CD88 (C5a receptor) – Potent antagonist (inhibits C5a-induced neutrophil myeloperoxidase release with IC50 of 22 nM; inhibits C5a-induced chemotaxis with IC50 of 75 nM) [2]
Mas-related gene X2 (MrgX2) – Low-affinity agonist (induces degranulation at concentrations ≥30 nM) [1]

- 在人LAD2肥大细胞中，PMX-53（1 μM）以剂量依赖性方式诱导脱颗粒（β-氨基己糖苷酶释放），最大释放率约为60%；PMX-53S（线性乱序肽）也诱导脱颗粒但程度较低；PMX-53C（Trp-Arg替换为Ala-dArg）即使在1 μM浓度下也不诱导脱颗粒 [1]
- 在LAD2肥大细胞中，PMX-53（100 nM和1 μM）诱导Ca²⁺动员；PMX-53C（100 nM）无活性，1 μM时仅诱导微小且不稳定的反应 [1]
- 在HMC-1细胞中，PMX-53（10 nM）几乎完全抑制C5a（10 nM）诱导的Ca²⁺动员，但对C3a（10 nM）诱导的反应无影响；PMX-53C和PMX-53S对C5a或C3a诱导的反应均无影响 [1]
- 在稳定表达CD88的RBL-2H3细胞中，PMX-53（10 nM）抑制C5a（1 nM）诱导的脱颗粒 [1]
- 在LAD2细胞中，G蛋白拮抗剂2（GPA-2，1 μM，30分钟）显著抑制PMX-53诱导的脱颗粒；百日咳毒素（100 ng/mL，16小时）也抑制PMX-53介导的脱颗粒 [1]
- PMX-53（≥30 nM）在LAD2肥大细胞、CD34⁺细胞来源的原代人肥大细胞以及稳定表达MrgX2的RBL-2H3细胞中诱导脱颗粒，但不激活表达MrgX1的RBL-2H3细胞 [1]
- 在表达MrgX2的RBL-2H3细胞中，PMX-53（1 μM）引起持续的Ca²⁺动员，其幅度和持续时间与在LAD2细胞和CD34⁺来源肥大细胞中观察到的一致；PMX-53C无作用 [1]
- 将Trp替换为Ala、Arg替换为dArg（PMX-53C）后，PMX-53抑制HMC-1细胞中C5a诱导的Ca²⁺动员以及诱导表达MrgX2的RBL-2H3细胞脱颗粒的能力均丧失 [1]

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PMX-53 的 IC50 值分别为 22 nM 和 75 nM，是一种强效 CD88 拮抗剂，可阻断 C5a 诱导的中性粒细胞髓过氧化物酶释放和趋化性 [1]。 PMX-53 (10 nM) 可防止 HMC-1 细胞被 C5a 兴奋，但浓度大于 30 nM 时，它会促进 CD34+ 细胞来源的肥大细胞、表达 MrgX2 的 RBL 细胞和 LAD2 肥大细胞的脱颗粒。用 Ala 和 Arg 替换 Trp，用 dArg 替换 PMX-53 可防止表达 MrgX2 的 RBL-2H3 细胞脱粒，并防止 HMC-1 细胞中 C5a 诱导的 Ca2+ 动员 [1]。

- 在大鼠中，局部预给予PMX-53（每只爪子60或180 μg，足底内，刺激前30分钟）抑制酵母聚糖（每只爪子30 μg）诱导的机械性痛觉超敏反应；效果在酵母聚糖注射后持续6小时，24小时后减弱。治疗性给予PMX-53（每只爪子60 μg，酵母聚糖后3天给予）显著减少持续的酵母聚糖诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）抑制酵母聚糖激活血清（1:300稀释）和重组C5a（40 ng）诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）抑制LPS（每只爪子0.5 μg）和角叉菜胶（每只爪子100 μg）诱导的机械性痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）预给药减少了先前免疫大鼠中抗原（卵清蛋白，每只爪子25 μg）激发诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）不改变PGE₂（100 ng）或多巴胺（3 μg）诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）减少酵母聚糖、酵母聚糖激活血清和C5a诱导的中性粒细胞迁移（通过髓过氧化物酶活性测定），但不减少角叉菜胶或LPS诱导的迁移 [2]
- 在小鼠中，全身给予PMX-53（0.3、1或3 mg/kg，皮下，刺激前30分钟）以剂量依赖性方式减少酵母聚糖（关节内30 μg）诱导的关节痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（3 mg/kg，皮下，刺激前30分钟）减少酵母聚糖诱导的中性粒细胞向胫跗关节的迁移（通过MPO活性测定），并减少TNF-α（关节内100 pg）诱导的关节痛觉超敏反应 [2]
- 在ApoE⁻/⁻小鼠（正常饮食）中，慢性给予PMX-53（3 mg/kg皮下，每周3次，加饮水中约1 mg/kg/天口服，从5周龄至30周龄）减少头臂动脉病变大小（内膜面积和内膜/中膜比值减少约40%，P<0.05），并减少斑块脂质含量（P<0.05）[5]
- PMX-53治疗ApoE⁻/⁻小鼠不影响体重或血清胆固醇水平 [5]
- 在ApoE⁻/⁻小鼠中，PMX-53治疗使升主动脉正面染色显示的富脂质病变面积平均减少约40%，但由于未治疗对照组内变异性较大，未达到统计学显著性 [5]

