JAK3 (IC50 = 33.1 nM)
JAK3 (IC50 = 33 nM or 0.346 nM)

体外活性：PF-06651600 作为一种强效的 JAK3 选择性抑制剂，能高效抑制依赖于 JAK1 和 JAK3 的 γc 细胞因子信号传导。在体外，它能抑制 Th1 和 Th17 细胞的分化和功能。在人全血总淋巴细胞中，PF-06651600 可抑制 IL-2、IL-4、IL-7 和 IL-15 诱导的 STAT5 磷酸化，IC50 值分别为 244、340、407 和 266 nM；它还能抑制 IL-21 诱导的 STAT3 磷酸化，IC50 值为 355 nM。
激酶活性测定：PF-06651600 是一种新型高效的 JAK3 特异性抑制剂，可抑制 JAK3 激酶活性，IC50 值为 33.1 nM，但对 JAK1、JAK2 和 TYK2 无抑制作用（IC50 > 10000 nM）。 PF-06651600 可抑制 IL-2、IL-4、IL-7 和 IL-15 诱导的 STAT5 磷酸化，IC50 值分别为 244、340、407 和 266 nM。PF-06651600 还可抑制 IL-21 诱导的 STAT3 磷酸化，IC50 值为 355 nM。T 细胞分化实验的功能评估表明，PF-06651600 可抑制 Th1 和 Th17 细胞分化，在 Th1 条件下培养 5 天后，IFNγ 水平降低；在 Th17 条件下培养 6 天后，IL-17 产生减少，IC50 值分别为 30 nM 和 167 nM。 PF-06651600 还能抑制 Th1 和 Th17 细胞的功能，这可以通过抑制先前分化和静置后用 PF-06651600 处理的细胞中的 IFNγ 产生（IC50=48 nM）和 IL-17 产生（IC50=269 nM）来衡量。
细胞实验：为了研究 PF-06651600 对分化后 Th17 细胞的影响，将分化的 Th17 细胞洗涤，在培养基中静置过夜，然后重悬于含有与分化过程中相同浓度细胞因子但不含抗 CD3 或抗 CD28 抗体的培养基中，并在 10 个不同浓度的 PF-06651600 存在下继续培养 2 天。在第9天，收集每个孔中的上清液并测定IL-17A的含量。

---

利特西替尼是一种高选择性、口服有效的不可逆共价JAK3抑制剂。它对JAK3的IC50值为33 nM，对JAK1、JAK2和TYK2无抑制活性（IC50 > 10 μM）。其他文献报道其对JAK3的IC50值为0.346 nM，对JAK1和JAK2的选择性超过1000倍。该化合物对JAK1无活性（IC50 > 10000 nM）。其对JAK3的高选择性是通过与JAK3催化结构域中一个独特的半胱氨酸残基（Cys-909）的共价相互作用实现的，该残基在其他JAK亚型中被丝氨酸残基取代。在细胞试验中，该化合物抑制JAK3介导的信号传导，包括STAT磷酸化和下游基因表达。

本研究采用佐剂诱导的大鼠关节炎模型，通过治疗剂量方案评估了 PF-06651600 对 JAK3 的体内抑制作用。当单个后爪体积测量结果显示增加 0.2 mL（或更多）时，将动物随机分配到治疗组。每日通过灌胃给予 PF-06651600。实验 1 的治疗组分别为：PF-06651600 80、15 或 6 mg/kg，或赋形剂（2% Tween 80/0.5% 甲基纤维素/去离子水）。实验 2 的治疗组分别为：PF-06651600 30、10 和 3 mg/kg，或赋形剂（0.5% 甲基纤维素/去离子水/1 mEQ 盐酸）。实验 3 的治疗组分别为：PF-06651600 10、1、0.3 和 0.1 mg/kg 或赋形剂（0.5% 甲基纤维素/去离子水/1 mEQ 盐酸）。治疗持续 7 天。体内实验表明，利特西替尼在自身免疫性疾病和炎症性疾病的动物模型中均显示出疗效。口服给药可显著调节疾病终点，且呈剂量依赖性。该化合物具有良好的药代动力学特性，可达到足够的暴露量以达到治疗浓度。生物标志物分析证实了该化合物在靶组织中与靶点结合并调节相关通路。

