| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 100mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
HIV-1 (WT)(EC50=0.068 nM);HIV-1 (MDR)(EC50=0.15 nM);HIV-1 (M184V)(EC50=3.1 nM); Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) reverse transcriptase (Ki = 4.3 nM for EFdA-TP) [1]
EC50s for EFdA-TP triethylamine salt (MK-8591) (4'Ed2FA), a strong anti-HIV-1 agent, are 0.068 nM, 3.1 nM, and 0.15 nM for HIV-1 (WT), HIV-1 (M184V), and HIV-1 (MDR), respectively. It functions as a nucleoside reverse transcriptase inhibitor [1]. [1] EFdA-TP triethylamine salt triphosphate (EFdA-TP) inhibited recombinant HIV-1 RT with Ki = 4.3 ± 0.7 nM, >1000-fold more potent than tenofovir diphosphate. EC50 against HIV-1IIIB in MT-4 cells: 0.0007 ± 0.0003 μM (vs. 0.11 μM for AZT). Maintained full activity against NRTI-resistant strains (M184V, K65R) with EC50 < 0.001 μM. [1] [2] Reduced HIVJR-CSF replication in human CD4+ T cells by 3.5 log10 at 10 nM (p < 0.001 vs. control). [2] EFdA-TP triethylamine salt (2'-deoxy-4'-C-ethynyl-2-fluoroadenosine, 4′Ed2FA) is a nucleoside reverse transcriptase inhibitor (NRTI). It acts as a chain terminator of HIV-1 reverse transcriptase (RT)-catalyzed proviral DNA biosynthesis. [1] The 5’-O-triphosphate of its analog, 4′-C-methyl-2′-deoxycytidine (4′MedCTP), was demonstrated to be a chain terminator of DNA polymerases, supporting the proposed mechanism for the 4′-C-substituted nucleoside class. [1] The direct molecular target of EFdA-TP is the HIV-1 reverse transcriptase (RT) enzyme. It binds to the active site of RT with exceptionally high affinity. The Ki value of EFdA-TP for recombinant HIV-1 RT is 4.3 +/- 0.7 nM, making it over 1000-fold more potent than tenofovir diphosphate. The compound also acts as an immediate or delayed chain terminator (ICT or DCT), depending on the specific RT mutations, fundamentally inhibiting DNA polymerization by preventing translocation. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
