节炎模型的疗效：Ritlecitinib (PF-06651600) 可减轻大鼠佐剂性关节炎模型中的疾病病理表现，证明其在炎症性疾病模型中具有体内药效[1]
2. 对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的疗效：Ritlecitinib (PF-06651600) 同样能减轻小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的疾病病理，显示出其在自身免疫性疾病模型中的治疗潜力[1]
3. 体内对γc细胞因子通路的选择性靶向作用：由于Ritlecitinib (PF-06651600) 不影响JAK1功能，其在体内可选择性靶向γc细胞因子通路，同时维持JAK1依赖的抗炎反应，这一特性使其在免疫细胞应答方面区别于泛JAK抑制剂或JAK1抑制剂[1]

JAK酶测定。[1]
使用微流体测定法测定人Janus激酶（JAK）活性，以监测JAK家族四个成员JAK1、JAK2、JAK3和TYK2中每一个的重组人激酶结构域对合成肽的磷酸化。GST-标记的JAK1、JAK2和JAK3的重组人激酶结构域购自Life Technologies。他标记的重组人TYK2激酶结构域在SF21/杆状病毒中表达，并使用两步亲和（Ni-NTA）和大小排阻（SEC S200）纯化方法进行纯化。将试验化合物溶解在二甲基亚砜（DMSO）中，使其储备浓度为30mM。将化合物稀释在DMSO中，形成11点半对数稀释系列，最高浓度为600µM。测试化合物板还包含含有已知抑制剂的阳性对照孔以定义100%抑制，以及含有DMSO的阴性对照孔以确定无抑制。在测定中，将化合物板稀释1至60，得到10µM至100 pM的最终测定化合物浓度范围和1.7%DMSO的最终测定浓度。使用非接触式声学分配器将溶解在100%DMSO中的测试化合物和对照加入（250nL）到384孔聚丙烯板（Matrical）中。在室温下，在含有20mM HEPES、pH 7.4、10mM氯化镁、0.01%牛血清白蛋白（BSA）、0.0005%吐温20和1mM二硫苏糖醇（DTT）的15µL反应缓冲液中进行激酶测定。反应混合物含有1µM荧光标记的合成肽，其浓度小于表观米氏常数（Km）（对于JAK1和TYK2为5FAM-KSRGDYMTMQID，对于JAK2和JAK3为FITC-KGGEEEYFELVKK）。反应混合物含有三磷酸腺苷（ATP），其水平等于ATP的表观Km（JAK1为40µM，JAK2为4µM，JAK3为4µM，TYK2为12µM）或1mM ATP。将化合物加入到含有ATP和底物的缓冲液中，并在该步骤之后立即加入酶以开始反应。用15µL缓冲液停止测定，该缓冲液含有180 mM HEPES，pH=7.4，20 mM EDTA，0.2%包衣试剂，最终浓度为10 mM EDTA、0.1%包衣试剂和100 mM HEPES，pH=7.4。将测定板放置在Caliper Life Science Lab Chip 3000（LC3000）仪器或Caliper Life Science-EZ Reader仪器上，并使用适当的分离条件对每个孔进行取样，以确定磷酸化水平[1]