JAK酶活性测定。[1]
采用微流控芯片测定人Janus激酶（JAK）活性，通过监测JAK家族四个成员（JAK1、JAK2、JAK3和TYK2）的重组人激酶结构域对合成肽的磷酸化作用。JAK1、JAK2和JAK3的GST标签重组人激酶结构域购自Life Technologies公司。His标签重组人TYK2激酶结构域在SF21杆状病毒中表达，并采用两步亲和层析（Ni-NTA）和尺寸排阻层析（SEC S200）纯化方法进行纯化。将测试化合物溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，配制成30 mM的储备液。将化合物用DMSO稀释，制备浓度为600 µM的11个浓度梯度（半对数）系列溶液。测试化合物板包含阳性对照孔（含已知抑制剂，用于定义 100% 抑制）和阴性对照孔（含 DMSO，用于定义无抑制）。化合物板在实验中以 1 至 60 倍稀释，最终实验化合物浓度范围为 10 µM 至 100 pM，DMSO 最终浓度为 1.7%。将溶解于 100% DMSO 中的测试化合物和对照品（250 nL）使用非接触式声波分液器加入到 384 孔聚丙烯板（Matrical）中。激酶活性测定在室温下进行，反应体系为 15 µL，包含 20 mM HEPES（pH 7.4）、10 mM 氯化镁、0.01% 牛血清白蛋白 (BSA)、0.0005% Tween 20 和 1 mM 二硫苏糖醇 (DTT)。反应混合物中含有 1 µM 的荧光标记合成肽，其浓度低于表观米氏常数 (Km)（JAK1 和 TYK2 的标记物为 5FAM-KKSRGDYMTMQID，JAK2 和 JAK3 的标记物为 FITC-KGGEEEEYFELVKK）。反应混合物中还含有三磷酸腺苷 (ATP)，其浓度分别为等于 ATP 的表观 Km 值（JAK1 为 40 µM，JAK2 和 JAK3 为 4 µM，TYK2 为 12 µM）或 1 mM。将化合物加入含有 ATP 和底物的缓冲液中，随后立即加入酶以启动反应。用 15 µL 含有 180 mM HEPES（pH=7.4）、20 mM EDTA、0.2% 包被试剂的缓冲液终止测定，最终浓度为 10 mM EDTA、0.1% 包被试剂和 100 mM HEPES（pH=7.4）。将检测板置于 Caliper Life Science Lab Chip 3000 (LC3000) 仪器或 Caliper Life Science EZ Reader 仪器上，并使用适当的分离条件对每个孔进行取样，以确定磷酸化水平[1]。

---

JAK3 的结合和失活动力学。[1]
使用基于 LanthaScreen® Eu 激酶结合分析 (Invitrogen/Life Technologies) 的时间分辨 Förster 共振能量转移 (TRFRET) 分析，测量了 PF-06651600 与 JAK3 以及一系列在与 JAK3 中 Cys909 位置等效的 Cys 的激酶的结合和失活动力学。激酶特异性试剂和检测验证信息可在以下网址找到：https://www.thermofisher.com/us/en/home/industrial/pharma-biopharma/drug-discoverydevelopment/target-and-lead-identification-and-validation/kinasebiology/kinase-activityassays/lanthascreentm-eu-kinase-binding-assay/lanthascreen-eu-kinase-binding-assay-validationtable.html。检测缓冲液为：20 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM MgCl2、0.01% BSA、1 mM DTT、0.0005% Tween 20 和 2% DMSO。失活动力学反应通过配制 15 µL 浓度为 1.33 倍的溶液进行，该溶液包含（最终浓度）2 nM Eu-Ab、1-8 nM 激酶（每种激酶的最佳浓度通过实验确定）和不同浓度的 PF06651600，并预孵育不同时间（详见下文）。然后，将该溶液与 5 µL 浓度为 4 倍的已验证探针溶液（最终浓度为 150 nM）混合。对于所有激酶，均进行了以下实验：（A）[PF-06651500] = 0、4.9、14.8、44.4、133.3 和 400 nM；预孵育时间 = 2 小时。 (B) [PF-06651500] = 0、0.5、1.0、2.0、4.0 和 8.0 µM；预孵育时间 = 120 秒。对于 JAK3，进行了以下额外实验：[PF-06651500] = 0、0.66、1.98、5.93、17.8、53.3、160 和 480 nM；预孵育时间分别为 (C) 30 秒、(D) 60 秒和 (E) 1.5 小时。使用 EnVision 酶标仪读取检测结果。激发波长为 340 nm，监测的输出为发射比值，通过将探针发射峰 (665 nm) 的信号除以铕 (615 nm) 的信号计算得出。每隔 120 秒进行一次测量，持续 1.5 小时。重组 TXK 激酶（N 端 GST 融合蛋白）与抗 GST Eu 抗体（Life Technologies）和探针联用时，未能产生合适的 TR-FRET 信号。因此，我们采用了一种替代方法来测量 kinact/Ki，即经典的丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶 (PK/LDH) 偶联酶活性测定。在 PK/LDH 测定中，激酶反应的产物 ADP 的测定首先是将其生成与磷酸烯醇式丙酮酸 (PEP) 的去磷酸化偶联，生成丙酮酸，然后丙酮酸的生成与 NADH 依赖的还原反应偶联，生成乳酸。同时，NADH 氧化生成 NAD+ 的过程通过分光光度法监测 340 nm 处吸光度的降低来反映。 TXK激酶缓冲液的组成为：50 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM Mg2Cl2、0.01% Triton X-100、1 mM DTT和1% DMSO。此外，还包括（PK/LDH测定试剂）：0.25 mM NADH（Sigma，N8129）、2.5 mM磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）、12 U/mL丙酮酸激酶（PK）和18 U/mL乳酸脱氢酶（LDH）。最终底物浓度为100 µM ATP和Srctide肽（序列：GEPLYWSFPAKKK）。在每个实验中，将10 µL PF-06651600溶液（预孵育期间浓度：0、10.4167、20.83、41.67、83.3、333.3、666.7、1333.3、2666.7 nM）与20 µL含有TXK激酶（预孵育期间浓度为34 nM）和PK/LDH试剂的溶液混合。经过不同时间的预孵育（15分钟、30分钟、1小时、1.5小时和2小时）后，加入10 µL 4×ATP/肽底物以启动反应。

