Piceatannol (Astringenin; NSC-622471; trans-Piceatannol)   中文名称: 白皮杉醇

Syk

白藜芦醇的一种代谢物是白皮杉醇[2]。 SYK 抑制剂 Piceatannol（3.125、6.25、12.5、25 和 50 μM）可抑制六种弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 细胞系（SUDHL-6、U2392、DOHH2、Karpas 422、VAL、OCI Ly19）的细胞生长；72 小时）；这些细胞系的 IC50 值分别为 18 μM、25 μM、37 μM、48 μM 和 >50 μM [3]。

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172889-26-8葡萄和葡萄酒中存在的一种多酚化合物，据报道具有抗癌特性。最近，它已被证明在各种人类癌症类型中发挥抗增殖和促凋亡作用。本研究的目的是探讨picetanol是否能诱导MOLT-4人白血病细胞的自噬和凋亡。我们的研究结果显示，皮杉醇激活了MOLT-4细胞的自噬，检测到LC3-II蛋白水平升高，同时p62/SQSTM1蛋白水平降低。此外，piceanol诱导MOLT-4细胞凋亡，并伴有磷脂酰丝氨酸外化、caspase-3激活、线粒体膜电位破坏、核小体间DNA断裂、PARP1裂解、染色质凝聚和细胞核断裂。然而，皮杉醇对MOLT4细胞的毒性作用在长时间暴露于该化合物后减弱。我们的研究结果表明，MOLT-4细胞可能获得对皮杉醇毒性的抗性，这可能是由于诱导外排转运体如p -糖蛋白。本研究提供的新数据表明，使用皮杉醇作为一种潜在的化疗药物治疗白血病可能与多药耐药的风险有关。[4]

Piceatannol (10、20 和 40 mg/kg) 可抑制脂多糖产生的炎症细胞的浸润并预防肺水肿 [1]。在肺组织中，白皮杉醇（10、20 和 40 mg/kg）会降低髓过氧化物酶活性并阻止脂多糖产生的 iNOS 合成和 COX-2 表达 [1]。通过阻止肺组织中 TLR/NF-κB 信号通路的激活，白皮杉醇（10、20 和 40 mg/kg；腹腔注射 1 小时）治疗可降低 LPS 诱导的急性肺损伤 (ALI) 期间的炎症反应[1]。

Caspase-3活性测定[4]
使用fitc偶联的单克隆活性Caspase-3 Antibody Apoptosis Kit检测Caspase-3的活性。将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的picetanol中48 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样品5 × 105个细胞），按照制造商的方案用fitc偶联抗活性caspase-3抗体染色。

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线粒体膜电位分析[4]
如前所述，使用JC-1染料检测线粒体膜电位的变化。MOLT-4细胞在IC90浓度下暴露于picetanol 48 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（5 × 每个样品105个细胞），用JC-1染色，流式细胞术分析。

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罗丹明123摄取/保留试验[4]
将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的piceatannol中96 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样品5 × 105个细胞），离心，丢弃上清。用RPMI 1640培养基洗涤后，细胞悬浮在含有0.1 μg/ml罗丹明123的RPMI 1640中，在37 °C的黑暗环境中，在存在或不存在合适的abc转运蛋白抑制剂的情况下，孵育1 h。环孢素A（2 μM, 5 μM, 10 μM）用于P-gp活性分析。用Ko143（5 μM和10 μM）研究BCRP的活性，用MK571（10 μM， 20 μM和50 μM）研究MRP1的活性。孵育后，用含或不含适当抑制剂的无罗丹明123的冰冷培养基洗涤细胞两次。接下来，细胞在37 °C无罗丹明123培养基中孵育45 min，存在或不存在适当的抑制剂。离心（300 g/5 min/4 °C）后，丢弃上清，而将细胞悬浮在含有0.5 μg/ml PI的培养基中，并在存在或不存在适当抑制剂的情况下孵育（在黑暗中RT下10 min）。孵育后，样品保存在冰上，立即用流式细胞术分析。pi阳性细胞，即非活细胞，被排除在数据分析之外。实验所有步骤使用的RPMI 1640培养基不含酚红，添加10% FBS， 2 mM l-谷氨酰胺和抗生素。