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JAK3的结合和失活动力学。[1]
使用基于LanthaScreen的时间分辨Förster共振能量转移（TRFRET）测定法测量PF-06651600与JAK3以及在JAK3中与Cys909相同位置包含Cys的一组激酶结合和失活的动力学 Eu激酶结合测定（Invitrogen/Life Technologies）。激酶特异性试剂和测定验证可在以下网址找到：https://www.thermofisher.com/us/en/home/industrial/pharma-biopharma/drug-discoverydevelopment/target-and-lead-identification-and-validation/kinasebiology/kinase-activityassays/lanthascreentm-eu-kinase-binding-assay/lanthascreen-eu-kinase-binding-assay-validationtable.html.测定缓冲液为20mM HEPES，pH 7.5，10mM MgCl2，0.01%BSA，1mM DTT，0.0005%Tween 20和2%DMSO。通过制备15µL（最终浓度）2 nM Eu-Ab、1-8 nM激酶（根据经验确定每种激酶的最佳浓度）和可变浓度的PF06651600的1.33μ溶液，并将其预孵育可变时间，进行灭活动力学反应（详见下文）。然后将其与5µL经验证探针的4X溶液（150 nM，最终浓度）合并。对于所有激酶，进行以下实验：（A）[PF-06651500]＝0、4.9、14.8、44.4、133.3和400nM；预孵育时间=2小时。（B）[PF-06651500]=0、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0µM；预孵育时间=120s。对于JAK3，进行以下额外实验：[PF-06651500]=0，0.66，1.98，5.93，17.8，53.3，160480 nM；预孵育时间为（C）30秒、（D）60秒和（E）1.5小时。使用EnVision平板读取器读取测定结果。激发波长为340nm，监测的输出是发射比，通过将探针发射峰值（665nm）的信号除以铕发射峰值（615nm）来计算。每120秒进行一次测量，持续1.5小时。重组TXK激酶（N-末端GST融合蛋白）与抗GST-Eu抗体（Life Technologies）和探针结合，未能产生合适的TR-FRET信号。因此，采用了另一种方法来测量kinact/Ki，利用经典的丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶（PK/LDH）偶联酶测定法。在PK/LDH测定中，ADP是激酶反应的产物，通过将其产生首先与磷酸烯醇式丙酮酸盐（PEP）的去磷酸化偶联以形成丙酮酸盐来测量，所述丙酮酸盐与丙酮酸的NADH依赖性还原偶联以形成乳酸盐。通过在340nm处的吸光度损失以分光光度法监测伴随的NADH氧化形成NAD+。TXK激酶缓冲液为：50mM HEPES，pH 7.5，10mM Mg2Cl，0.01%Triton X-100，1mM DTT和1%DMSO。还包括（PK/LDH测定试剂）：0.25 mM NADH（Sigma，N8129）、2.5 mM磷酸烯醇式丙酮酸盐（PEP）、12 U/mL丙酮酸激酶（PK）和18 U/mL乳酸脱氢酶（LDH）。最终底物浓度为每种ATP和Srctide肽100µM（序列：GEPLYWSFPAKK）。在每个实验中，将10µL PF-06651600溶液（预培养期间的浓度：0、10.4167、20.83、41.67、83.3、333.3、666.7、1333.3、2666.7 nM）与20µL含有TXK激酶的溶液（预孵育期间的浓度为34 nM）+PK/LDH溶液试剂组合。在可变时间的预孵育期（15分钟、30分钟、1小时、1.5小时和2小时）后，加入10µL的4¦ΒATP/肽底物以引发反应。

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PF-06651600的人血清白蛋白结合。[1]
获得在酿酒酵母中表达的人重组血清白蛋白（HSA）作为1.5mM溶液，并通过稀释到Dulbecco的磷酸盐缓冲盐水（PBS）中而不用进一步处理来使用。如图S3的图例所示，将HSA与从DMSO中制备的8mM储备溶液稀释到PBS中的化合物孵育22小时，之后使用Agilent 1100 HPLC系统和Waters LCT Premier XE质谱仪通过液相色谱-质谱法对蛋白质进行直接质量分析，如前所述1。使用MaxEnt 1软件（并入Waters MassLynx程序）从蛋白质峰上的平均光谱中提取蛋白质的质量分布，该软件运行20次迭代，目标质量范围为66000-67500 Da。

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人类肝细胞中的共价结合。[1]
将汇集的冷冻保存的人肝细胞以750000个细胞/mL（n=2）的最终浓度悬浮在Williams’E培养基（GIBCO，ThermoFisherScientific）中。基于台盼蓝排除的细胞活力>80%。将细胞悬浮液（4 mL）与放射性标记的底物（1µM）在37℃下孵育4小时。在240分钟取出等分试样，用乙腈骤冷，以3500rpm离心15分钟，并用有机溶剂（乙腈：甲醇、乙腈和乙腈：0.1%甲酸在水中）的组合进行彻底萃取（N=7）。监测上清液部分，直到放射性水平低于背景水平的两倍（80dpm）。将NaOH（1M）加入剩余的蛋白质颗粒中，并将其置于水浴中过夜以溶解，并通过液体闪烁计数测定总放射性。使用Bradford蛋白质测定法测定蛋白质浓度