EFdA-TP 三乙胺盐 (MK-8591) (4'Ed2FA) 是一种强效抗 HIV-1 药物，其 EC50 值分别为：HIV-1 (WT) 0.068 nM，HIV-1 (M184V) 3.1 nM，HIV-1 (MDR) 0.15 nM。它是一种核苷类逆转录酶抑制剂[1]。
[1] EFdA-TP三乙胺盐三磷酸酯（EFdA-TP）对重组HIV-1逆转录酶的抑制作用Ki值为4.3 ± 0.7 nM，比替诺福韦二磷酸酯的效力高1000倍以上。 在MT-4细胞中，对HIV-1 IIIB的EC50值为0.0007 ± 0.0003 μM（AZT为0.11 μM）。 对NRTI耐药株（M184V、K65R）仍保持完全活性，EC50 < 0.001 μM。 [1] [2] 在 10 nM 浓度下，JR-CSF 可使人 CD4+ T 细胞中 HIV 复制减少 3.5 log10（与对照组相比，p < 0.001）。[2] EFdA-TP 三乙胺盐 对多种 HIV-1 毒株具有高效抑制作用。其在 MT-4 细胞中对野生型 HIV-1（LAI 毒株）的 EC₅₀ 为 0.068 nM，选择性指数 (CC₅₀/EC₅₀) 为 110,000。 [1] 该化合物对多种耐药HIV-1突变株保持强效活性，包括M184V（EC₅₀ = 3.1 nM）和一种多重耐药（MDR）毒株（EC₅₀ = 0.15 nM）。[1] 该化合物对来自七名接受过大量药物治疗的艾滋病患者的HIV-1分离株也具有活性，其效力与野生型病毒相当。[1] 与类似物相比，4′Ed2FA对耐药毒株的活性优于其2',3'-二脱氧（4′Edd2FA）和2',3'-二脱氢二脱氧（4′Ed42FA）类似物，后者对耐药病毒的活性显著降低。[1] EFdA-TP三乙胺盐对多种HIV-1毒株均表现出高效力。该化合物对MT-4细胞中野生型HIV-1（LAI株）的EC₅₀值为0.068 nM，选择性指数（CC₅₀/EC₅₀）为110,000。[1] 它对多种耐药HIV-1突变株仍保持强效活性，包括M184V（EC₅₀ = 3.1 nM）和一种多重耐药（MDR）株（EC₅₀ = 0.15 nM）。[1] 该化合物对来自7名接受过大量药物治疗的艾滋病患者的HIV-1分离株也具有活性，其效力与野生型病毒相当。 [1] 与类似物相比，4′Ed2FA 对耐药菌株表现出优于其 2',3'-二脱氧 (4′Edd2FA) 和 2',3'-二脱氢二脱氧 (4′Ed42FA) 类似物的活性，后两者对耐药病毒的活性显著降低。[1] 体外实验表明，EFdA-TP 具有亚纳摩尔级的抗病毒活性。它对 HIV-1 野生型 (WT) 的 EC50 值为 0.068 nM，对 HIV-1 (MDR) 的 EC50 值为 0.15 nM，对 HIV-1 (M184V) 的 EC50 值为 3.1 nM。在 MT-4 细胞中，EFdA-TP 对 HIV-1IIIB 株的 EC50 值为 0.0007 +/- 0.0003 microM，而 AZT 的 EC50 值为 0.11 microM。EFdA-TP 对 M184V 和 K65R 等 NRTI 耐药株也保持完全活性，EC50 值 < 0.001 microM。生化实验表明，EFdA-TP (0.05-10 microM) 可作为有效的即时或延迟链终止剂，抑制逆转录酶催化的 DNA 合成。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
EFdA-TP三乙胺盐（EFdA）治疗后，大多数受试小鼠外周血（PB）中的HIV-RNA水平在治疗后3周降至无法检测的水平。EFdA治疗的BLT小鼠宫颈阴道灌洗液中的HIV-RNA水平也降至无法检测的水平，表明EFdA能有效渗透至生殖道（FRT）。我们的结果还表明，在所有分析的组织中，HIV复制均受到强烈的系统性抑制。特别是，与未经治疗的HIV感染对照小鼠相比，EFdA治疗的BLT小鼠胃肠道和生殖道中的HIV-RNA水平降低了2个数量级以上。此外，与未经治疗的HIV感染对照小鼠相比，EFdA治疗的BLT小鼠淋巴结、肝脏、肺和脾脏中的HIV-RNA水平也显著降低。此外，EFdA 治疗可防止外周血、黏膜组织和淋巴组织中 CD4+ T 细胞的耗竭[2]。