---

PF-06651600与人血清白蛋白的结合。 [1]
在酿酒酵母中表达的人重组血清白蛋白 (HSA) 以 1.5 mM 的溶液形式获得，无需进一步处理，直接用 Dulbecco 磷酸盐缓冲液 (PBS) 稀释后使用。将 HSA 与化合物（由 8 mM DMSO 储备液稀释至 PBS 中配制，具体配制方法见图 S3 图例）孵育 22 小时。之后，使用 Agilent 1100 高效液相色谱系统和 Waters LCT Premier XE 质谱仪，按照先前描述的方法¹，通过液相色谱-质谱联用仪对蛋白质进行直接质谱分析。使用 MaxEnt 1 软件（集成于 Waters MassLynx 程序中）对蛋白质峰的平均质谱图进行分析，运行 20 次迭代，目标质量范围为 66,000-67,500 Da，提取蛋白质的质量分布。

---

人肝细胞中的共价结合。[1]
将冷冻保存的人肝细胞混合后悬浮于 Williams' E 培养基（GIBCO，ThermoFisherScientific）中，最终浓度为 750,000 个细胞/mL (n=2)。台盼蓝染色排除法测定细胞活力 >80%。将细胞悬液 (4 mL) 与放射性标记底物 (1 µM) 在 37°C 下孵育至多 4 小时。在 240 分钟时取出等分试样，用乙腈淬灭反应，以 3500 rpm 离心 15 分钟，并用有机溶剂混合物（乙腈：甲醇、乙腈和乙腈：0.1% 甲酸水溶液）进行彻底提取 (N=7)。监测上清液直至放射性水平低于背景水平的两倍 (80 dpm)。将1M NaOH加入剩余的蛋白质沉淀中，置于水浴中过夜溶解，并通过液体闪烁计数法测定总放射性。蛋白质浓度采用Bradford蛋白测定法测定。

