- CD88 (C5a receptor) – Potent antagonist (inhibits C5a-induced neutrophil myeloperoxidase release with IC50 of 22 nM; inhibits C5a-induced chemotaxis with IC50 of 75 nM) [2]
- Mas-related gene X2 (MrgX2) – Low-affinity agonist (induces degranulation at concentrations ≥30 nM) [1]

- 在人LAD2肥大细胞中，PMX-53（1 μM）以剂量依赖性方式诱导脱颗粒（β-氨基己糖苷酶释放），最大释放率约为60%；PMX-53S（线性乱序肽）也诱导脱颗粒但程度较低；PMX-53C（Trp-Arg替换为Ala-dArg）即使在1 μM浓度下也不诱导脱颗粒 [1]
- 在LAD2肥大细胞中，PMX-53（100 nM和1 μM）诱导Ca²⁺动员；PMX-53C（100 nM）无活性，1 μM时仅诱导微小且不稳定的反应 [1]
- 在HMC-1细胞中，PMX-53（10 nM）几乎完全抑制C5a（10 nM）诱导的Ca²⁺动员，但对C3a（10 nM）诱导的反应无影响；PMX-53C和PMX-53S对C5a或C3a诱导的反应均无影响 [1]
- 在稳定表达CD88的RBL-2H3细胞中，PMX-53（10 nM）抑制C5a（1 nM）诱导的脱颗粒 [1]
- 在LAD2细胞中，G蛋白拮抗剂2（GPA-2，1 μM，30分钟）显著抑制PMX-53诱导的脱颗粒；百日咳毒素（100 ng/mL，16小时）也抑制PMX-53介导的脱颗粒 [1]
- PMX-53（≥30 nM）在LAD2肥大细胞、CD34⁺细胞来源的原代人肥大细胞以及稳定表达MrgX2的RBL-2H3细胞中诱导脱颗粒，但不激活表达MrgX1的RBL-2H3细胞 [1]
- 在表达MrgX2的RBL-2H3细胞中，PMX-53（1 μM）引起持续的Ca²⁺动员，其幅度和持续时间与在LAD2细胞和CD34⁺来源肥大细胞中观察到的一致；PMX-53C无作用 [1]
- 将Trp替换为Ala、Arg替换为dArg（PMX-53C）后，PMX-53抑制HMC-1细胞中C5a诱导的Ca²⁺动员以及诱导表达MrgX2的RBL-2H3细胞脱颗粒的能力均丧失 [1]

- 在大鼠中，局部预给予PMX-53（每只爪子60或180 μg，足底内，刺激前30分钟）抑制酵母聚糖（每只爪子30 μg）诱导的机械性痛觉超敏反应；效果在酵母聚糖注射后持续6小时，24小时后减弱。治疗性给予PMX-53（每只爪子60 μg，酵母聚糖后3天给予）显著减少持续的酵母聚糖诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）抑制酵母聚糖激活血清（1:300稀释）和重组C5a（40 ng）诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）抑制LPS（每只爪子0.5 μg）和角叉菜胶（每只爪子100 μg）诱导的机械性痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）预给药减少了先前免疫大鼠中抗原（卵清蛋白，每只爪子25 μg）激发诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）不改变PGE₂（100 ng）或多巴胺（3 μg）诱导的痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（每只爪子60 μg）减少酵母聚糖、酵母聚糖激活血清和C5a诱导的中性粒细胞迁移（通过髓过氧化物酶活性测定），但不减少角叉菜胶或LPS诱导的迁移 [2]
- 在小鼠中，全身给予PMX-53（0.3、1或3 mg/kg，皮下，刺激前30分钟）以剂量依赖性方式减少酵母聚糖（关节内30 μg）诱导的关节痛觉超敏反应 [2]
- PMX-53（3 mg/kg，皮下，刺激前30分钟）减少酵母聚糖诱导的中性粒细胞向胫跗关节的迁移（通过MPO活性测定），并减少TNF-α（关节内100 pg）诱导的关节痛觉超敏反应 [2]
- 在ApoE⁻/⁻小鼠（正常饮食）中，慢性给予PMX-53（3 mg/kg皮下，每周3次，加饮水中约1 mg/kg/天口服，从5周龄至30周龄）减少头臂动脉病变大小（内膜面积和内膜/中膜比值减少约40%，P<0.05），并减少斑块脂质含量（P<0.05）[5]
- PMX-53治疗ApoE⁻/⁻小鼠不影响体重或血清胆固醇水平 [5]
- 在ApoE⁻/⁻小鼠中，PMX-53治疗使升主动脉正面染色显示的富脂质病变面积平均减少约40%，但由于未治疗对照组内变异性较大，未达到统计学显著性 [5]