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P-gp检测 [4]
将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的piceatannol中96 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样品5 × 105个细胞），离心，丢弃上清。然后，用冷染色缓冲液洗涤细胞，用fitc偶联的抗P-gp （UIC2）小鼠单克隆抗体或fitc偶联的小鼠IgG2a同型对照抗体在冰上黑暗孵育30 min。UIC2抗体的终浓度为5 μg/ml（每100 μl 5 × 105个细胞0.5 μg），与同型对照抗体的终浓度相等。孵育后，用冷染色缓冲液洗涤细胞，用2.5 μg/ml PI在RT下黑暗孵育10 min。之后，样品保存在冰上，立即用流式细胞术分析。pi阳性细胞，即非活细胞，被排除在数据分析之外。结果用UIC2抗体的平均荧光强度（MFI）与同型对照抗体（MFI位移）之比表示。

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MRP1检测 [4]
将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的piceatannol中96 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样品5 × 105个细胞），离心，丢弃上清。接下来，用冷PBS洗涤细胞，悬浮在Cytofix/Cytoperm™溶液中，冰孵育20 min。用Perm/Wash™Buffer洗涤后，用fitc偶联的小鼠抗MRP1单克隆抗体（QCRL-3）或fitc偶联的小鼠IgG2a同型对照抗体在4 °C的黑暗环境下孵育30 min。QCRL-3抗体的终浓度为3 μg/ml(100 μl中每5 × 105个细胞0.3 μg)，与同型对照抗体的终浓度相等。随后用Perm Wash Buffer洗涤后，将样品保存在冰上，并立即用流式细胞术进行分析。结果表示为QCRL-3抗体与同型对照抗体的MFI比值（MFI移位）。

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检测BCRP [4]
将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的piceatannol中96 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样品5 × 105个细胞），离心，丢弃上清。然后，用冷PBS洗涤细胞，用pe偶联的小鼠抗BCRP （5D3）单克隆抗体或pe偶联的小鼠IgG2b同型对照抗体在黑暗中冰孵育30 min。5D3抗体的终浓度为5 μg/ml（每100 μl 5 × 105个细胞0.5 μg），与同型对照抗体的终浓度相等。孵育后，用冷FCM Wash Buffer洗涤细胞，用2.5 μg/ml 7AAD在RT下孵育10 min。之后，将样品保存在冰上，并立即用流式细胞仪进行分析。7aad阳性细胞，对应于非活细胞，被排除在数据分析之外。结果表示为5D3抗体与同型对照抗体的MFI比值（MFI移位）。

细胞毒性测定[3]
细胞类型： 六种 DLBCL 细胞系（Karpas 422、VAL、SUDHL-6、OCI Ly19、U2392 和 DOHH2）
测试浓度： 3.125、6.25、12.5、25 和 50 μM
孵育时间： 72 小时
实验结果： IC50 为 18 μM在 SUDHL-6 中，在 U2392 中为 25 μM，在 DOHH2 中为 37 mM，在 Karpas 422 中为 48 μM，在 OCI-Ly19 和 VAL 中高于 50 μM。

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细胞毒性试验[4]
采用中性红色摄取法测定piceatannol对MOLT-4细胞的细胞毒作用。 MOLT-4细胞(7.5× 104细胞/ 5 培养基的ml)治疗piceatannol在浓度为0.05 μM, 15 μM, 25 μM, 50μM,和100年 μM 48 h(大约三个人口MOLT-4细胞的倍增)。对照的MOLT-4细胞不暴露于piceatannol，而是单独用DMSO（溶剂）处理。在所有样品中，DMSO浓度均为0.1% (v/v)，不影响细胞生长。如前所述，用中性红色染色细胞（Siedlecka-Kroplewska et al., 2012）。在λ = 540 nm处用酶标仪测定吸光度。绘制剂量-反应曲线，计算抑制细胞生长50% （IC50）和90% （IC90）所需的picetanol浓度。

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细胞周期分析[4]
分别用IC90值（45.5 μM）对应浓度的piceatannol处理MOLT-4细胞6、12、24和48 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样品2 × 106个细胞），用碘化丙烯（PI）染色，并通过流式细胞术（Becton Dickinson FACScan， USA）进行分析，如前面所述（Siedlecka-Kroplewska et al., 2012）。

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Annexin V-FITC/PI测定[4]
采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测磷脂酰丝氨酸外化和质膜完整性损失。用IC90浓度的piceatannol处理MOLT-4细胞12、24、48、72和96 h，或进行三个重复处理周期，每次处理96 h（3 × 96 h）。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。基于细胞暴露于重复处理周期的实验如下。细胞（5 × 105个细胞）暴露于picetanol （IC90）。在每个96 h的处理周期后，收集细胞，清洗，重新种植到一个新的烧瓶中，然后再次暴露于picenotol中96 h。处理后，收集细胞（每个样品5 × 105个细胞），按照制造商的方案用fitc偶联膜联蛋白V和PI进行染色。采用流式细胞术对样品进行分析。