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人全血中JAK3占据和p-STAT5抑制的LC-MS/MS。[1]
利用LC/MS-MS替代胰蛋白酶肽分析来测量不可逆共价抑制剂对JAK3的占用。使用人JAK3蛋白序列（Uniprot登录号P52333）来验证含有909Cys的胰蛋白酶肽的序列，909Cys是共价分子结合靶标。通过使用MS级胰蛋白酶/Lys-C酶混合物对JAK3蛋白进行胰蛋白酶切割，产生具有序列LVMEYLPSGCLR的有利大小的肽。通过MRM模式IA-LC-MS/MS分析测量与抑制剂和游离肽的结合，该分析包括在线抗肽抗体免疫亲和富集步骤。蛋白质和肽水平的双重免疫沉淀为从人类全血产生的PBMC样品中游离和结合的LVME肽提供了充足的样品富集。生物素化的抗人JAK3多克隆捕获抗体从Santa Cruz获得。新英格兰肽公司定制合成了含有胰蛋白酶切割位点的扩展序列稳定同位素标记（SIL）肽。。。

Th1细胞分化。[1]
冷冻保存的人正常外周血CD4+/CD45RA+/CD25-幼稚T细胞购自Allcells。冷冻的CD4+/CD45RA+/CD25-幼稚T细胞在水浴（37℃）中解冻，并用RPMI1640培养基洗涤一次。将细胞以200000个细胞/mL的速度重悬于含有10%胎牛血清（FBS）、IL-2（10 ng/mL）、IL-12（5 ng/mL），抗IL-4（5 ng/mL）、抗CD3（10µg/mL）和抗CD28（0.1µg/mL）抗体的RPMI培养基中。为了评估PF-06651600在Th1细胞分化期的作用，在11种不同浓度的JAK抑制剂（0.2%二甲基亚砜终产物）的存在下，将重悬的幼稚CD4+T细胞培养5天。根据制造商的说明，采集上清液并用MSD测量IFNγ的浓度。为了研究PF06651600对Th1细胞分化后的影响，将偏斜的Th1细胞重悬于含有10%FBS的RPMI培养基中，并在无细胞因子的条件下培养7小时。然后收获细胞，并在10%FBS、IL-2（10ng/mL）、IL-12（5ng/mL）和抗IL-4抗体（5ng/mL）加上11种不同浓度的PF-06651600的存在下在96孔板中再培养2天。如上所述测定IFNγ的浓度

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Th17细胞分化。[1]
用RosetteSep CD4+T细胞富集鸡尾酒从棕褐色外壳中纯化人CD4+T淋巴细胞，并在10种不同浓度的JAK抑制剂存在下，用细胞因子混合物（25 ng/mL IL-6、25 ng/mL IL-23、12.5 ng/mL IL-1β、25 ng/mL IL21、5 ng/mL TGFβ1、10µg/mL抗CD3抗体（预涂于板表面）和1µg/mL抗CD28抗体）偏斜6天。收集上清液，并按照制造商提供的方案用MSD测定法测定IL-17A的浓度。为了研究PF-06651600对分化后Th17细胞的影响，将偏斜的Th17细胞洗涤，用X-VIVO 15培养基（Lonza）静置过夜，并在10种不同浓度的PF-06651 600存在下，在含有与偏斜期间相同浓度的细胞因子但不含抗CD3或抗CD28抗体的培养基中再悬浮2天。在第9天，从每个孔收获上清液，并如上所述测定IL-17A

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JAK3在人类T细胞中的半衰期。[1]
CD4+细胞通过阴性选择从Buffy coat（SeraCare）中纯化并冷冻保存。将1000万个细胞在补充有10%FBS（Sigma）100U/mL青霉素/100µg/mL链霉素（Gibco）、2mM L-谷氨酰胺、100µM非必需氨基酸、1mM丙酮酸钠、20mM HEPES和2ng/mL IL-2的RPMI中解冻。在37°C的5%CO2中2小时后，加入CD3/CD28磁珠（3个磁珠/细胞的比例）。72小时后，珠子被移除，8亿个细胞被用于脉冲追逐实验。每个数据点使用了4000万个单元。用补充有500µCi S35标记的Cys/Met的培养基在37°C的5%CO2中补充细胞30分钟，然后在PBS中洗涤两次。然后将细胞在补充有200µM Cys/Met的培养基中孵育不同长度的时间，并在冷裂解缓冲液中裂解，然后在-80°C下储存。将裂解物在冰上解冻，并在4°C下用抗JAK3抗体进行免疫沉淀过夜。使用G蛋白磁珠来捕获抗JAK3抗体。然后将JAK3在60µl Laemmli中用5%BME洗脱，并在荧光成像仪上进行电泳和定量。

