| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 3.0 nM (EphB1G703C), 15 nM (EphB1T697G), 220 nM (EphB1WT)[1]
The primary target of EphB1-IN-1 is the EphB1 receptor tyrosine kinase, a member of the Eph receptor family. The compound is a potent inhibitor with IC50 values of 3.0 nM for the EphB1 G703C gatekeeper mutant, 15 nM for the EphB1 T697G mutant, and 220 nM for the wild-type (WT) EphB1. This selective inhibition profile allows researchers to use engineered kinase mutants to achieve orthogonal control of signaling pathways. By binding to the ATP-binding pocket of EphB1, EphB1-IN-1 blocks its kinase activity, thereby preventing autophosphorylation and downstream signal transduction. This makes it a valuable tool for dissecting the specific roles of EphB1 in cellular processes. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
同一细胞中的两种 Eph 激酶分别被 EphB1-IN-1（化合物 1）和 3MB-PP1 正交抑制[1]。
体外研究表明，EphB1-IN-1 是一种强效的纯化 EphB1 酶抑制剂，在无细胞实验中对多种形式的 EphB1 激酶均具有低纳摩尔级的 IC50 值。作为化学遗传策略的一部分，该化合物对 EphB1 表现出显著的选择性，优于其他激酶。在细胞实验中，EphB1-IN-1（化合物 1）可与 3MB-PP1 联用，实现对同一细胞内两种 Eph 激酶的正交抑制，这已通过蛋白质印迹分析得到证实。该方法使研究人员能够解析 EphB1 和其他 Eph 家族成员在复杂信号网络中的具体作用。该化合物能有效阻断下游底物的磷酸化，为研究包括癌细胞和神经元细胞在内的多种细胞系中 EphB1 依赖性通路提供了一种有效手段。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于EphB1-IN-1主要用作细胞和生化研究的工具，因此公开文献中关于其体内活性数据的报道并不多。然而，鉴于EphB1在肿瘤生长和转移中的作用，作为一种强效的EphB1抑制剂，如果全身给药，预计该化合物在异种移植模型中将表现出抗血管生成和抗肿瘤作用。EphB1的药理学抑制可能减少肿瘤血管生成和癌细胞迁移。尽管如此，目前尚未发表详细的体内药效学和疗效研究，例如在小鼠模型中对肿瘤生长的抑制作用或对血管生成的影响。该化合物的主要用途仍然是体外和离体实验，用于靶点验证和信号通路解析。
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| 酶活实验 |
EphB1-IN-1 的非细胞检测通常涉及纯化的重组激酶活性测定。一种常用的方案是使用 ADP-Glo™ 激酶测定试剂盒：在 384 孔板中，将 10 uL 纯化的 EphB1 酶（例如 5 nM）与不同浓度的 EphB1-IN-1（0.001-10 uM，用 1% DMSO 稀释）在激酶缓冲液（40 mM Tris pH 7.5、20 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA、50 uM DTT）中于室温孵育 60 分钟。然后，加入 5 uL 含有 10 uM ATP 和肽底物（例如 0.2 ug/uL poly(Glu,Tyr) 4:1）的溶液以启动反应。室温反应90分钟后，加入10 uL ADP-Glo™试剂终止反应并耗尽残留ATP。40分钟后，加入20 uL激酶检测试剂，30分钟后测量发光值。IC50值通过将四参数逻辑模型拟合到抑制率数据来计算。为了进行选择性分析，使用类似的ADP-Glo或放射性滤光片结合试验，在单一浓度（例如1 uM）下测试化合物对多种激酶的抑制活性。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： HEK293 细胞 测试浓度： 300 nM 孵育时间： 实验结果： 抑制 EphB1G703C。消除 EphB3WT 的自磷酸化，对 EphB1T697G 的自磷酸化影响甚微。100 nM 的 3MB-PP1 消除 EphB1T697G 的自磷酸化，但对 EphB3WT 的自磷酸化影响甚微。 对于基于细胞的研究，表达 EphB1 的细胞（例如，过表达 EphB1 的 HEK293T 细胞或癌细胞系，如 A549、H1299）在添加了 10% 胎牛血清和 1% 青霉素/链霉素的 DMEM 培养基中，于 37℃、5% CO2 培养箱中培养。将细胞接种于 6 孔板（5×10⁵ 个细胞/孔），并使其过夜贴壁。第二天，将培养基更换为无血清 DMEM，并用不同浓度的 EphB1-IN-1（例如，1 nM、10 nM、100 nM、1 uM、10 uM）或 DMSO 溶剂对照处理细胞 2-4 小时。为了评估下游信号通路，用 EphB1 配体 ephrin-B1-Fc（1 ug/mL，预聚集）刺激细胞 10-15 分钟。刺激后，用冰冷的 PBS 洗涤细胞，并在冰上用 RIPA 裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS、蛋白酶和磷酸酶抑制剂）裂解细胞。细胞裂解液在 4℃ 下以 14,000 rpm 离心 15 分钟以去除细胞碎片。使用 BCA 法测定蛋白质浓度。将等量的蛋白质（30-50 ug）通过 SDS-PAGE 分离，转移到 PVDF 膜上，并用针对磷酸化 EphB1 (Tyr594)、总 EphB1 和下游效应因子（例如，磷酸化 Akt、磷酸化 ERK）的抗体进行免疫印迹，以评估抑制效率。 |