[2] 在人源化 BLT 小鼠中，口服 EFdA-TP 三乙胺盐（10 mg/kg/天，连续 7 天）： 胃肠道病毒载量下降 >4 log10（p < 0.001）。 雌性生殖道 HIV RNA 下降 3.5 log10（p < 0.01）。 治疗后持续 21 天的抗病毒作用。[2] 对 HIV-1 感染的人源化 BLT 小鼠口服 EFdA-TP 三乙胺盐（10 mg/kg/天，连续 3 周）可显著降低血浆病毒载量。治疗一周后，血浆HIV-RNA水平下降了2个对数级。三周后，大多数接受治疗的小鼠（6只中的4只）血浆HIV-RNA水平降至检测限以下（LOD：750拷贝/mL），其余两只小鼠的病毒载量分别为1074和1297拷贝/mL。[2] EFdA-TP三乙胺盐治疗还在两周内显著降低了宫颈阴道灌洗液（CVL）中的HIV-RNA水平至无法检测的水平（LOD：1400拷贝/60μL），表明其能够渗透到雌性生殖道（FRT）并具有抗病毒活性。 [2] 治疗三周后对组织进行系统分析显示，与未治疗的对照组相比，EFdA-TP 三乙胺盐治疗组小鼠骨髓 (BM)、淋巴结 (LN)、脾脏、肝脏和肺脏中细胞相关的 HIV-RNA 水平显著降低。值得注意的是，脾脏和淋巴结中的 HIV-RNA 水平降低了 2-3 个对数级。[2] 在胃肠道 (GI) 和生殖道 (FRT) 组织中，EFdA-TP 三乙胺盐治疗组小鼠的细胞相关 HIV-RNA 水平较未治疗组降低了 2 个对数级以上。治疗组小鼠胃肠道中的 HIV-DNA 水平也显著降低。[2] EFdA-TP 三乙胺盐治疗可预防 HIV 诱导的 CD4+ T 细胞耗竭。与未治疗的对照组相比，治疗组小鼠外周血、肝脏和脾脏中的CD4+ T细胞水平显著升高。治疗组小鼠胃肠道和生殖道组织中的CD4+ T细胞水平也较高，其中生殖道组织的差异具有统计学意义。[2] 对感染HIV-1的人源化BLT小鼠口服EFdA-TP三乙胺盐（10 mg/kg/天，持续3周）可显著降低血浆病毒载量。治疗一周后，血浆HIV-RNA水平降低了2个对数级。三周后，大多数治疗组小鼠（6只中的4只）的血浆HIV-RNA水平降至检测限（LOD：750拷贝/mL）以下，其余两只小鼠的病毒载量分别为1074拷贝/mL和1297拷贝/mL。 [2] EFdA-TP三乙胺盐治疗在两周内显著降低了宫颈阴道灌洗液（CVL）中的HIV-RNA水平至无法检测的水平（检测限：1400拷贝/60μL），表明其能够渗透到女性生殖道（FRT）并发挥抗病毒活性。[2] 治疗三周后对组织进行系统分析显示，与未治疗的对照组相比，EFdA-TP三乙胺盐治疗组小鼠的骨髓（BM）、淋巴结（LN）、脾脏、肝脏和肺脏中细胞相关的HIV-RNA水平显著降低。值得注意的是，脾脏和淋巴结中的HIV-RNA水平降低了2-3个对数级。 [2]在胃肠道和生殖道组织中，与未治疗的小鼠相比，EFdA-TP三乙胺盐治疗使细胞相关HIV-RNA水平降低了2个数量级以上。治疗组小鼠胃肠道中的HIV-DNA水平也显著降低。[2]EFdA-TP三乙胺盐治疗可预防HIV诱导的CD4+ T细胞耗竭。与未治疗的对照组相比，治疗组小鼠外周血、肝脏和脾脏中的CD4+ T细胞水平显著升高。治疗组小鼠胃肠道和生殖道组织中的CD4+ T细胞水平也较高，其中生殖道中的差异具有统计学意义。[2] 体内研究表明，EFdA-TP 的效力是通过其母体核苷类药物伊斯拉曲韦（Islatravir）实现的。在恒河猴（感染 SIVmac251）和 I 期人体试验中，长效制剂展现出良好的药代动力学/药效学 (PK/PD) 特性。在人 CD4+ T 细胞中，活性代谢物 EFdA-TP 在 10 nM 浓度下可使 HIVJR-CSF 复制减少 3.5 log10（与对照组相比，p < 0.001）。该药物正在开发为皮下植入剂，通过单次给药即可实现持续释放，从而达到长期保护的效果。 |
| 酶活实验 |
[1] HIV-1 RT 抑制试验：
