FITC-LC-TAT (47-57) acetate

目录号: V119605
FITC-LC-TAT (47-57) 乙酸酯是一种 FITC 标记的 TAT 肽。
FITC-LC-TAT (47-57) acetate 产品类别: HIV
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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5mg
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产品描述
FITC-LC-TAT (47-57) 乙酸酯是一种 FITC 标记的 TAT 肽。TAT 是一种细胞穿透肽 (CPP),可以提高异源蛋白的产量和溶解度。
FITC-LC-TAT (47-57) 乙酸酯是一种荧光标记的细胞穿透肽 (CPP)。它由源自 HIV-1 转录激活因子 (TAT) 的 TAT (48-60) 肽 (YGRKKRRQRRR) 与间隔臂 (LC,氨基己酸) 连接,并用异硫氰酸荧光素 (FITC) 标记。该肽序列为 FITC-LC-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-NH2。该探针用于研究 CPP 及其偶联物的细胞摄取、细胞内转运和递送效率。它是药物递送研究中的有力工具,可通过荧光显微镜或流式细胞术直接观察细胞穿透情况。
生物活性&实验参考方法
靶点
FITC-LC-TAT (47-57) acetate targets the cell membrane and the intracellular environment. The TAT peptide is a classical CPP that is able to cross biological membranes, including the plasma membrane, via a non-receptor-mediated, endocytic process (primarily macropinocytosis). Its primary target is the entire cell interior. The FITC fluorophore is not a drug target but a tracer, enabling researchers to visualize and quantify the peptide's internalization. By labeling the TAT peptide with FITC, researchers can "target" specific cells for delivery of therapeutic molecules, but the probe itself serves only as a delivery and tracking tool. It has no specific protein receptor.
体外研究 (In Vitro)
体外实验表明,FITC-LC-TAT (47-57) 乙酸酯的“活性”在于其能够以浓度和时间依赖的方式高效进入细胞。它是一种检测工具,而非治疗药物。当添加到细胞培养基中(1-10 uM)时,它可在 15-60 分钟内迅速被多种细胞系(HeLa、CHO、Jurkat)内吞。使用 FITC 滤光片(激发/发射波长 490/525 nm)可通过绿色荧光观察细胞内吞作用。将细胞冷却至 4degC 或用内吞抑制剂(例如,dynasore、氯丙嗪)处理可阻断该活性,证实了其摄取途径依赖于能量。在将 TAT 与治疗性载体偶联之前,该方法用于验证 TAT 在特定模型系统中的细胞穿透能力。
体内研究 (In Vivo)
在体内,FITC-LC-TAT (47-57) 醋酸盐可用于小型动物的光学成像和生物分布研究。例如,将肽以 1-5 mg/kg 的剂量静脉注射到小鼠体内后,由于其高亲水性和快速的肾脏清除率,该肽会迅速分布到主要器官,尤其是肾脏和肝脏。注射后 30 分钟内,即可使用体内成像系统 (IVIS) 检测到 FITC 荧光。这可用于评估 TAT 肽载体的药代动力学和生物分布,从而为偶联药物的行为提供基线数据。然而,快速清除是基于细胞穿透肽 (CPP) 的体内递送所面临的一个常见挑战。
酶活实验
体外酶/受体结合(非细胞)的一般方案:不适用。FITC-LC-TAT (47-57) 乙酸酯在无细胞体系中不与酶或受体特异性结合。结合实验方案非常简单:将肽溶解于 PBS 或水中。其化学性质稳定且易溶于水。可通过高效液相色谱法 (HPLC)(C18 色谱柱,0.1% TFA 水/乙腈梯度)分析以确认纯度,通常纯度 >95%。
细胞实验
体外细胞实验通用方案:将 HeLa 细胞接种于含 10% FBS 的 DMEM 培养基中,并在 96 孔板中培养至 80% 汇合度。将 FITC-LC-TAT (47-57) 醋酸盐用无血清培养基稀释至终浓度分别为 1、5 和 10 uM。将稀释后的肽加入细胞中。于 37℃ 孵育 30-60 分钟。吸出培养基,用 PBS 洗涤细胞 3 次以去除细胞外肽。在荧光显微镜下观察(FITC 滤光片),或用胰蛋白酶消化细胞,并通过流式细胞仪(FL-1 通道,515-545 nm)进行分析。对于定量摄取实验,用 10 uM 肽处理细胞,洗涤,用 0.1% Triton X-100 裂解细胞,并使用酶标仪(激发/发射波长 490/520 nm)测量荧光强度。将肽在-80℃的黑暗环境中储存。
动物实验
体内动物实验通用方案:成像研究使用6-8周龄雌性BALB/c裸鼠(20-25 g)。配制浓度为2 mg/mL的FITC-LC-TAT(47-57)醋酸盐溶液(溶于无菌PBS缓冲液,pH 7.4)。经尾静脉注射100 μL(200 μg,约8 mg/kg)。分别于注射后30分钟、1小时、2小时和4小时处死小鼠。收集主要器官(肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺脏、脑)。使用IVIS光谱仪或类似系统(激发/发射波长480/520 nm)对器官进行成像。或者,将器官匀浆,用PBS缓冲液提取荧光,并使用荧光酶标仪定量,以确定每克组织中注射剂量的百分比(%ID/g)。肾脏通常显示最高的累积量。
药代性质 (ADME/PK)
一般药代动力学特性:FITC-LC-TAT (47-57) 乙酸酯的分子量为 2061.38 g/mol(游离碱)。它是一种高溶解性肽(在水中的溶解度 >100 mg/mL)。体内,由于肾脏滤过和蛋白水解,其清除迅速(t1/2α < 5 分钟)。它不经口服生物利用度。它不被 CYP450 酶代谢。小鼠静脉注射后,该肽在血浆中的检测时间不足 30 分钟。其较大的分子量使其难以穿过血脑屏障。最好以粉末形式在 -20℃ 下保存,最长可达 3 年。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
总体毒性概况:FITC-LC-TAT (47-57) 醋酸酯在体外染色所用的低浓度 (1-10 μM) 下通常被认为无毒。在体内,标准成像剂量 (~8 mg/kg) 下,小鼠耐受性良好,未见急性毒性、体重减轻或不良行为改变的报道。然而,作为一种阳离子肽,极高剂量可能会导致一些非特异性膜破坏。FITC 荧光染料是标准试剂,具有公认的低毒性,适用于研究用途。只需采取标准的实验室安全措施(手套、实验服)即可。本品仅供研究使用。
参考文献

