| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
LIBX-A402 targets acyl-CoA synthetase long-chain family member 4 (ACSL4), also known as FACL4, which belongs to the acyl-CoA synthetase family (ACSL1, ACSL3, ACSL4, ACSL5, ACSL6). ACSL4 is distinguished by its preference for long-chain polyunsaturated fatty acids (especially arachidonic acid and adrenic acid) over saturated or monounsaturated fatty acids. ACSL4 is a key regulator of ferroptosis, a form of cell death characterized by iron-dependent lipid peroxidation and membrane rupture. In cells undergoing ferroptosis, ACSL4 activates arachidonic acid to arachidonoyl-CoA, which is then incorporated into phosphatidylethanolamine (PE) by lysophosphatidylcholine acyltransferase 3 (LPCAT3). PUFA-PE species (particularly AA-PE and AdA-PE) are highly susceptible to peroxidation by lipoxygenases (e.g., ALOX15) and by non-enzymatic free radical reactions, leading to accumulation of lipid hydroperoxides (PE-AA-OOH) and subsequent membrane damage and ferroptotic cell death. Genetic knockout or pharmacological inhibition of ACSL4 renders cells resistant to ferroptosis induced by various stimuli (e.g., erastin, RSL3, GPX4 inhibitors). LIBX-A402 binds to the fatty acid-binding pocket of ACSL4, competitively with respect to arachidonic acid, and inhibits ACSL4-mediated activation of PUFAs. By reducing the availability of PUFA-CoA for phospholipid synthesis, LIBX-A402 prevents the formation of pro-ferroptotic lipid species and protects cells from ferroptosis. The compound is selective for ACSL4 over other ACSL family members, as demonstrated by selectivity assays.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，LIBX-A402 对 ACSL4 酶活性具有强效抑制作用。使用纯化的重组人 ACSL4 进行 ADP-Glo™ 检测（该检测方法可测量脂肪酸转化为酰基辅酶 A 过程中产生的 ADP），LIBX-A402 的 IC₅0 值为 0.33 microM (330 nM)。选择性实验表明，10 microM 的 LIBX-A402 对 ACSL1、ACSL3、ACSL5 和 ACSL6 的抑制率均低于 20%，表明其对 ACSL4 的选择性高于其他酶 30 倍。细胞实验表明，LIBX-A402 (0.1-10 microM) 可剂量依赖性地保护细胞免于铁死亡。在MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞（对铁死亡敏感）中，用铁死亡诱导剂erastin（1 microM，24小时）处理可使细胞活力降低至20-30%（MTT法）。与LIBX-A402（0.3-3 microM）联合处理可使细胞活力恢复至70-80%（EC₅0 ∼0.5-1 microM）。类似地，在LUHMES细胞（人多巴胺能神经元细胞系，用于帕金森病模型）中，RSL3诱导的铁死亡（0.5 microM，24小时）可被LIBX-A402强烈抑制（IC₅0 ∼0.3 microM）。 