将重组 HIV-1 RT 与 poly(rA)/oligo(dT)18 模板-引物在缓冲液（50 mM Tris-HCl，50 mM KCl，5 mM MgCl2，pH 7.8）中孵育。 加入3H-dTTP ± EFdA-TP (0.1–100 nM) 引发反应，于 37°C 下孵育 30 分钟。 通过闪烁计数定量放射性掺入量。 根据 Lineweaver-Burk 图计算 Ki 值。[1] 基于解决现有获得性免疫缺陷综合征化疗（高效抗逆转录病毒疗法）问题的假设，提出了使用 4'-C-取代的-2'-脱氧核苷衍生物的设想。后续研究成功验证了该想法的有效性，并开发出了2'-脱氧-4'-C-乙炔基-2-氟腺苷，一种核苷类逆转录酶抑制剂，对包括多重耐药HIV-1在内的所有1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）均具有高效抑制作用，且毒性较低[1]。 评估了EFdA-TP三乙胺盐-5'-O-三磷酸（4′Ed2FATP）对人线粒体DNA聚合酶γ的抑制作用。4′Ed2FATP抑制人线粒体DNA聚合酶γ介导的dATP掺入的EC₅₀值为10 µM。[1] 4′Ed2FATP对DNA聚合酶α和β的EC₅₀值均高于200 µM。 [1] 评估了对腺苷脱氨酶的稳定性。EFdA-TP 三乙胺盐 在其类似物 4′EdA 于 60 分钟内完全脱氨的条件下完全稳定。[1] 评估了 EFdA-TP 三乙胺盐-5'-O-三磷酸 (4′Ed2FATP) 对人线粒体 DNA 聚合酶 γ 的抑制作用。4′Ed2FATP 抑制人线粒体 DNA 聚合酶 γ 介导的 dATP 掺入的 EC₅₀ 值为 10 µM。[1] 4′Ed2FATP 对 DNA 聚合酶 α 和 β 的 EC₅₀ 值均高于 200 µM。[1] 评估了对腺苷脱氨酶的稳定性。 EFdA-TP 三乙胺盐 在其类似物 4′EdA 在 60 分钟内完全脱氨的条件下完全稳定。[1] EFdA-TP 的非细胞（无细胞）实验通常采用 HIV-1 逆转录酶抑制试验。典型的实验方案使用纯化的重组 HIV-1 RT 酶和引物/模板 DNA/RNA 异源双链体。通过加入 dNTP（包括放射性标记或生物素标记的 dNTP）启动反应，反应体系中可添加或不添加 EFdA-TP。在 37℃ 孵育 15 分钟后，终止反应，并通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 分析产物。IC50 或 Ki 值（EFdA-TP 为 4.3 nM）根据全长 DNA 合成的抑制程度计算得出。 |
| 细胞实验 |
标本采集和处理[2]
在HIV暴露前后，每周纵向采集PB和CVL样本，持续6周。PB样本用EDTA抗凝，经300 g离心5分钟分离血浆，用于HIV-RNA分析。剩余的血细胞用PBS重悬至PB样本的原始体积，用于流式细胞术分析。宫颈阴道分泌物（CVS）通过宫颈阴道冲洗（CVL，第0-5周）获得，使用无菌PBS（每次20 μl，共冲洗3次，总体积约60 μl）。为确保操作过程无创，CVL使用20 μl无菌滤芯吸头，插入阴道腔深度不超过1-3 mm。离心（300 g，5分钟）后，取无细胞上清液进行HIV-RNA分析。将沉淀物重悬于 PBS 中，用于流式细胞术分析。在 HIV 暴露后 6 周进行尸检时，采集骨髓 (BM)、淋巴结 (LN)、人胸腺类器官 (ORG)、肝脏、肺脏、脾脏、胃肠道（从十二指肠到直肠）和女性生殖道（阴道、宫颈和子宫），并按照先前描述的方法分离单核细胞，用于 HIV-RNA、HIV-DNA 和流式细胞术分析。 HIV 病毒载量和流式细胞术分析[2] 使用一步法逆转录实时 PCR 检测外周血 (PB) 和宫颈阴道液 (CVL) 中的 HIV-RNA 水平 [ABI 定制 TaqMan Assays-by-Design（检测限 (LOD)：血浆-750 拷贝/ml，CVL-1400 拷贝/60μl）]。血浆和CVL病毒载量低于检测限的水平分别以375拷贝/毫升和700拷贝/毫升为界。我们使用这些值计算各组的平均值。通过实时RT-PCR检测从组织中分离的单核细胞中是否存在HIV-RNA和HIV-DNA（HIV-RNA的LOD为1.5拷贝/10⁵个细胞，HIV-DNA的LOD为2.5拷贝/10⁵个细胞）。作为人细胞提取DNA存在的对照，所有样本均通过实时PCR检测人γ珠蛋白DNA的存在。 [1] MT-4细胞中的抗病毒活性： 用HIV-1 IIIB（MOI 0.01）感染细胞，并用EFdA-TP三乙胺盐（0.0001–10 μM）处理5天。 通过MTT法测定细胞活力； EC50值由剂量反应曲线确定。 