---

人全血中JAK3占有率和p-STAT5抑制的LC-MS/MS分析。[1]
利用LC/MS-MS替代胰蛋白酶肽分析法测定不可逆共价抑制剂对JAK3的占有率。使用人JAK3蛋白序列（Uniprot登录号P52333）验证含有909Cys（共价分子结合靶点）的胰蛋白酶肽序列。使用MS级胰蛋白酶/Lys-C酶混合物对JAK3蛋白进行胰蛋白酶切割，生成序列为LVMEYLPSGCLR的合适大小的肽段。采用多反应监测（MRM）模式的免疫亲和液相色谱-串联质谱（IA-LC-MS/MS）分析测定结合抑制剂的肽段和游离肽段，该分析包括在线抗肽抗体免疫亲和富集步骤。在蛋白质和肽段水平上进行双重免疫沉淀，可充分富集人全血外周血单核细胞（PBMC）样本中的游离和结合的LVME肽段。生物素标记的抗人JAK3多克隆捕获抗体购自Santa Cruz公司。含有胰蛋白酶切割位点的延伸序列稳定同位素标记（SIL）肽段由New England Peptide公司定制合成。JAK3激酶活性采用放射性或发光激酶活性测定法，使用重组JAK3酶和相应的肽底物进行测定。IC50值由剂量反应曲线确定。针对JAK1、JAK2、TYK2和其他激酶进行选择性分析，以确定选择性谱。

Th1细胞分化。[1]
冷冻保存的人正常外周血CD4+/CD45RA+/CD25-幼稚T细胞购自Allcells公司。将冷冻的CD4+/CD45RA+/CD25-幼稚T细胞在37℃水浴中解冻，并用RPMI1640培养基洗涤一次。将细胞重悬于含10%胎牛血清（FBS）、IL-2（10 ng/mL）、IL-12（5 ng/mL）、抗IL-4（5 ng/mL）、抗CD3（10 µg/mL）和抗CD28（0.1 µg/mL）抗体的RPMI培养基中，细胞浓度为200,000个/mL。为了评估PF-06651600在Th1细胞分化阶段的作用，将重悬的初始CD4+ T细胞在含有11种不同浓度JAK抑制剂（终浓度为0.2% DMSO）的培养基中培养5天。收集上清液，并根据制造商的说明，使用MSD测定IFNγ的浓度。为了研究PF-06651600对分化后Th1细胞的影响，将分化的Th1细胞重悬于含10% FBS的RPMI培养基中，并在无细胞因子条件下培养7小时。然后收集细胞，并在含有10% FBS、IL-2（10 ng/mL）、IL-12（5 ng/mL）、抗IL-4抗体（5 ng/mL）以及11种不同浓度PF-06651600的96孔板中继续培养2天。 IFNγ浓度的测定方法如上所述。

---

Th17细胞分化。[1]
使用RosetteSep CD4+ T细胞富集试剂盒从白细胞层中纯化人CD4+ T细胞，并在含有10种不同浓度JAK抑制剂的细胞因子混合物（25 ng/mL IL-6、25 ng/mL IL-23、12.5 ng/mL IL-1β、25 ng/mL IL-21、5 ng/mL TGFβ1、10 µg/mL抗CD3抗体（预包被于培养板表面）和1 µg/mL抗CD28抗体）中培养6天。收集上清液，并按照制造商提供的方案，使用MSD法测定IL-17A的浓度。为了研究 PF-06651600 对 Th17 细胞分化后的影响，将分化后的 Th17 细胞洗涤，在 X-VIVO 15 培养基（Lonza）中静置过夜，然后重悬于含有与分化过程中相同浓度细胞因子但不含抗 CD3 或抗 CD28 抗体的培养基中，并加入 10 种不同浓度的 PF-06651600，继续培养 2 天。第 9 天，收集各孔上清液，并按上述方法测定 IL-17A 的含量。

---

人 T 细胞中 JAK3 的半衰期。[1]
CD4+ 细胞通过从白细胞层（SeraCare）中阴性选择纯化，并冷冻保存。将一千万个细胞在添加了10%胎牛血清（Sigma）、100 U/mL青霉素/100 µg/mL链霉素（Gibco）、2 mM L-谷氨酰胺、100 µM非必需氨基酸、1 mM丙酮酸钠、20 mM HEPES和2 ng/mL IL-2的RPMI培养基中解冻。在5% CO2、37 °C条件下培养2小时后，加入CD3/CD28磁珠（磁珠与细胞的比例为3:1）。72小时后，去除磁珠，取8亿个细胞用于脉冲追踪实验。每个数据点使用4000万个细胞。将细胞在添加了500 µCi S35标记的Cys/Met的培养基中于5% CO2、37 °C条件下孵育30分钟，然后用PBS洗涤两次。将细胞在添加了 200 µM Cys/Met 的培养基中孵育不同时间后，用冷裂解缓冲液裂解，然后储存于 -80 °C。将裂解液在冰上解冻，并在 4 °C 下与抗 JAK3 抗体进行过夜免疫沉淀。使用 Protein G 磁珠捕获抗 JAK3 抗体。然后用 60 µl 含 5% BME 的 Laemmli 缓冲液洗脱 JAK3，并进行电泳和磷光成像定量分析。