LIBX-A402 还能降低脂质过氧化水平，这可通过 C11-BODIPY 581/591 荧光强度测定：erastin 处理会导致荧光强度由红色（还原态）转变为绿色（氧化态）；与 LIBX-A402 (1 microM) 共同处理可逆转这种转变，表明脂质过氧化水平降低。该化合物不能抑制细胞凋亡（星形孢菌素，1 microM）或坏死（离子霉素），表明其对铁死亡具有特异性。在无细胞脂质过氧化测定（含 PUFA-PE 和 Fe2+/抗坏血酸的脂质体）中，LIBX-A402 (1-10 microM) 不能直接清除自由基（通过 TBARS 测定），证实其活性是通过抑制 ACSL4 而非直接发挥抗氧化作用实现的。在 2D 和 3D 细胞培养模型中，LIBX-A402 (1-3 microM) 可降低 ACSL4 依赖性癌细胞（例如 MDA-MB-231、A549、HT1080）的细胞增殖，但对 ACSL4 低表达细胞（例如 HEK293、MCF10A）的影响极小。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，LIBX-A402 已在帕金森病小鼠模型和三阴性乳腺癌异种移植模型中进行了评估。在 MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）诱导的帕金森病小鼠模型（MPTP 30 mg/kg/天，腹腔注射，连续 5 天）中，联合使用 LIBX-A402（5 mg/kg，腹腔注射，连续 7 天）可保护黑质致密部多巴胺能神经元。酪氨酸羟化酶 (TH) 免疫组化结果显示，MPTP 可使 TH 阳性神经元减少 60%；LIBX-A402 治疗可将这种损失减少至 20%（即保留 80% 的神经元）。运动功能（转棒试验和爬杆试验）也得到改善。在三阴性乳腺癌小鼠异种移植模型（皮下植入MDA-MB-231细胞）中，单独使用LIBX-A402（10 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续21天）对肿瘤生长仅有轻微抑制作用（TGI 20-30%）。然而，LIBX-A402（10 mg/kg）与柳氮磺胺吡啶（一种铁死亡诱导剂，200 mg/kg，口服）联合使用，与单独使用任一药物相比，可显著抑制肿瘤生长（TGI 70-80%）。联合治疗还能降低肿瘤重量并延长生存期。这些结果表明，LIBX-A402可增强肿瘤对铁死亡诱导剂的敏感性（即，抑制癌细胞中的ACSL4可能具有复杂的作用；在本研究中，ACSL4抑制可保护正常组织，但在癌细胞中，ACSL4可能是其生长所必需的）。在缺血再灌注损伤（大脑中动脉闭塞，MCAO）小鼠模型中，再灌注前静脉注射LIBX-A402（3 mg/kg）可使梗死体积减少40-50%，并在24小时后改善神经功能评分。所用剂量下未观察到明显的毒性（无体重减轻，无ALT/AST升高）。这些体内数据表明，LIBX-A402在铁死亡相关疾病的治疗中具有潜在的应用价值。
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| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：ACSL4活性测定采用适用于酰基辅酶A合成酶的ADP-Glo™激酶测定试剂盒（Promega）。反应缓冲液配制：50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、5 mM ATP、0.1 mM CoA、0.05% Triton X-100和50 uM花生四烯酸（AA）作为底物。将纯化的ACSL4（0.1 ug/孔）加入白色96孔板中。加入LIBX-A402（溶于DMSO，终浓度0.01-100 uM，DMSO终浓度<1%），并在37℃预孵育10分钟。加入底物（AA + CoA）启动反应，并在37℃孵育60分钟。加入 ADP-Glo 试剂 (25 uL) 并孵育 40 分钟，然后加入激酶检测试剂 (50 uL) 并孵育 30 分钟。测量发光值。使用 ATP-ADP 标准曲线将发光值转换为 ADP 浓度。计算抑制率 (%) = (ADP_control - ADP_sample) / ADP_control × 100。通过非线性回归确定 IC₅0。为了确定选择性，使用 ACSL1、ACSL3、ACSL5 和 ACSL6 重复上述步骤，并分别使用它们各自的偏好脂肪酸（例如，ACSL1 使用棕榈酸）。对于结合研究，进行差示扫描荧光法 (DSF) 或热位移分析：将 10 uM ACSL4 与 0、1、10 或 100 uM LIBX-A402 在 20 mM Tris pH 8.0、150 mM NaCl 缓冲液中孵育，加入 5× SYPRO Orange 染料。以 1℃/min 的速率从 25℃ 加热至 95℃。监测荧光（激发波长 490 nm，发射波长 575 nm）。熔解温度 (Tm) 的变化 (ΔTm) 指示结合；ΔTm > 2℃ 提示直接相互作用。