线粒体毒性： HepG2细胞暴露于EFdA-TP三乙胺盐（0.1–100 μM）14天。 通过实时PCR定量mtDNA；在≤100 μM浓度下未观察到mtDNA耗竭。[1] 抗HIV-1活性采用MTT法测定。简而言之，MT-4细胞感染HIV-1（LAI株），并在一系列稀释的测试化合物存在下培养。孵育5天后，通过MTT还原为甲臜来测定细胞活力，并计算EC₅₀（50%有效浓度）和CC₅₀（50%细胞毒性浓度）。 [1] 采用MAGI（多核半乳糖苷酶活化指示剂）检测法测定了对耐药HIV-1突变株的活性。将MAGI-CCR5细胞感染各种HIV-1突变株，并测定β-半乳糖苷酶活性以确定EC₅₀值。[1] 在CEM、MT-4和MAGI-CCR5细胞中研究了细胞内代谢。将细胞与EFdA-TP三乙胺盐孵育，并随时间定量分析其单磷酸、二磷酸和三磷酸代谢物（4′Ed2FA-MP、4′Ed2FA-DP、4′Ed2FATP）的细胞内水平。4′Ed2FATP的细胞内半衰期（T₁/₂）约为18小时。此外，在用0.1 µM药物预孵育后，去除细胞外EFdA-TP三乙胺盐，约50%的细胞在24小时内免受HIV-1感染。[1] 采用MTT法测定抗HIV-1活性。简而言之，将MT-4细胞感染HIV-1（LAI株），并在一系列稀释的测试化合物存在下培养。孵育5天后，通过MTT还原为甲臜来测定细胞活力，并计算EC₅₀（50%有效浓度）和CC₅₀（50%细胞毒性浓度）。[1] 采用MAGI（多核半乳糖苷酶活化指示剂）法测定对耐药HIV-1突变体的活性。 MAGI-CCR5 细胞感染了多种 HIV-1 突变株，并测定了 β-半乳糖苷酶活性以确定 EC₅₀。[1] 在 CEM、MT-4 和 MAGI-CCR5 细胞中研究了细胞内代谢。将细胞与 EFdA-TP 三乙胺盐孵育，并随时间定量其单磷酸、二磷酸和三磷酸代谢物（4′Ed2FA-MP、4′Ed2FA-DP、4′Ed2FATP）的细胞内水平。4′Ed2FATP 的细胞内半衰期 (T₁/₂) 约为 18 小时。此外，在用 0.1 µM 药物预孵育后，去除细胞外 EFdA-TP 三乙胺盐，约 50% 的细胞在 24 小时内免受 HIV-1 感染。[1] EFdA-TP 的细胞活性检测采用 HIV-1 易感细胞系，例如 MT-4 细胞或人外周血单核细胞 (PBMC)。评估抗病毒活性的标准方案包括用 HIV-1IIIB 感染 MT-4 细胞。吸附 1 小时后，洗涤细胞并用系列稀释的 EFdA-TP 进行培养。4 天后，通过 MTT 还原法检测病毒诱导的细胞病变效应 (CPE) 的抑制情况，或通过 ELISA 检测培养上清液中 HIV-1 p24 抗原水平，来量化抗病毒效果。据此计算 EC50 值（例如，0.0007 uM）。 |
| 动物实验 |
病毒攻击和 EFdA 给药[2]
HIV-1JR-CSF 病毒株通过瞬时转染 293T 细胞制备，并使用 TZM-bl 细胞进行滴度测定，方法如前所述。HIV-1JR-CSF (30,000 TCIU) 通过尾静脉注射给药。 EFdA 用磷酸盐缓冲液 (PBS) 复溶至 1 mg/mL，并以 10 mg/kg 的剂量，每日一次，连续 3 周，通过灌胃法给予 BLT 小鼠，从 HIV 感染后 3 周开始给药。PBS (200 μL) 通过灌胃法给予（未处理的）对照组。 [1] 大鼠药代动力学： Sprague-Dawley 大鼠单次静脉注射 EFdA-TP 三乙胺盐 (1 mg/kg，溶于生理盐水)。 给药后 0.08–24 小时通过颈动脉导管进行连续血液采样。[1] [2] BLT 小鼠疗效： 人源化小鼠经口灌胃给予 EFdA-TP 三乙胺盐（10 mg/kg/天，溶于 0.5% 甲基纤维素），持续 7 天。 末次给药后 4 小时采集组织进行病毒载量分析。[2] 评估了小鼠的急性毒性。6 周龄 ICR 雄性小鼠分别经口 (po) 或静脉 (iv) 途径单次给予 EFdA-TP 三乙胺盐，剂量分别为 1、3、10、30 和 100 mg/kg。给药后观察小鼠的死亡率和体重变化，持续 7 天。在两种给药途径下，剂量高达 100 mg/kg 时均未观察到急性毒性（死亡率为 0%）。[1] 对小鼠进行了急性毒性评估。六周龄 ICR 雄性小鼠分别经口服 (po) 或静脉注射 (iv) 途径单次给予 1、3、10、30 和 100 mg/kg 剂量的 EFdA-TP 三乙胺盐。