---

通过流式细胞术或蛋白质印迹法检测 JAK3 介导的 STAT 磷酸化水平来评估免疫细胞的细胞效力。评估 JAK3 依赖性细胞系的细胞因子诱导信号传导和增殖。测量该化合物对 T 细胞活化和功能的影响，以表征其免疫调节活性。

2% Tween 80 / 0.5% 甲基纤维素 / 去离子水 雌性Lewis大鼠模型（8至10周龄） 大鼠佐剂诱导关节炎。[1]
在大鼠佐剂诱导关节炎模型中，采用治疗剂量方案，在体内评估了PF-06651600对JAK3的抑制作用。该分子的疗效在三项独立的研究中进行了评估，每项研究均采用递减剂量。通过对雌性Lewis大鼠（8至10周龄；Charles River Laboratories）进行免疫，诱导其发生关节炎。免疫方法为：在尾根部皮内注射完全弗氏佐剂，共注射三次，每次50 µL（15 mg/mL结核分枝杆菌溶于不完全弗氏佐剂（Sigma Aldrich））。首次免疫7天后，使用体积描记仪（Buxco Inc）测量免疫大鼠的基线后爪体积。每日监测大鼠的关节炎症状，包括体重变化和后爪体积测量。当单个后爪的体积测量值增加0.2 mL（或更多）时，将动物随机分配到治疗组。每日通过灌胃给予PF-06651600治疗。实验1的治疗组为：80、15或6 mg/kg剂量组，或载体（2% Tween 80）。 （0.5%甲基纤维素/去离子水）。实验2的治疗组为：30、10和3 mg/kg或载体（0.5%甲基纤维素/去离子水/1 mEQ盐酸）。实验3的治疗组为：10、1、0.3和0.1 mg/kg或载体（0.5%甲基纤维素/去离子水/1 mEQ盐酸）。受试者入组后立即开始给药。治疗持续7天。研究结束时，于给药后15分钟（血浆峰浓度）采集全血用于STAT磷酸化分析，并采集血浆用于PF-06651600给药组的暴露浓度分析。

---

小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎。[1]
在雌性C57BL/6小鼠中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）。 （Taconic Farms，10周龄）在Hooke Laboratories进行实验。每只小鼠皮下注射0.1 ml Hooke Kit™ MOG35-55/CFA Emulsion PTX（Hooke Laboratories）的乳剂成分（含MOG35-55）。试剂盒中的百日咳毒素（PTX）成分用PBS稀释，并在乳剂注射后2小时内腹腔注射0.1 ml，剂量分别为122 ng/剂（治疗剂量研究）或167 ng/剂（预防剂量研究），并在乳剂注射后24小时再次腹腔注射，剂量分别为111 ng/剂（治疗剂量研究）或156 ng/剂（预防剂量研究）。在治疗性研究中，每只小鼠出现EAE临床症状（最低评分0.5）后，将其分配到相应的实验组。为了使各组小鼠的EAE发病时间和评分相似，我们采用均衡的方式将小鼠（每组n=15）分组。每只小鼠在发病第一天开始接受治疗，持续14天。在预防性给药研究中，我们于第-1天将小鼠（每组n=10）均衡分组，以确保各组在研究开始时的平均体重相似。预防性给药于第0天开始，持续至第28天。给药采用盲法，每日两次（BID）口服（PO）PF-06651600或赋形剂（0.5%甲基纤维素/1摩尔当量盐酸）。阳性对照组每天早上口服一次（QD）芬戈莫德（FTY720，Gilenya），这是这些模型中最常用的阳性对照药物；下午口服一次（QD）赋形剂，以控制与BID治疗组相比的给药应激。早晚两次给药间隔不超过14小时，早晚两次给药间隔不少于10小时。每周测量体重3次，从第7天（免疫后第7天）开始每日评估EAE评分。EAE评分采用0至5分制，直至研究结束。评分由一位对每只小鼠的治疗方案和既往评分均不知情的人员以盲法进行。研究结束时，采集血浆样本，测定PF-06651600在峰值（给药后15分钟）和谷值（给药后10小时和14小时）时间点的暴露浓度。在包括斑秃模型在内的自身免疫性疾病和炎症性疾病动物模型中评估体内疗效。利特西替尼以不同剂量口服给药。监测疾病进展，并评估靶组织中的药效学生物标志物，包括STAT磷酸化。进行药代动力学采样以关联药物暴露量与疗效。