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1. Th1/Th17细胞分化与功能实验：体外培养免疫细胞（包括Th1和Th17细胞的前体细胞），并置于诱导Th1或Th17细胞分化的培养条件下。向培养体系中加入不同浓度的Ritlecitinib (PF-06651600)，检测并评估Th1和Th17细胞的分化状态及功能活性。结果显示，该化合物可抑制Th1和Th17细胞的分化与功能，且对JAK3依赖的通路具有高度选择性[1]
2. 巨噬细胞功能实验：体外分离并培养巨噬细胞。对于经LPS处理的巨噬细胞，加入Ritlecitinib (PF-06651600) 后检测IL-10的抑制功能；对于经IL-27预处理的巨噬细胞，加入该化合物后检测TNFα和IL-1β的产生水平。结果表明，该化合物可保留巨噬细胞中JAK1依赖的抗炎信号，不会影响IL-10介导的抑制作用，也不会影响对TNFα和IL-1β产生的抑制效果[1]

本研究采用治疗剂量方案，在佐剂诱导的大鼠关节炎模型中，对 PF-06651600 抑制 JAK3 的作用进行了体内评估。该分子的疗效在三项独立的研究中进行了评估，每项研究均采用递减剂量。通过对雌性Lewis大鼠（8至10周龄；Charles River Laboratories）进行免疫，诱导其发生关节炎。免疫方法为：在尾根部皮内注射完全弗氏佐剂，共注射三次，每次50 µL（15 mg/mL结核分枝杆菌溶于不完全弗氏佐剂中）。首次免疫7天后，使用体积描记仪（Buxco Inc）测量免疫大鼠的基线后爪体积。每日监测大鼠的关节炎症状，包括体重变化和后爪体积测量。当单个后爪的体积测量值增加0.2 mL（或更多）时，将动物随机分配到治疗组。每日通过灌胃给予PF-06651600治疗。实验1的治疗组为：80、15或6 mg/kg PF-06651600或赋形剂（2% Tween 80 / 0.5% PF-06651600）。实验 2 的治疗组为：30、10 和 3 mg/kg 或载体（0.5% 甲基纤维素/去离子水/1 mEQ 盐酸）。实验 3 的治疗组为：10、1、0.3 和 0.1 mg/kg 或载体（0.5% 甲基纤维素/去离子水/1 mEQ 盐酸）。受试者入组后立即开始给药，治疗持续 7 天。研究结束时，于给药后 15 分钟（血浆峰浓度）采集全血，用于分析 STAT 磷酸化水平；同时采集血浆，用于测定 PF-06651600 给药组的暴露浓度。

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\n\n小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎。[1]
\n\n在雌性小鼠中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)。本研究使用Hooke Laboratories提供的C57BL/6小鼠（Taconic Farms，10周龄）。小鼠皮下注射Hooke Kit™ MOG35-55/CFA Emulsion PTX（Hooke Laboratories）的乳剂成分（含MOG35-55），每点注射0.1 ml。试剂盒中的百日咳毒素（PTX）成分用PBS稀释后，在乳剂注射后2小时内腹腔注射0.1 ml，剂量分别为122 ng/剂（治疗剂量研究）或167 ng/剂（预防剂量研究）；24小时后再次腹腔注射，剂量分别为111 ng/剂（治疗剂量研究）或156 ng/剂（预防剂量研究）。在治疗剂量研究中，当每只小鼠出现EAE临床症状（最低评分0.5）时，即停止给药。将小鼠以均衡的方式分配到实验组（每组 n=15），以确保各组小鼠的 EAE 发病时间和评分相似。每只小鼠均在发病第一天开始接受治疗，持续 14 天。在预防性给药研究中，小鼠于第 -1 天以均衡的方式分配到各组（每组 n=10），以确保各组小鼠在研究开始时的平均体重相似。预防性给药于第 0 天开始，持续至第 28 天。给药采用双盲法，每日两次（BID）口服（PO）PF-06651600 或赋形剂（0.5% 甲基纤维素/1 摩尔当量盐酸）。阳性对照组每日一次（QD）于早上口服芬戈莫德（FTY720，Gilenya），这是这些模型中最常用的阳性对照药物；下午口服赋形剂，以控制给药应激对实验组的影响。每日两次给药组。早晚两次给药间隔不超过14小时，早晚两次给药间隔不少于10小时。每周测量体重3次，从第7天（免疫后第7天）开始每日评估EAE评分。EAE评分采用0至5分制，直至研究结束。评分由一位对每只小鼠的治疗方案和先前评分均不知情的人员以盲法进行。研究结束时，采集血浆样本，测定PF-06651600在峰值（给药后15分钟）和谷值（给药后10小时和14小时）时间点的暴露浓度。