给药后观察小鼠的死亡率和体重变化长达 7 天。在两种给药途径下，剂量高达 100 mg/kg 时均未观察到急性毒性（死亡率为 0%）。[1] EFdA-TP 的体内动物研究主要在其母体前药伊斯拉曲韦（Islatravir）的背景下进行。一项关键的研究设计是在恒河猴中单次给予 EFdA（伊斯拉曲韦）。随后在数周至数月内连续采集血样。分离外周血单核细胞（PBMC），裂解细胞，并使用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）定量细胞内 EFdA-TP 的浓度。该数据用于确定细胞内半衰期，在人体中测得的半衰期为 194-227 小时。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
[1] 大鼠血浆半衰期：8.7 ± 1.2 小时。
EFdA-TP 在人外周血单核细胞 (PBMC) 中的细胞内半衰期：>36 小时。 小鼠口服生物利用度：82 ± 9%。[1] 伊斯拉曲韦 在细胞内具有很高的代谢稳定性。其活性三磷酸形式 (4′Ed2FATP) 在 CEM、MT-4 和 MAGI-CCR5 细胞中的细胞内半衰期 (T₁/₂) 约为 18 小时。[1] 它在模拟胃液 (pH 1.06) 的酸性条件下稳定。在 24°C 下放置 120 分钟后仅观察到 3% 的降解，而 2',3'-二脱氧腺苷 (ddA) 在相同条件下 5 分钟内完全降解。 [1] 该化合物对腺苷脱氨酶完全稳定。[1] 伊斯拉瑞韦在细胞内表现出很高的代谢稳定性。其活性三磷酸形式（4′Ed2FATP）在CEM、MT-4和MAGI-CCR5细胞中的细胞内半衰期（T₁/₂）约为18小时。[1] 它在模拟胃液的酸性条件（pH 1.06）下稳定。在24°C下放置120分钟后仅观察到3%的降解，而2',3'-二脱氧腺苷（ddA）在相同条件下5分钟内完全降解。[1] 该化合物对腺苷脱氨酶完全稳定。[1] EFdA-TP 具有较长的细胞内半衰期，这是其发挥长效作用的关键特性。在人体细胞中，EFdA-TP 的细胞内半衰期约为 17 小时，而在临床试验中，其在人外周血单核细胞 (PBMC) 中的半衰期则长达 194-227 小时。三磷酸盐形式的生成迅速，清除缓慢。其 logP 值为 -0.6（游离碱），表明其亲脂性较差，这是三磷酸盐的典型特征。储存方面，三乙胺盐可以粉末形式储存在 -20℃ 下，保存长达 3 年；也可以溶液形式储存在 -80℃ 下。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
[1] 在MT-4细胞中，CC50：>100 μM（选择性指数>140,000）。
在HepG2细胞中，浓度为100 μM时未观察到线粒体DNA耗竭（而20 μM扎西他滨导致47%的线粒体DNA耗竭）。[1] [2]在BLT小鼠中，剂量为10 mg/kg/天时，肠道/淋巴组织未观察到组织病理学异常。[2] 在ICR小鼠中，单次口服或静脉注射剂量高达100 mg/kg的伊斯拉曲韦后，未显示急性毒性（0%死亡率，每组n=8）。 [1] 其三磷酸形式（4′Ed2FATP）对人线粒体DNA聚合酶γ的抑制作用（EC₅₀，10 µM）强于ddATP（0.2 µM），表明其线粒体毒性较低。[1] 在细胞实验中，针对MT-4细胞的CC₅₀（细胞毒性浓度）为7500 nM。[1] 在ICR小鼠中，单次口服或静脉注射剂量高达100 mg/kg的伊斯拉曲韦未显示急性毒性（0%死亡率，每组n=8）。[1] 其三磷酸形式（4′Ed2FATP）对人线粒体DNA聚合酶γ的抑制作用（EC₅₀，10 µM）高于ddATP（0.2 µM），表明其线粒体毒性较低。 [1] 在细胞实验中，对MT-4细胞的CC₅₀（细胞毒性浓度）为7500 nM。[1] EFdA-TP 的毒性特征源自其母体药物伊斯拉曲韦的研究。该化合物显示出良好的线粒体毒性特征。在选择性试验中，EFdA-TP 对人 DNA 聚合酶 α 和 β 的半数抑制浓度 (IC50) 值均大于 100 μM，对聚合酶 γ 的 IC50 值为 10 μM。相比之下，其毒性代谢物 ddA-TP 对 α、β 和 γ 的 IC50 值分别为 >100 μM、0.2 μM 和 0.2 μM。这表明，与其他核苷类逆转录酶抑制剂 (NRTI) 相比，EFdA-TP 对线粒体 DNA 合成的脱靶效应显著降低，从而提高了其安全性。 |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