利特西替尼具有良好的药代动力学特性，口服生物利用度高，半衰期足以满足每日一次或两次给药方案的要求。该化合物的清除率和分布容积均可接受。临床研究提供了包括Cmax、AUC、半衰期和生物利用度在内的详细药代动力学参数。该化合物是相关代谢酶的底物。

利特西替尼已在治疗斑秃和其他自身免疫性疾病的大规模临床试验中进行了评估。这些试验的安全数据显示，该化合物在治疗剂量下通常耐受性良好。临床开发项目提供了全面的毒理学数据，包括遗传毒性、心脏毒性和重复给药毒性研究。

[1]. Discovery of a JAK3-Selective Inhibitor: Functional Differentiation of JAK3-Selective Inhibition over pan-JAK or JAK1-Selective Inhibition. ACS Chem Biol. 2016 Dec 16;11(12):3442-3451.

利特西替尼是一种吡咯并嘧啶化合物，其结构为7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶，4位被[(3R,6S)-6-甲基-1-(丙-2-烯酰基)哌啶-3-基]氨基取代。它是Janus激酶3和TEC家族酪氨酸激酶的双重抑制剂。它可用作EC 2.7.10.2（非特异性蛋白酪氨酸激酶）抑制剂、抗风湿药、抗炎药、免疫抑制剂和皮肤病药物。它是一种吡咯并嘧啶化合物、N-酰基哌啶化合物、仲氨基化合物、丙烯酰胺化合物和叔羧酰胺化合物。它是利特西替尼(1+)的共轭碱。利特西替尼（PF-06651600）是一种高选择性的Janus激酶3（JAK3）和肝细胞癌酪氨酸激酶（TEC）家族抑制剂。2023年6月，美国食品药品监督管理局（FDA）批准利特西替尼用于治疗12岁及以上成人和青少年重度斑秃。同年9月，欧洲药品管理局（EMA）也批准该药上市。利特西替尼是一种口服药物，也是该类药物的首个成员。利特西替尼与JAK3的Cys-909位点共价结合，而其他JAK亚型在该位点含有丝氨酸残基。这使得利特西替尼成为一种高选择性且不可逆的JAK3抑制剂。其他激酶在与JAK3 Cys-909位点对应的位置含有半胱氨酸残基，其中一些属于TEC激酶家族。研究表明，利特西替尼对JAK3和TEC激酶家族的双重活性可以阻断细胞因子信号传导和T细胞细胞毒活性，而这两者都与斑秃的发病机制有关。利特西替尼是一种口服小分子Janus激酶3 (JAK3)抑制剂，用于治疗重度斑秃。在利特西替尼治疗期间，血清转氨酶水平短暂且通常轻微升高的发生率较低，但尚未发现与利特西替尼相关的具有临床意义的急性肝损伤病例。

---

利特西替尼（PF-06651600丙二酸盐）已在多个地区获批用于治疗重度斑秃。该化合物通过选择性抑制JAK3，代表了自身免疫性疾病治疗领域的一项重大进展。它也已在白癜风、类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病的临床试验中进行研究。

C18H23N5O5

389.41

389.169

C, 57.75; H, 5.95; N, 15.31; O, 13.99; S, 7.01

2140301-97-7

1792180-81-4;2140301-97-7 (malonate);2192215-81-7;2489392-29-0;

124203830

White to off-white solid powder

149Ų

4

8

5

28

485

2

C[C@H]1CC[C@H](CN1C(=O)C=C)NC2=NC=NC3=C2C=CN3.C(C(=O)O)C(=O)O

QMPMPSGDPRHZCG-VZXYPILPSA-N, CBRJPFGIXUFMTM-WDEREUQCSA-N (free base).

InChI=1S/C15H19N5O.C3H4O4/c1-3-13(21)20-8-11(5-4-10(20)2)19-15-12-6-7-16-14(12)17-9-18-15;4-2(5)1-3(6)7/h3,6-7,9-11H,1,4-5,8H2,2H3,(H2,16,17,18,19);1H2,(H,4,5)(H,6,7)/t10-,11+;/m0./s1

1-[(2S,5R)-2-Methyl-5-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-ylamino)-1-piperidinyl]-2-propen-1-one malonate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。