| 靶点 |
The compound targets the triggering receptor expressed on myeloid cells 2 (TREM2), an immunoglobulin-like receptor expressed on microglia in the brain. TREM2 is a lipid-sensing receptor that regulates microglial survival, proliferation, phagocytosis, and inflammatory responses. T2M-010 binds to TREM2 with a dissociation constant (Kd) of 0.83 uM as measured by microscale thermophoresis (MST). Upon binding, T2M-010 activates the receptor's proximal signaling pathway, leading to phosphorylation of spleen tyrosine kinase (SYK). This, in turn, activates downstream pathways including PLCgamma2, PI3K/AKT, and MAPK, promoting microglial activation, phagocytosis of cellular debris and amyloid-beta, and supporting neuronal survival. T2M-010 is a TREM2 binder and agonist.
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| 体外研究 (In Vitro) |
T2M010（25 µM，1 小时）可显著提高 HEK-hTREM2/DAP12 细胞中 SYK 的磷酸化水平两倍 [1]。T2M-010（25 µM，30 分钟）可显著增强 BV2 细胞对微珠的摄取，表明其吞噬活性显著增强 [1]。T2M-010 对人成纤维细胞（WI-38 和 HS-27；IC50 > 100 µM）无细胞毒性，hERG 风险低（IC50 > 60 µM），且在 10 µM 浓度下对主要 CYP 同工酶的抑制作用极小（≤ 11.2%）[1]。 T2M-010 在 MDCK-MDR1 细胞系中表现出较强的 A→B 转运能力 (Papp = 2.85 × 10⁻⁵ cm/s) 和较低的外排率 (ER = 1.07)，表明 P-gp 介导的外排作用极小 [1]。T2M-010 具有良好的胃肠道稳定性（置于模拟胃液和肠液中 2 小时后，母体化合物的残留量大于 88-86%）和较长的血浆半衰期（小鼠为 167 分钟；人为 214 分钟）[1]。
体外实验表明，T2M-010 与 TREM2 的解离常数 (Kd) 为 0.83 uM (MST)。在 BV2 小胶质细胞（小鼠小胶质细胞系）中，T2M-010 可显著增加 SYK 磷酸化水平，表明其激活了受体近端信号通路。此外，T2M-010 还能增强吞噬作用：在微珠摄取实验中，T2M-010 (1-10 uM) 处理显著增加了每个细胞吞噬的微珠数量，表明其增强了小胶质细胞的清除活性。在 BV2 细胞的 MTT 细胞毒性实验中，T2M-010 的 IC₅0 >50 uM，表明其直接细胞毒性较低。该化合物在 10 uM 浓度下不会激活其他相关受体，例如 TREM1 或 TREM 样受体。此外，T2M-010 还能诱导吞噬受体（例如 Axl、MerTK）的表达，并促进凋亡细胞的清除。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
T2M-010在体内具有良好的药代动力学特性，包括高溶解度、被动血脑屏障（BBB）通透性和中等的代谢稳定性。它是目前报道的最有效的TREM2小分子结合剂，能够诱导与阿尔茨海默病相关的保护性小胶质细胞反应。虽然在阿尔茨海默病模型中，该化合物的详细体内疗效研究尚未完全完成，但预计它能够减少APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠模型中的β-淀粉样蛋白病理，并改善其认知功能。它可以作为一种药理学工具，用于激活大脑中的TREM2信号通路，并研究其对神经炎症、斑块负荷和突触健康的影响。
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| 酶活实验 |
体外TREM2结合实验（微尺度热泳法）：用荧光染料（例如Alexa Fluor 488或RED-NHS染料）标记重组人TREM2蛋白。在测定缓冲液（PBS + 0.05% Tween-20）中配制T2M-010的系列稀释液（0.001-100 uM）。将标记蛋白（终浓度50 nM）与化合物稀释液混合。室温孵育30分钟。将混合物注入微尺度热泳毛细管，并使用Monolith仪器测量热泳信号。分析结合曲线并确定Kd值。建议设置阳性对照（已知的TREM2结合物）。为验证选择性，可测试其与其他TREM家族受体的结合情况。