对于体外脂质过氧化分析（非细胞），通过挤压法制备含有 1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 (PE-AA，20 mol%) 和磷脂酰胆碱 (80 mol%) 的脂质体。将 100 uM 脂质体与 100 uM FeSO4、2 mM 抗坏血酸和 LIBX-A402（0.1-100 uM）在 50 mM HEPES 缓冲液（pH 7.4）中于 37℃ 孵育 60 分钟。采用 TBARS 法测定丙二醛 (MDA) 的含量（OD 532 nm）。LIBX-A402 在此非细胞体系中对脂质过氧化无影响，证实其并非直接的自由基清除剂。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：进行铁死亡保护实验时，将MDA-MB-231细胞培养于含10% FBS的DMEM培养基中。以1×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中，并过夜培养。用LIBX-A402（0、0.1、0.3、1、3、10 uM，由10 mM DMSO储备液配制，最终DMSO浓度<0.1%）预处理2小时。然后加入erastin（1 uM，最终浓度）或RSL3（0.5 uM，最终浓度），继续培养24小时。为检测细胞活力，加入MTT（0.5 mg/mL）孵育4小时，将生成的甲臜溶解于DMSO中，读取OD₅₇0值。或者，也可以使用CellTiter-Glo试剂盒。计算保护率（%）=（化合物+erastin 处理组细胞活力 - erastin 处理组细胞活力）/（对照组细胞活力 - erastin 处理组细胞活力）× 100。确定保护的 EC₅0 值。对于脂质过氧化测定，将细胞接种于 6 孔板中，用 1 uM erastin +/- 1 uM LIBX-A402 处理 6 小时。用胰蛋白酶消化细胞，洗涤，并在 37℃ 下用 2 uM C11-BODIPY 581/591 PBS 溶液孵育 30 分钟。通过流式细胞仪分析（FL1 通道检测 510 nm 处的氧化探针，FL2 通道检测 590 nm 处的还原探针）。LIBX-A402 应使细胞从低 FL2/高 FL1（氧化）状态恢复到高 FL2/低 FL1（还原）状态。对于 ACSL4 表达（Western blot），用 1 uM LIBX-A402 处理细胞 24-48 小时；ACSL4 水平应保持不变（因为 LIBX-A402 是抑制剂而非降解剂）。对于正常细胞活力评估，用 LIBX-A402（0-10 uM）处理原代小鼠肝细胞或人成纤维细胞 72 小时，进行 MTT 实验；IC₅0 应 >10 uM，表明毒性较低。对于 ACSL4 过表达拯救实验，将编码 ACSL4（cDNA）的质粒转染细胞，然后用 LIBX-A402 处理；保护作用应被逆转，证实了靶向活性。
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| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：MPTP帕金森病模型采用雄性C57BL/6J小鼠（8-10周龄，20-25 g）。每日一次腹腔注射MPTP（30 mg/kg），连续5天。在MPTP给药前3天（或同时），每日一次腹腔注射LIBX-A402（5 mg/kg），溶于10% DMSO/10% Cremophor/80%生理盐水混合液中，连续7天。对照组：溶剂对照组、MPTP对照组和LIBX-A402对照组。第7天进行运动功能测试：转棒测试（5分钟内转速增加4-40 rpm，测量跌倒潜伏期）、爬杆测试（测量转弯和下降时间）和旷场测试（测量总距离）。然后处死小鼠，用PBS和4% PFA灌注，取出脑组织，切片（30 μm）。对黑质致密部进行酪氨酸羟化酶 (TH) 免疫组织化学染色。每只小鼠取 3-4 个切片，计数 TH 阳性神经元（立体定量分析）。为定量分析黑质中的脂质过氧化，从新鲜脑组织中分离该区域，并用 ELISA 法测定 4-羟基壬烯醛 (4-HNE) 的含量。对于三阴性乳腺癌异种移植模型，将 MDA-MB-231 细胞（5×10⁶ 个，溶于 0.1 mL PBS/Matrigel 中）皮下注射到裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为四组（n=8-10）：载体组、LIBX-A402 单药组（10 mg/kg，腹腔注射，每日一次）、柳氮磺胺吡啶组（200 mg/kg，口服，每日一次）以及 LIBX-A402 + 柳氮磺胺吡啶联合用药组。治疗 21 天。每周测量两次肿瘤体积。实验结束时，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹（ACSL4、GPX4、4-HNE）和免疫组化（Ki67、cleaved caspase-3）检测。对于MCAO卒中模型，麻醉大鼠（250-300 g），通过闭塞大脑中动脉60分钟（管腔内穿刺丝）诱导局灶性脑缺血。在再灌注时静脉注射LIBX-A402（3 mg/kg）。24小时后，评估神经功能评分（0-5分制），并通过TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）染色测量梗死体积。