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DNA片段化试验[4]
琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段。将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的piceatannol中12、24和48 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。处理后，收集细胞（每个样本2 × 106个细胞），并按照前面所述进行DNA分离（Augustin et al., 2006）。DNA片段在1.8%琼脂糖凝胶上电泳分离，溴化乙啶染色，使用Gel Doc 2000 （Bio-Rad, Italy）拍照。

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细胞内活性氧的检测[4]
MOLT-4细胞（每个样品5 × 105个细胞）与piceatannol在IC90浓度下孵育45 min， 2 h， 4 h和6 h。同时，对照细胞在不含piceatannol的条件下孵育。picetan酚孵育结束前30分钟，加入终浓度为10 μM的H2DCFDA。然后收集细胞，洗涤，并悬浮在冰冷的PBS（磷酸盐缓冲盐水）中。用流式细胞术分析样品的DCF荧光。

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LC3、p62和PARP1的Western blotting分析[4]
用IC90浓度的picetanol孵育MOLT-4细胞。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。细胞裂解液采用哺乳动物细胞提取试剂盒制备。用Bradford蛋白测定法测定细胞裂解物中蛋白质的总浓度。蛋白样品（每个样品总蛋白65 μg）通过SDS-PAGE电泳分离（LC3和p62为12%，PARP1为10%），并转移到PVDF膜上。然后将膜与5%脱脂牛奶在TBS （Tris-Buffered Saline）中孵育1 h（室温）。用TBST （TBS中0.1% Tween20）洗涤后，用一抗孵育膜：兔抗lc3（1:4000）或小鼠抗p62（1:20 00）或兔抗parp1（1:1000）在4 °C下过夜，随后洗涤后，与适当的辣根过氧化物酶偶联的二抗（1:10 000）在RT下孵育2 小时。还与辣根过氧化物酶偶联的抗gapdh抗体（1:50 000，RT下1 小时）或辣根过氧化物酶偶联的抗β-肌动蛋白抗体（1:5万，RT下45 分钟）孵育膜作为上样对照。结合抗体采用化学发光过氧化物酶底物增强化学发光法检测。免疫反应蛋白条带密度分析采用Quantity One软件进行。

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免疫荧光分析[4]
免疫荧光分析按照前面的描述进行（Siedlecka-Kroplewska et al., 2013）。将MOLT-4细胞暴露于IC90浓度的piceatannol6、12、24、48、72和96 h。以未暴露于piceatannol的MOLT-4细胞为对照。细胞用兔抗lc3一抗（1:500）在RT下孵育1 h，随后用cy3偶联抗兔二抗（1:60）在RT下孵育1 h。然后用1 μg/ml Hoechst 33342在RT下黑暗中染色15 min。玻片制备的安装步骤采用permafuor安装介质进行。荧光显微镜检查载玻片。采用× 60油浸物镜获得图像。

Animal/Disease Models: Male C57BL/6 mice (40-50 g)[1]
Doses: 10, 20, and 40 mg/kg
Route of Administration: Intraperitoneally 1 h before LPS challenge
Experimental Results: Dramatically decreased the pulmonary edema induced by LPS.

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Animals and Experimental Establishment Male C57BL/6 mice (40–50 g) were were kept in a temperature and humidity-controlled room with an artificial light/dark cycle and allowed to adapt the new environment for 1 week. Briefly, total 50 mice were randomly divided into five groups (n = 10), including the control, LPS, piceatannol (10, 20, and 40 mg/kg) + LPS groups. To establish ALI model, LPS (5 mg/kg) was intraperitoneal injection in mice as previous described (Yu et al., 2019). The mice of piceatannol group were received intraperitoneally with 10, 20, and 40 mg/kg 1 h before LPS challenge while control group mice were injected by the equal volume of saline. Twenty-four hours later, mice were euthanized and the biological samples were collected for subsequent determination.

[1]. Protective Effect of Piceatannol Against Acute Lung Injury Through Protecting the Integrity of Air-Blood Barrier and Modulating the TLR4/NF-κB Signaling Pathway Activation. Front Pharmacol. 2020 Jan 22;10:1613.
[2]. The Therapeutic Potential of Piceatannol, a Natural Stilbene, in Metabolic Diseases: A Review. J Med Food. 2017 May;20(5):427-438.
[3]. In vitro efficacy of tyrosine kinase inhibitors: SYK and BCR-ABL inhibitors in lymphomas.Hematol Oncol. 2011 Sep;29(3):164-6.
[4]. Induction of autophagy, apoptosis and aquisition of resistance in response to piceatannol toxicity in MOLT-4 human leukemia cells. Toxicol In Vitro. 2019 Sep;59:12-25.