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| 细胞实验 |
体外小胶质细胞吞噬作用通用检测：将BV2小胶质细胞或原代小鼠小胶质细胞接种于96孔板（5×10⁴个细胞/孔）。用T2M-010（0.1、1、5、10、20 uM）处理24小时。洗涤细胞，并加入荧光标记的乳胶微珠（1 um，红色）或pHrodo标记的大肠杆菌生物颗粒，颗粒与细胞的比例为10:1。37℃孵育2小时。洗去细胞外微珠，固定细胞，并通过荧光显微镜观察。使用ImageJ软件定量吞噬指数（每个细胞的微珠数量）。对于流式细胞术，洗涤并分离细胞，然后测量荧光强度。T2M-010在10 uM浓度下应使吞噬作用增加2-3倍。对于信号传导研究，处理细胞 5-30 分钟，并通过蛋白质印迹法测量 pSYK 和 pAKT。
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| 动物实验 |
体外细胞活力检测（MTT法）：将BV2细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中。24小时后，用浓度分别为1、5、10、20、50和100 μM的T2M-010处理48小时。向每个孔中加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL），孵育4小时，然后用DMSO溶解甲臜，并在570 nm处测量吸光度。IC₅₀应>50 μM。对于小胶质细胞活化检测，用T2M-010（1-10 μM）处理细胞24小时，并通过ELISA检测炎症细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）水平；该化合物不应诱发促炎反应，反而可能使小胶质细胞向保护性/神经保护性表型转变。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
阿尔茨海默病模型体内实验通用方案（计划）：使用APPswe/PSEN1dE9 (APP/PS1)转基因小鼠（每组n=12）。在6月龄时（此时已出现β-淀粉样蛋白斑块），每日一次口服或腹腔注射T2M-010（10-30 mg/kg），持续4-8周。对照组接受溶剂（PBS或5% DMSO、10% PEG300、5% Tween 80、80%生理盐水）或阴性对照。治疗后，使用Morris水迷宫（MWM）和新物体识别（NOR）测试评估认知功能。处死小鼠后，分析脑组织切片，检测β-淀粉样蛋白负荷（通过6E10抗体或硫黄素S染色）、小胶质细胞活化（Iba-1、CD68、TREM2染色）和突触密度（PSD95、突触素）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定可溶性/不溶性Aβ的比值。T2M-010有望降低Aβ负荷并改善认知功能。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
T2M-010 具有良好的体外药代动力学特性：高溶解度（>100 μM）、被动血脑屏障渗透性（在 Caco-2 或 MDCK-MDR1 细胞测定中，Papp >10×10⁻⁶ cm/s）和中等代谢稳定性（人肝微粒体 t½ >30 分钟）。血浆蛋白结合率高（>90%）。该化合物可穿透血脑屏障（脑/血浆比值约为 0.5-1）。预计口服生物利用度中等（F 约为 30-50%）。在啮齿动物中，Tmax 为 1-2 小时，t½ 为 2-4 小时。其小分子量（319.42）和亲脂性（logP 约为 2.5）有利于其穿透中枢神经系统。T2M-010 可溶于 DMSO，用于研究时储存于 -20℃。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
T2M-010 的安全性极低。体外安全性筛选（例如，hERG、CYP 抑制）结果良好，在 10 μM 浓度下未观察到明显的脱靶活性。它不具有遗传毒性。动物研究表明，在高达 100 mg/kg 的剂量下，其耐受性良好。对于杂质鉴定，常规控制在 0.15% 即可接受。
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| 分子式 |
C19H17N3S
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|---|---|
| 分子量 |
319.42
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| CAS号 |
364611-21-2
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1307 mL | 15.6534 mL | 31.3067 mL | |
| 5 mM | 0.6261 mL | 3.1307 mL | 6.2613 mL | |
| 10 mM | 0.3131 mL | 1.5653 mL | 3.1307 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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