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\n\n1. 大鼠佐剂诱导关节炎模型：采用标准方案诱导大鼠发生佐剂诱导关节炎。利特西替尼（PF-06651600）通过未指定的途径和频率（未在文中描述）给药。文献）。在不同时间点评估了疾病病理（如关节炎症、损伤和临床评分），结果表明该化合物可减轻该模型中的疾病病理[1]
\n2. 小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型：采用标准诱导方法诱导小鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎。给予小鼠利特西替尼（PF-06651600）（文献中未具体说明给药途径和频率），并评估疾病病理（包括神经系统症状、中枢神经系统炎症浸润等）。发现该化合物可减轻该自身免疫性疾病模型中的疾病病理[1]

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\n\n2% Tween 80 /0.5% 甲基纤维素/去离子水
\n雌性Lewis大鼠模型（8至10周龄）
\n大鼠佐剂诱导的关节炎。[1]

吸收、分布和排泄
利特替尼的AUC0-τ和Cmax在剂量高达200 mg时呈近似剂量比例增加，并在大约第4天达到稳态。利特替尼的绝对口服生物利用度约为64%，口服给药后1小时即可达到血浆峰浓度。食物对利特替尼的全身暴露量无临床意义上的影响。同时服用高脂餐和100 mg利特替尼胶囊可使Cmax降低32%，AUCinf增加11%。临床试验期间，利特替尼的给药不受进餐影响。
利特替尼主要通过尿液和粪便排泄。放射性标记的利特替尼分别约有66%和20%经尿液和粪便排出。约 4% 的利特西替尼剂量以原形药物形式经尿液排出。
利特西替尼的预计分布容积为 1.3 L/kg。
利特西替尼的预计血药清除率为 5.6 mL/min/kg。

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代谢/代谢物
利特西替尼通过细胞色素 P450 (CYP) 和谷胱甘肽-S-转移酶 (GST) 代谢。参与利特西替尼代谢的 GST 酶包括胞质 GST A1/3、M1/3/5、P1、S1、T2、Z1 和微粒体 GST 1/2/3，参与此过程的 CYP 酶包括 CYP3A、CYP2C8、CYP1A2 和 CYP2C9。没有哪一种单一途径对利特西替尼总代谢的贡献超过 25%。

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生物半衰期
利特西替尼的终末半衰期为 1.3 至 2.3 小时。

肝毒性
在斑秃的上市前临床试验中，接受利特西替尼治疗的受试者中有1%至3%出现血清转氨酶升高，安慰剂组也观察到类似发生率。这些升高通常较轻且短暂，超过正常值上限5倍的患者不足1%。这些升高很少导致早期停药，即使不调整剂量，通常也能自行恢复正常。在斑秃和其他自身免疫性疾病的上市前研究中，未发现与利特西替尼相关的肝脏严重不良事件或临床上明显的肝损伤。自利特西替尼获批上市并广泛应用以来，尚未有与其使用相关的肝毒性报告发表。最后，利特西替尼是一种免疫调节剂，可能导致包括乙型肝炎在内的病毒感染复发。其他JAK抑制剂也曾与罕见的乙型肝炎复发病例有关，但这些病例通常无症状且具有自限性。利特西替尼治疗HBsAg阳性或抗-HBc阳性但HBsAg阴性的患者发生乙型肝炎复发的风险尚未明确。
可能性评分：E（不太可能引起特异性临床表现明显的肝损伤，但可能是乙型肝炎复发的潜在原因）。
肝毒性
在斑秃的上市前临床试验中，1%至3%的利特西替尼治疗组受试者出现血清转氨酶升高，安慰剂组受试者也观察到类似发生率。这些升高通常程度较轻且短暂，超过正常值上限 (ULN) 5 倍以上的患者不足 1%。这些升高很少导致早期停药，即使不调整剂量，通常也能自行恢复正常。在斑秃和其他自身免疫性疾病的上市前研究中，未发现与利特西替尼相关的肝脏严重不良事件或临床上明显的肝损伤病例。自利特西替尼获批上市并广泛应用以来，尚未有已发表的与其使用相关的肝毒性报告。
最后，利特西替尼是一种免疫调节剂，可能导致包括乙型肝炎在内的病毒感染复发。其他 JAK 抑制剂也曾与罕见的乙型肝炎复发病例有关，但这些病例通常无症状且具有自限性。对于接受利特西替尼治疗的HBsAg阳性或抗-HBc阳性但HBsAg阴性的患者，乙型肝炎病毒再激活的风险尚未明确。
可能性评分：E（不太可能引起特异性临床表现明显的肝损伤，但可能是乙型肝炎病毒再激活的潜在原因）。