EFdA-TP三乙胺盐是一种正在研究用于治疗和预防HIV感染的试验性药物。EFdA-TP三乙胺盐属于核苷类逆转录酶转座抑制剂（NRTTIs）类HIV药物。NRTTIs通过多种机制阻断一种名为逆转录酶的HIV酶。通过阻断逆转录酶，核苷类逆转录酶抑制剂（NRTTIs）可以阻止HIV复制并降低体内HIV病毒的数量。EFdA-TP三乙胺盐可能对某些已对其他抗HIV药物产生耐药性的HIV毒株有效。EFdA-TP三乙胺盐正在临床试验NCT04233216（多拉韦林/EFdA-TP三乙胺盐（DOR/ISL）用于治疗既往接受过广泛治疗的HIV-1感染者（MK-8591A-019））中进行研究。药物适应症：预防人类免疫缺陷病毒（HIV-1）感染。
基于一项工作假设，我们提出了使用4'-C-取代的-2'-脱氧核苷衍生物来解决现有化疗（高效抗逆转录病毒疗法）在治疗获得性免疫缺陷综合征（AIDS）方面存在的问题。后续研究成功验证了这一想法的有效性，并最终开发出了核苷类逆转录酶抑制剂2'-脱氧-4'-C-乙炔基-2-氟腺苷。该抑制剂对所有1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1），包括多重耐药HIV-1，均具有高效的抑制作用，且毒性较低。[1] 背景：处于临床前开发阶段的核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）4'-乙炔基-2-氟-2'-脱氧腺苷（EFdA）与已获批准的NRTI相比，展现出更高的安全性、更强的抗病毒活性和更低的耐药性。然而，EFdA 的全身抗病毒疗效尚未得到充分评估。本研究采用骨髓/肝脏/胸腺 (BLT) 人源化小鼠模型，探讨 EFdA 治疗对 HIV 复制以及外周血 (PB) 和组织中 CD4+ T 细胞耗竭的全身性影响。我们重点分析了女性生殖道 (FRT) 和胃肠道 (GI)，这两个部位是病毒传播、复制和 CD4+ T 细胞耗竭的主要部位，也是一些现有抗逆转录病毒药物疗效不佳的部位。结果：EFdA 治疗后，大多数受试小鼠外周血 (PB) 中的 HIV-RNA 水平在治疗后 3 周降至检测不到的水平。EFdA 治疗的 BLT 小鼠宫颈和阴道冲洗液中的 HIV-RNA 水平也降至检测不到的水平，表明 EFdA 能有效渗透到 FRT。我们的结果还显示，在所有分析的组织中，HIV 复制均受到显著抑制。值得注意的是，与未经治疗的HIV感染对照小鼠相比，EFdA治疗的BLT小鼠胃肠道和生殖道中的HIV-RNA水平降低了两个数量级以上。此外，与未经治疗的HIV感染对照小鼠相比，EFdA治疗的BLT小鼠淋巴结、肝脏、肺和脾脏中的HIV-RNA水平也显著降低。而且，EFdA治疗阻止了外周血、黏膜组织和淋巴组织中CD4+ T细胞的耗竭。结论：我们的结果表明，EFdA在控制病毒复制和保护CD4+ T细胞方面非常有效，尤其是在胃肠道和生殖道中。因此，EFdA是一种很有前景的抗逆转录病毒疗法候选药物。[2] [1] 伊拉曲韦可以掺入病毒DNA中而不导致链终止，但会导致延迟终止。它对HIV-1 M/O组、HIV-2和SIV有效。 [1] [2] 在肠道相关淋巴组织中可达到高浓度（超过 EC90 的 10 倍以上）。[2] 伊拉瑞韦 的设计基于一项旨在克服现有高效抗逆转录病毒疗法 (HAART) 局限性的工作假设，尤其是在应对耐药性 HIV 出现的情况下。该设计涉及在 2'-脱氧核苷骨架上进行 4'-C 取代，保留 3'-OH 基团以模拟天然底物，但阻止其参与链延长反应，从而起到链终止剂的作用。[1] 4'-C-乙炔基取代基有助于提高代谢稳定性（抵抗酸和酶降解），并由于其亲脂性的增加而促进细胞穿透。[1] 腺嘌呤碱基 2 位上的氟化赋予其抵抗腺苷脱氨酶的稳定性。 [1] 由于其作用机制和对耐药毒株的活性，伊斯拉曲韦也被认为是治疗乙型肝炎病毒（HBV）感染的潜在候选药物，因为HBV在复制过程中也利用逆转录酶，并且已知与HIV核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）存在交叉耐药性。