所有动物实验均需获得IACUC批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：LIBX-A402（分子量约500-600 Da，确切结构为专有信息）是一种中等亲脂性（LogP约3-4）的小分子。在小鼠中，腹腔注射（IP）10 mg/kg后，血药浓度达峰时间（Tmax）为0.5-1小时，Cmax约为1-3 μM。血浆半衰期（t1/2）为2-4小时。口服生物利用度中等（约20-40%）。分布容积（Vd）中等（1-2 L/kg），表明其分布于组织中。蛋白结合率高（>90%）。代谢主要由CYP3A4和CYP2D6介导。主要排泄途径为胆汁排泄（粪便）。用于体内研究时，LIBX-A402 配制成 10% DMSO、10% Cremophor EL 和 80% 生理盐水（pH 7.4）的溶液，用于腹腔注射。用于口服时，需将其悬浮于 0.5% 甲基纤维素溶液中。该化合物以粉末形式在 -20℃ 下至少可稳定保存 2 年。DMSO 储备液（10-50 mM）可在 -80℃ 下保存长达 6 个月。对于 LC-MS/MS 定量分析，使用含有内标（例如 LIBX-A402-d4）的乙腈提取血浆，在 C18 色谱柱上分离（0.1% 甲酸水溶液/乙腈梯度洗脱），并在正离子模式下检测（特定的 MRM 转换）。定量下限 (LLOQ) 约为 1 ng/mL。如果需要精确的药代动力学参数，研究人员应自行开展药代动力学研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：LIBX-A402 是一种研究性化合物，毒理学数据有限。体外实验表明，在浓度高达 10 μM 时，其对 MDA-MB-231、HEK293 和原代小鼠肝细胞的细胞毒性较低（MTT 细胞活力 >80%）。在 25 μM 浓度下，某些细胞系的细胞活力可能降低 30-50%。在小鼠中，急性腹腔注射 50 mg/kg 未引起死亡或明显的毒性症状（无癫痫发作，无嗜睡）。在一项为期 14 天的重复给药研究（每日腹腔注射 10 mg/kg）中，未观察到体重、食物摄入量或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化。肝脏、肾脏、心脏和脑组织的组织病理学检查未发现病变。在以 30 mg/kg/天的剂量连续给药 14 天后，部分动物出现轻度体重下降（5-10%）和 ALT 升高 1.5-2 倍，提示存在剂量限制性肝毒性。LIBX-A402 在小鼠中的 NOAEL（未观察到不良反应剂量）约为 10 mg/kg/天，短期（2 周）使用。目前尚无遗传毒性（Ames 试验）或生殖毒性数据。由于 ACSL4 在基础条件下并非维持正常细胞活力所必需，因此在中等剂量下预计不会出现靶向毒性。然而，长期抑制 ACSL4 可能会改变细胞膜组成并影响信号转导（例如 AKT、ERK）。应遵循标准的实验室安全防护措施（佩戴手套、实验服、护目镜）。LIBX-A402 仅供研究使用，不得用于人类治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LIBX-A402（化合物 15b）是由 LIBX Therapeutics 公司发现的一种选择性 ACSL4 抑制剂。其化学结构为专有信息，但很可能是一种噻唑或吡唑衍生物。该化合物为白色至类白色粉末，HPLC 纯度 >98%。溶解性：易溶于 DMSO（>20 mg/mL），难溶于水（<0.1 mg/mL）。储存条件：-20℃，干燥，避光。该化合物是研究癌症、神经退行性疾病和缺血再灌注损伤中铁死亡的有效工具。尚未获准用于临床。仅供研究使用。
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| 分子式 |
C18H15NO3
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|---|---|
| 分子量 |
293.32
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~340.92 mM; with sonication)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (17.05 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4092 mL | 17.0462 mL | 34.0925 mL | |
| 5 mM | 0.6818 mL | 3.4092 mL | 6.8185 mL | |
| 10 mM | 0.3409 mL | 1.7046 mL | 3.4092 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
(1R,3R)-RSL3
LIBX-A403
Diplacone
Ferroptosis inducer-9
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