- 脱颗粒测定：LAD2细胞（每孔5×10³个）或CD34⁺来源肥大细胞在含人IgE（1 μg/mL）的96孔板中铺板过夜。细胞洗涤后与不同浓度肽孵育30分钟。将20 μL上清液与20 μL 1 mM对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷在37°C孵育1.5小时，测定β-氨基己糖苷酶释放。加入250 μL 0.1 M Na₂CO₃/NaHCO₃缓冲液终止反应，在405 nm处读取吸光度 [1]
- 钙动员测定：细胞（0.2×10⁶个人肥大细胞或10⁶个RBL-2H3细胞）与1 μM indo-1乙酰氧甲酯和1 μM Pluronic酸F-127在室温下避光孵育30分钟。细胞洗涤后重悬于HEPES缓冲盐水中。使用分光光度计在激发波长355 nm、发射波长410 nm处测定Ca²⁺动员 [1]
- 稳定表达MrgX1或MrgX2的RBL-2H3细胞：通过核转染将编码HA标签受体质粒转入RBL-2H3细胞，在G418（1 mg/mL）存在下培养，使用抗HA抗体进行细胞分选 [1]
- RT-PCR检测MrgX1和MrgX2：使用TRIzol从肥大细胞中提取总RNA，经DNase I处理，反转录为cDNA，用特异性引物扩增。人β-肌动蛋白引物作为内参 [1]

- 大鼠机械性痛觉超敏反应测试：成年雄性Wistar大鼠（180-200 g）接受足底内注射（100 μL）。使用恒压大鼠足测试（施加20 mmHg压力于足底表面）测定机械性痛觉超敏反应。测量刺激前（零时）和刺激后的冻结反应潜伏期。痛觉超敏强度以反应时间减少量量化 [2]
- 大鼠痛觉超敏研究给药方案：PMX-53（每只爪子60或180 μg，足底内）在酵母聚糖（30 μg）、LPS（0.5 μg）、角叉菜胶（100 μg）或卵清蛋白（免疫大鼠中25 μg）刺激前30分钟给予。治疗性研究中，PMX-53（每只爪子60 μg）在酵母聚糖注射后第3天给予。对于ZAS和C5a研究，PMX-53（每只爪子60 μg）在ZAS（1:300稀释）或C5a（40 ng）前30分钟给予 [2]
- 中性粒细胞耗竭：大鼠在刺激足底内注射前72小时静脉注射长春碱硫酸盐（0.8 mg/kg）[2]
- 小鼠关节痛觉超敏模型：雄性C57BL/6小鼠（20-25 g）轻度麻醉，将酵母聚糖（30 μg于5 μL）或TNF-α（100 pg于5 μL）注射入右侧胫跗关节。使用配备改良大尖端（4.15 mm²）的电子压力计施加于足底表面诱导胫跗关节背屈，测定机械性痛觉超敏反应。PMX-53（0.3、1或3 mg/kg，皮下）或溶剂（生理盐水）在刺激前30分钟给予 [2]
- MPO测定：组织在EDTA/NaCl缓冲液（pH 4.7）中匀浆，4°C下3000g离心15分钟。沉淀重悬于0.5%十六烷基三甲基溴化铵缓冲液（pH 5.4），液氮冷冻解冻三次，4°C下3000g离心15分钟。上清液用于MPO测定，使用1.6 mM四甲基联苯胺、80 mM NaPO₄、0.5 mM过氧化氢。加入4 M H₂SO₄终止反应，在450 nm处读取吸光度 [2]
- ELISA测定细胞因子：足底皮肤在含蛋白酶抑制剂的缓冲液中匀浆。微孔板包被羊抗大鼠TNF-α或IL-1β抗体，4°C过夜。加入标准和样品室温孵育2小时，然后加入生物素化多克隆抗体（1:500）孵育1小时，再加入亲和素-辣根过氧化物酶（1:5000）孵育30分钟。加入OPD底物15分钟，H₂SO₄终止反应，在490 nm处读取吸光度 [2]
- ApoE⁻/⁻小鼠动脉粥样硬化模型：纯合雌性ApoE⁻/⁻小鼠（C57BL/6J背景）自由进食正常饮食。PMX-53溶于高压灭菌水（6 mg/L）用于口服给药，溶于无菌5%葡萄糖溶液（3 mg/mL）用于皮下给药。小鼠从5周龄至30周龄接受PMX-53治疗：饮水中给药（约每日口服剂量1 mg/kg/天）加每周三次皮下注射PMX-53（3 mg/kg）。对照组接受溶剂（无菌水中的5%葡萄糖）注射和高压灭菌饮用水 [5]
- 头臂动脉组织学分析：动脉用4%缓冲甲醛灌注固定，包埋于冷冻保护剂包埋介质中，冷冻后切成10 μm横切片。切片经Miller弹性蛋白Van Gieson染色、Gabe醛品红染色、天狼星红染色（胶原）和油红O染色（脂质）。使用ImageJ软件进行形态计量学分析。测量外弹性膜、内弹性膜和管腔围成的面积，计算血管总面积、中膜面积和内膜/中膜比值 [5]
- 升主动脉正面染色：主动脉根部和升主动脉纵向切开，油红O染色，用微针固定在蜡上，病变面积（红色染色）表示为血管总面积的百分比 [5]
- 头臂动脉免疫组化：切片用含5%山羊血清的PBS封闭30分钟，与一抗（抗CD68标记巨噬细胞、抗von Willebrand因子标记内皮细胞、抗α-SM肌动蛋白标记平滑肌细胞、抗CD88、抗C5L2）4°C孵育过夜，然后与Alexa Fluor偶联的二抗（1:500）孵育显色。阴性对照用无关IgG替换一抗 [5]
- 主动脉细胞流式细胞术：从25周龄ApoE⁻/⁻小鼠取主动脉，用Liberase Blendzyme TL在37°C酶解离30分钟。单细胞悬液用抗小鼠CD88-Alexa Fluor 647和抗小鼠CD31-PE或抗小鼠F4/80-PE在冰上染色30分钟，用抗CD16/CD32抗体封闭，在流式细胞仪上分析 [5]