Piceatannol is a stilbenol that is trans-stilbene in which one of the phenyl groups is substituted by hydroxy groups at positions 3 and 4, while the other phenyl group is substituted by hydroxy groups at positions 3 and 5. It has a role as a protein kinase inhibitor, a tyrosine kinase inhibitor, an antineoplastic agent, a plant metabolite, a hypoglycemic agent, an apoptosis inducer and a geroprotector. It is a stilbenol, a member of resorcinols, a member of catechols and a polyphenol. It derives from a hydride of a trans-stilbene.
Piceatannol has been reported in Malus, Caragana tibetica, and other organisms with data available.
Piceatannol is a polyhydroxylated stilbene extract from the seeds of Euphorbia lagascae, which inhibits protein tyrosine kinase Syk and induces apoptosis. (NCI)
Piceatannol is a metabolite found in or produced by Saccharomyces cerevisiae.
See also: Wine grape (part of); Robinia pseudoacacia whole (part of); Tsuga canadensis bark (part of).

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Acute lung injury (ALI) is a common and complex inflammatory lung syndrome with higher morbidity and mortality rate. Piceatannol (PIC) has anti-inflammation and anti-oxidant properties. The study was designed to explore the effect and the action mechanisms of PIC on lipopolysaccharide (LPS)-induced ALI. Twenty-four hours after LPS challenge, mice from different treatment groups were euthanized, and the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and lung tissue samples were collected. Then the degree of pulmonary edema, lung pathological changes, myeloperoxidase (MPO) activity, and the production of pro-inflammatory cytokines were detected. Additionally, the messenger RNA (mRNA) expressions associated with cell adhesion molecules and tight junction were analyzed through quantitative real-time (qRT)-PCR, and the TLR4/NF-κB activation was examined by western blot. The results showed that PIC significantly inhibited LPS-induced lung edema, histopathological damage, MPO activity, cell infiltration, and pro-inflammatory cytokines production. Moreover, PIC notably suppressed mRNA expressions associated with inflammation and cell adhesion molecules. Furthermore, PIC also alleviated LPS-induced damage of air-blood barrier through reducing the levels of total proteins in BALF and recovering the expression of occludin and ZO-1 in the lung tissues. We also found that PIC remarkably restrained the LPS-induced TLR4/NF-κB pathway activation in lung tissues. In conclusion, PIC may be potential to treat LPS-induced acute lung injury (ALI) via regulating air-blood barrier and TLR4/NF-κB signaling pathway activation.[1]

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Metabolic disease comprises a set of risk factors highly associated with obesity and insulin resistance and is a consequence of central adiposity, hyperglycemia, and dyslipidemia. Furthermore, obesity increases the risk of the development of metabolic disease due to ectopic fat deposition, low-grade inflammation, and systemic energy disorders caused by dysregulated adipose tissue function. Piceatannol is a naturally occurring polyphenolic stilbene found in various fruits and vegetables and has been reported to exhibit anticancer and anti-inflammatory properties. In addition, recently reported beneficial effects of piceatannol on hypercholesterolemia, atherosclerosis, and angiogenesis underscore its therapeutic potential in cardiovascular disease. However, investigation of its role in metabolic disease is still in its infancy. This review intensively summarizes in vitro and in vivo studies supporting the potential therapeutic effects of piceatannol in metabolic disease, including inhibition of adipogenesis and lipid metabolism in adipocytes, and regulation of hyperlipidemia, hyperglycemia, insulin resistance, and fatty acid-induced inflammation and oxidative stress. [2]

C14H12O4

244.24

244.073

C, 68.85; H, 4.95; O, 26.20

10083-24-6

667639

Light yellow to khaki solid powder

1.5±0.1 g/cm3

507.3±38.0 °C at 760 mmHg

223-227ºC

252.2±21.4 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.801

2.69

80.92

4

4

2

18

282

0

O([H])C1=C(C([H])=C([H])C(=C1[H])/C(/[H])=C(\[H])/C1C([H])=C(C([H])=C(C=1[H])O[H])O[H])O[H]

CDRPUGZCRXZLFL-OWOJBTEDSA-N

InChI=1S/C14H12O4/c15-11-5-10(6-12(16)8-11)2-1-9-3-4-13(17)14(18)7-9/h1-8,15-18H/b2-1+

(E)-4-[2-(3,5Dihydroxyphenyl)ethenyl]1,2-benzenediol, 3,3′,4,5′-Tetrahydroxy-trans-stilbene

NSC 622471; NSC-622471; Piceatannol; NSC622471.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。