[1]. Improving Payload Capacity and Anti-Tumor Efficacy of Mesenchymal Stem Cells Using TAT Peptide Functionalized Polymeric Nanoparticles. Cancers (Basel). 2019 Apr 6;11(4):491.

[2]. Interaction of the protein transduction domain of HIV-1 TAT with heparan sulfate: binding mechanism and thermodynamic parameters. Biophys J. 2004 Jan;86(1 Pt 1):254-63.

其他信息
TAT肽序列(47-57)为YGRKKRRQRRR。它是研究和应用最广泛的细胞穿膜肽(CPP)之一。引入“LC”(氨基己酸)间隔基可在FITC和肽之间形成柔性连接,从而降低潜在的空间位阻并提高标记效率。乙酸盐形式可改善溶解性和操作性。本产品仅供研究用途,不得用于人体诊断或治疗。它是研究内吞作用、药物递送和细胞内靶向的有力工具。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C91H141N35O19S.XC2H4O2
分子量
2061.38 (free base)
相关CAS号
FITC-LC-TAT (47-57)
序列
FITC-LC-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-NH2FITC-LC-YGRKKRRQRRR-NH2
外观&性状
Yellow to orange solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: 请将本产品存放在密封保护的环境中,避免受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : ≥ 100 mg/mL
DMSO : ~3.57 mg/mL (with sonication)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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