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酵母菌素 E2 是强烈伤害感受器的直接作用介质，不会被 PMX-53（0.3-3 mg/kg；皮下注射；一次；Wistar 染色）治疗所抑制。另一方面，PMX-53（每爪 60-180 μg）可抑制由杠杆、角叉菜胶、脂多糖 (LPS)、强化物和多巴胺引起的过度伤害感受。给予仓粉（3 mg/kg）后，药代动力学研究显示，PMX-53（3D53）在5分钟内开始在骨骼中积聚，并在20分钟内达到其最大血药浓度约0.3 μM。在这里，衰退阶段分为两半，持续大约 70 分钟[3]。 PMX-53 (3D53) 的非链式变体的 Kd 为 30 nM，可与分离的小鼠中性粒细胞结合（小鼠 C5a 结合 Kd）。

- 脱颗粒测定：LAD2细胞（每孔5×10³个）或CD34⁺来源肥大细胞在含人IgE（1 μg/mL）的96孔板中铺板过夜。细胞洗涤后与不同浓度肽孵育30分钟。将20 μL上清液与20 μL 1 mM对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷在37°C孵育1.5小时，测定β-氨基己糖苷酶释放。加入250 μL 0.1 M Na₂CO₃/NaHCO₃缓冲液终止反应，在405 nm处读取吸光度 [1]
- 钙动员测定：细胞（0.2×10⁶个人肥大细胞或10⁶个RBL-2H3细胞）与1 μM indo-1乙酰氧甲酯和1 μM Pluronic酸F-127在室温下避光孵育30分钟。细胞洗涤后重悬于HEPES缓冲盐水中。使用分光光度计在激发波长355 nm、发射波长410 nm处测定Ca²⁺动员 [1]
- 稳定表达MrgX1或MrgX2的RBL-2H3细胞：通过核转染将编码HA标签受体质粒转入RBL-2H3细胞，在G418（1 mg/mL）存在下培养，使用抗HA抗体进行细胞分选 [1]
- RT-PCR检测MrgX1和MrgX2：使用TRIzol从肥大细胞中提取总RNA，经DNase I处理，反转录为cDNA，用特异性引物扩增。人β-肌动蛋白引物作为内参 [1]