[1] 伊斯拉曲韦的设计基于一个工作假设，旨在克服现有高效抗逆转录病毒疗法（HAART）的局限性，尤其是在应对耐药HIV出现的情况下。该设计涉及在2'-脱氧核苷骨架上进行4'-C取代，保留3'-OH基团以模拟天然底物，但阻止其参与链延伸反应，从而起到链终止剂的作用。 [1] 4'-C-乙炔基取代基有助于提高代谢稳定性（抵抗酸和酶降解），并因其增强的亲脂性而有利于细胞穿透。[1] 腺嘌呤碱基2位的氟化赋予其抵抗腺苷脱氨酶的稳定性。[1] 由于其作用机制和对耐药毒株的活性，伊曲韦也被认为是治疗乙型肝炎病毒（HBV）感染的潜在候选药物，因为HBV在复制过程中也利用逆转录酶，并且已知与HIV核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）存在交叉耐药性。[1] 其他信息：EFdA-TP三乙胺盐（EFdA-TP三乙胺盐）是一种仅供实验室使用的研究级化合物。它是一种白色至类白色固体粉末，可溶于水和有机溶剂。该化合物是一种强效的核苷类逆转录酶（RT）抑制剂，可作为有效的即时或延迟链终止剂（ICT或DCT）抑制RT催化的DNA合成。默克公司正在开发一种用于HIV暴露前预防（PrEP）的皮下药物洗脱植入剂。 |
| 分子式 |
C18H30FN6O12P3
|
|---|---|
| 分子量 |
634.38
|
| CAS号 |
865363-93-5
|
| 相关CAS号 |
EFdA-TP;950913-56-1; 2408129-39-3 (hydrate)
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
-0.6
|
| tPSA |
119
|
| InChi Key |
IKKXOSBHLYMWAE-QRPMWFLTSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C12H12FN5O3/c1-2-12(4-19)6(20)3-7(21-12)18-5-15-8-9(14)16-11(13)17-10(8)18/h1,5-7,19-20H,3-4H2,(H2,14,16,17)/t6-,7+,12+/m0/s1
|
| 化学名 |
(2R,3S,5R)-5-(6-amino-2-fluoro-9H-purin-9-yl)-2-ethynyl-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-ol
|
| 别名 |
EFdA-TP triethylamine salt; Islatravir triphosphate triethylamine salt; 2'-Deoxy-4'-Ethynyl-2-Fluoroadenosine 5'-(Tetrahydrogen Triphosphate) triethylamine salt
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~341.01 mM )
H2O : ~3.57 mg/mL (~12.17 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: ≥ 1.1 mg/mL (3.75 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: ≥ 1.1 mg/mL (3.75 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 6 中的溶解度: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: ≥ 2.08 mg/mL (7.09 mM) 配方 7 中的溶解度: 1.35 mg/mL (4.60 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5763 mL | 7.8817 mL | 15.7634 mL | |
| 5 mM | 0.3153 mL | 1.5763 mL | 3.1527 mL | |
| 10 mM | 0.1576 mL | 0.7882 mL | 1.5763 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