- PMX-53在I期和IIa期临床试验中显示出安全性和耐受性 [5]
- 这三篇文献中未描述PMX-53的LD50、肝毒性、肾毒性、药物-药物相互作用或血浆蛋白结合数据 [1][2][5]

[1]. PMX-53 as a dual CD88 antagonist and an agonist for Mas-related gene 2 (MrgX2) in human mast cells. Mol Pharmacol. 2011 Jun;79(6):1005-13.

[2]. Role of complement C5a in mechanical inflammatory hypernociception: potential use of C5a receptor antagonists to control inflammatory pain. Br J Pharmacol. 2008 Mar;153(5):1043-53.

[3]. Synthetic small-molecule complement inhibitors. Curr Opin Investig Drugs. 2004 Nov;5(11):1164-73.

[4]. Low-molecular-weight peptidic and cyclic antagonists of the receptor for the complement factor C5a. J Med Chem. 1999 Jun 3;42(11):1965-74.

[5]. Complement C5a inhibition reduces atherosclerosis in ApoE-/- mice. FASEB J. 2011 Jul;25(7):2447-55.

[6]. Complement c5a receptor facilitates cancer metastasis by altering T-cell responses in the metastatic niche. Cancer Res. 2014 Jul 1;74(13):3454-65.

- PMX-53是一种环状六肽（Ac-Phe-[Orn-Pro-dCha-Trp-Arg]），基于C5a的末端氨基酸序列设计，以天然人C5a的C末端区域为模型 [1][2][5]
- PMX-53是一种强效的小分子肽类受体拮抗剂，对CD88具有高度选择性 [5]
- PMX-53抑制C5a诱导的中性粒细胞髓过氧化物酶释放和趋化作用，IC50值分别为22 nM和75 nM [2]
- PMX-53在多种小鼠和大鼠炎症性疾病模型中有效，包括类风湿关节炎、炎症性肠病、缺血再灌注损伤和神经退行性疾病 [2][5]
- PMX-53已被证明能有效减少C5a介导的炎症反应和多种炎症性疾病的病理发展 [5]
- PMX-53目前正在进行治疗骨关节炎的临床试验 [1]
- PMX-53是一种双功能分子：是CD88的高亲和力拮抗剂，但却是MrgX2的低亲和力激动剂。低浓度时，PMX-53作为CD88拮抗剂阻断炎症；较高浓度（≥30 nM）时，通过MrgX2模拟防御素对肥大细胞的激活作用，促进先天免疫 [1]
- PMX-53的CD88拮抗活性和MrgX2激动活性均需要Trp和Arg残基 [1]
- 不表达MrgX2的小鼠肥大细胞对PMX-53的激活无反应，表明PMX-53对人MrgX2具有特异性 [1]

C49H69N11O9

956.14

852629-88-0

219639-75-5

Ac-Phe-{Orn}-Pro-{dCha}-Trp-Arg (Lactam bridge: Orn2-Arg6)

Ac-Phe-Orn(1)-Pro-D-Cha-Trp-Arg-(1).CH3CO2H

Typically exists as solids at room temperature

O=C1[C@@H]2CCCN2C([C@H](CCCNC([C@H](CCC/N=C(\N)/N)NC([C@H](CC2=CNC3C=CC=CC2=3)NC(C(CC2CCCCC2)N1)=O)=O)=O)NC([C@H](CC1C=CC=CC=1)NC(C)=O)=O)=O.OC(C)=O

3D53 monoacetate; PMX-53 acetate; 852629-88-0; PMX 53 acetate(219639-75-5 free base); PMX 53 (monoacetate); orb1296311;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。