- 大鼠机械性痛觉超敏反应测试：成年雄性Wistar大鼠（180-200 g）接受足底内注射（100 μL）。使用恒压大鼠足测试（施加20 mmHg压力于足底表面）测定机械性痛觉超敏反应。测量刺激前（零时）和刺激后的冻结反应潜伏期。痛觉超敏强度以反应时间减少量量化 [2]
- 大鼠痛觉超敏研究给药方案：PMX-53（每只爪子60或180 μg，足底内）在酵母聚糖（30 μg）、LPS（0.5 μg）、角叉菜胶（100 μg）或卵清蛋白（免疫大鼠中25 μg）刺激前30分钟给予。治疗性研究中，PMX-53（每只爪子60 μg）在酵母聚糖注射后第3天给予。对于ZAS和C5a研究，PMX-53（每只爪子60 μg）在ZAS（1:300稀释）或C5a（40 ng）前30分钟给予 [2]
- 中性粒细胞耗竭：大鼠在刺激足底内注射前72小时静脉注射长春碱硫酸盐（0.8 mg/kg）[2]
- 小鼠关节痛觉超敏模型：雄性C57BL/6小鼠（20-25 g）轻度麻醉，将酵母聚糖（30 μg于5 μL）或TNF-α（100 pg于5 μL）注射入右侧胫跗关节。使用配备改良大尖端（4.15 mm²）的电子压力计施加于足底表面诱导胫跗关节背屈，测定机械性痛觉超敏反应。PMX-53（0.3、1或3 mg/kg，皮下）或溶剂（生理盐水）在刺激前30分钟给予 [2]
- MPO测定：组织在EDTA/NaCl缓冲液（pH 4.7）中匀浆，4°C下3000g离心15分钟。沉淀重悬于0.5%十六烷基三甲基溴化铵缓冲液（pH 5.4），液氮冷冻解冻三次，4°C下3000g离心15分钟。上清液用于MPO测定，使用1.6 mM四甲基联苯胺、80 mM NaPO₄、0.5 mM过氧化氢。加入4 M H₂SO₄终止反应，在450 nm处读取吸光度 [2]
- ELISA测定细胞因子：足底皮肤在含蛋白酶抑制剂的缓冲液中匀浆。微孔板包被羊抗大鼠TNF-α或IL-1β抗体，4°C过夜。加入标准和样品室温孵育2小时，然后加入生物素化多克隆抗体（1:500）孵育1小时，再加入亲和素-辣根过氧化物酶（1:5000）孵育30分钟。加入OPD底物15分钟，H₂SO₄终止反应，在490 nm处读取吸光度 [2]
- ApoE⁻/⁻小鼠动脉粥样硬化模型：纯合雌性ApoE⁻/⁻小鼠（C57BL/6J背景）自由进食正常饮食。PMX-53溶于高压灭菌水（6 mg/L）用于口服给药，溶于无菌5%葡萄糖溶液（3 mg/mL）用于皮下给药。小鼠从5周龄至30周龄接受PMX-53治疗：饮水中给药（约每日口服剂量1 mg/kg/天）加每周三次皮下注射PMX-53（3 mg/kg）。对照组接受溶剂（无菌水中的5%葡萄糖）注射和高压灭菌饮用水 [5]
- 头臂动脉组织学分析：动脉用4%缓冲甲醛灌注固定，包埋于冷冻保护剂包埋介质中，冷冻后切成10 μm横切片。切片经Miller弹性蛋白Van Gieson染色、Gabe醛品红染色、天狼星红染色（胶原）和油红O染色（脂质）。使用ImageJ软件进行形态计量学分析。测量外弹性膜、内弹性膜和管腔围成的面积，计算血管总面积、中膜面积和内膜/中膜比值 [5]
- 升主动脉正面染色：主动脉根部和升主动脉纵向切开，油红O染色，用微针固定在蜡上，病变面积（红色染色）表示为血管总面积的百分比 [5]
- 头臂动脉免疫组化：切片用含5%山羊血清的PBS封闭30分钟，与一抗（抗CD68标记巨噬细胞、抗von Willebrand因子标记内皮细胞、抗α-SM肌动蛋白标记平滑肌细胞、抗CD88、抗C5L2）4°C孵育过夜，然后与Alexa Fluor偶联的二抗（1:500）孵育显色。阴性对照用无关IgG替换一抗 [5]
- 主动脉细胞流式细胞术：从25周龄ApoE⁻/⁻小鼠取主动脉，用Liberase Blendzyme TL在37°C酶解离30分钟。单细胞悬液用抗小鼠CD88-Alexa Fluor 647和抗小鼠CD31-PE或抗小鼠F4/80-PE在冰上染色30分钟，用抗CD16/CD32抗体封闭，在流式细胞仪上分析 [5]

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动物/疾病模型：成年雄性Wistar大鼠（体重180-200 g）注射酵母聚糖[2]
剂量：0.3 mg/kg（即0.3 nM）可抑制小鼠C5a诱导的趋化性，IC50值为0.5 nM[3]。，1 mg/kg或3 mg/kg。
给药途径：皮下注射；原发性
实验结果：抑制酵母聚糖激活的血清和C5a引起的过度伤害感受。

PMX-53在多种炎症性疾病动物模型中具有口服活性，并在I期和IIa期临床试验中显示出安全性和耐受性 [5]

- PMX-53在I期和IIa期临床试验中显示出安全性和耐受性 [5]
- 这三篇文献中未描述PMX-53的LD50、肝毒性、肾毒性、药物-药物相互作用或血浆蛋白结合数据 [1][2][5]

[1]. PMX-53 as a dual CD88 antagonist and an agonist for Mas-related gene 2 (MrgX2) in human mast cells. Mol Pharmacol. 2011 Jun;79(6):1005-13.

[2]. Role of complement C5a in mechanical inflammatory hypernociception: potential use of C5a receptor antagonists to control inflammatory pain. Br J Pharmacol. 2008 Mar;153(5):1043-53.