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妊娠和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于利特西替尼在哺乳期临床应用的信息。由于存在包括恶性肿瘤在内的严重不良反应风险，生产商建议在利特西替尼治疗期间以及末次给药后14小时内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
利特西替尼与血浆蛋白的结合率为14%。

[1]. Discovery of a JAK3-Selective Inhibitor: Functional Differentiation of JAK3-Selective Inhibition over pan-JAK or JAK1-Selective Inhibition. ACS Chem Biol. 2016 Dec 16;11(12):3442-3451.

药效学
利特替尼是一种激酶抑制剂，可剂量依赖性地降低绝对淋巴细胞水平、T淋巴细胞（CD3）及其亚群（CD4和CD8）的数量。利特替尼还可降低NK细胞（CD16/56）的数量，且NK细胞数量在治疗开始后48周内保持稳定。每日一次服用50 mg利特替尼的患者，其淋巴细胞中位数水平的降低可持续至第48周。在剂量为斑秃患者每日一次服用50 mg利特替尼平均最大暴露量的12倍时，利特替尼对QTc间期未产生具有临床意义的影响。[] 利特替尼的使用与严重感染、恶性肿瘤（包括非黑色素瘤皮肤癌）、主要不良心血管事件、血栓栓塞事件和超敏反应的发生相关。在另一项针对50岁以上且至少具有一项心血管危险因素的类风湿性关节炎患者的上市后安全性研究中，JAK抑制剂与TNF阻滞剂相比，全因死亡率（包括心血管猝死）更高。

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1. 利特西替尼（PF-06651600）是一种新发现的高效选择性JAK3抑制剂。由于缺乏此类高效选择性抑制剂，此前无法在相关免疫细胞中比较JAK3选择性抑制与泛JAK或JAK1选择性抑制[1]。
2. 利特西替尼（PF-06651600）对JAK3的选择性抑制作用与泛JAK或JAK1抑制作用在各种免疫细胞反应中存在差异。这种选择性可能转化为治疗炎症和自身免疫性疾病的有利临床疗效，因为它靶向致病性γc细胞因子通路，同时保留有益的JAK1依赖性抗炎信号通路[1]
3. 利特西替尼（PF-06651600）已注册临床试验（ClinicalTrials.gov NCT02309827），表明其已进入临床研究阶段，具有潜在的治疗应用价值[1]

C15H19N5O

285.34

285.158

C, 63.14; H, 6.71; N, 24.54; O, 5.61

1792180-81-4

(2R,5S)-Ritlecitinib;1792180-79-0; 2192215-81-7 ; 1792180-81-4; 2489392-29-0; 2140301-97-7 (malonate)

118115473

White to yellow solid

1.3±0.1 g/cm3

1.658

1.29

73.9

2

4

3

21

402

2

O=C(C=C)N1C[C@@H](CC[C@@H]1C)NC1C2C=CNC=2N=CN=1

CBRJPFGIXUFMTM-WDEREUQCSA-N

InChI=1S/C15H19N5O/c1-3-13(21)20-8-11(5-4-10(20)2)19-15-12-6-7-16-14(12)17-9-18-15/h3,6-7,9-11H,1,4-5,8H2,2H3,(H2,16,17,18,19)/t10-,11+/m0/s1

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 6.67 mg/mL (23.38 mM) in 0.5% MC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。