[3]. Synthetic small-molecule complement inhibitors. Curr Opin Investig Drugs. 2004 Nov;5(11):1164-73.

[4]. Low-molecular-weight peptidic and cyclic antagonists of the receptor for the complement factor C5a. J Med Chem. 1999 Jun 3;42(11):1965-74.

[5]. Complement C5a inhibition reduces atherosclerosis in ApoE-/- mice. FASEB J. 2011 Jul;25(7):2447-55.

[6]. Complement c5a receptor facilitates cancer metastasis by altering T-cell responses in the metastatic niche. Cancer Res. 2014 Jul 1;74(13):3454-65.

- PMX-53是一种环状六肽（Ac-Phe-[Orn-Pro-dCha-Trp-Arg]），基于C5a的末端氨基酸序列设计，以天然人C5a的C末端区域为模型 [1][2][5]
- PMX-53是一种强效的小分子肽类受体拮抗剂，对CD88具有高度选择性 [5]
- PMX-53抑制C5a诱导的中性粒细胞髓过氧化物酶释放和趋化作用，IC50值分别为22 nM和75 nM [2]
- PMX-53在多种小鼠和大鼠炎症性疾病模型中有效，包括类风湿关节炎、炎症性肠病、缺血再灌注损伤和神经退行性疾病 [2][5]
- PMX-53已被证明能有效减少C5a介导的炎症反应和多种炎症性疾病的病理发展 [5]
- PMX-53目前正在进行治疗骨关节炎的临床试验 [1]
- PMX-53是一种双功能分子：是CD88的高亲和力拮抗剂，但却是MrgX2的低亲和力激动剂。低浓度时，PMX-53作为CD88拮抗剂阻断炎症；较高浓度（≥30 nM）时，通过MrgX2模拟防御素对肥大细胞的激活作用，促进先天免疫 [1]
- PMX-53的CD88拮抗活性和MrgX2激动活性均需要Trp和Arg残基 [1]
- 不表达MrgX2的小鼠肥大细胞对PMX-53的激活无反应，表明PMX-53对人MrgX2具有特异性 [1]

C47H65N11O7

896.088510274887

895.506

C, 63.00; H, 7.31; N, 17.19; O, 12.50

219639-75-5

852629-88-0

6918468

Ac-Phe-{Orn}-Pro-{dCha}-Trp-Arg (Lactam bridge: Orn2-Arg6)

Ac-F-{Orn}-P-{dCha}-WR (Lactam bridge: Orn2-Arg6)
Ac-Phe-Orn(1)-Pro-D-Cha-Trp-Arg-(1)

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.684

0.81

275

9

8

13

65

1680

6

CC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@H]2CCCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@@H]3CCCN3C2=O)CC4CCCCC4)CC5=CNC6=CC=CC=C65)CCCN=C(N)N

YOKBGCTZYPOSQM-HPSWDUTRSA-N

InChI=1S/C47H65N11O7/c1-29(59)53-37(25-30-13-4-2-5-14-30)42(61)55-36-20-11-22-50-41(60)35(19-10-23-51-47(48)49)54-44(63)39(27-32-28-52-34-18-9-8-17-33(32)34)56-43(62)38(26-31-15-6-3-7-16-31)57-45(64)40-21-12-24-58(40)46(36)65/h2,4-5,8-9,13-14,17-18,28,31,35-40,52H,3,6-7,10-12,15-16,19-27H2,1H3,(H,50,60)(H,53,59)(H,54,63)(H,55,61)(H,56,62)(H,57,64)(H4,48,49,51)/t35-,36-,37-,38+,39-,40-/m0/s1

(S)-N-((3R,6S,9S,15S,20aS)-6-((1H-indol-3-yl)methyl)-3-(cyclohexylmethyl)-9-(3-guanidinopropyl)-1,4,7,10,16-pentaoxoicosahydropyrrolo[1,2-a][1,4,7,10,13]pentaazacyclooctadecin-15-yl)-2-acetamido-3-phenylpropanamide

PMX 53; PMX 53; PMX53; FBK4LNR4Q7; Ac-Phe-cyclo(Orn-Pro-D-Cha-Trp-Arg); AcPhe(ornithine-Pro-cyclohexylamine-Trp-Arg; AcPhe(ornithine-Pro-cyclohexylamine-Trp-Arg)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~200 mg/mL (~223.19 mM)
H2O : ~2.5 mg/mL (~2.79 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。