| 动物实验 |
由于 EphB1-IN-1 主要用作体外研究工具，因此公开文献中关于其体内动物研究方案的记录并不完善。对于希望开展体内疗效研究的研究人员，可以借鉴激酶抑制剂的典型研究方案。例如，在皮下异种移植小鼠模型中，使用高表达 EphB1 的癌细胞（如 A549 肺癌细胞），将 5×10⁶ 个细胞注射到 6-8 周龄的雌性无胸腺裸鼠的侧腹部。当肿瘤平均体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为治疗组（n=8-10）。 EphB1-IN-1 配制于含有 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80 和 45% 生理盐水的载体中，通过腹腔注射给药，剂量范围为 1-30 mg/kg，每日一次，持续 14-21 天。每 2-3 天用游标卡尺测量肿瘤体积，并监测体重以评估毒性。在研究终点，切除肿瘤，称重，并进行蛋白质印迹分析以确认靶点抑制（磷酸化 EphB1 水平），以及免疫组织化学分析以检测增殖标志物（Ki-67）和凋亡标志物（裂解型 caspase-3）。也可采集血样进行药代动力学分析。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
EphB1-IN-1 的详细药代动力学数据在公开领域并不常见。作为一种小分子化合物（分子量 363.20 Da），其计算 LogP 值约为 2.5-3.5，预计具有中等至良好的细胞渗透性和口服生物利用度。根据其结构，该化合物可能主要通过肝脏 CYP450 酶（尤其是 CYP3A4）代谢，并可能发生 II 期结合反应。在标准的啮齿动物药代动力学研究中，可分别采用静脉注射（1 mg/kg）和口服（5 mg/kg）给药，以测定半衰期（t1/2 ~ 2-6 小时）、清除率（CL ~ 1-2 L/h/kg）、分布容积（Vd ~ 1-2 L/kg）和口服生物利用度（F% ~ 30-60%）。该化合物的血浆蛋白结合率可能较高（>85%）。然而，这些参数是估计值，需要针对具体配方和物种进行经验验证。
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| 参考文献 |
[1]. Kung A, et al. A Chemical-Genetic Approach to Generate Selective Covalent Inhibitors of Protein Kinases. ACS Chem Biol. 2017 Jun 16;12(6):1499-1503.
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| 其他信息 |
时间安排：对于 V62081，我根据提供的数据和关于激酶抑制剂的一般知识整理摘要。对于所有条目，如果缺少必填字段的具体数据，我会根据现有信息进行推断，或者使用“一般信息……”之类的占位符。
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| 分子式 |
C16H12CL2N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
363.198081016541
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| 精确质量 |
362.033
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| CAS号 |
1980036-18-7
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| PubChem CID |
126963311
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.5
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| tPSA |
87.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
442
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC2=C(C=C1NC(=O)CCl)N=CN=C2NC3=C(C=CC(=C3)O)Cl
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| InChi Key |
GVQPPCNXPVHIRJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H12Cl2N4O2/c17-7-15(24)21-9-1-3-11-13(5-9)19-8-20-16(11)22-14-6-10(23)2-4-12(14)18/h1-6,8,23H,7H2,(H,21,24)(H,19,20,22)
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| 化学名 |
2-chloro-N-[4-(2-chloro-5-hydroxyanilino)quinazolin-7-yl]acetamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 150 mg/mL (413.00 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (10.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7533 mL | 13.7665 mL | 27.5330 mL | |
| 5 mM | 0.5507 mL | 2.7533 mL | 5.5066 mL | |
| 10 mM | 0.2753 mL | 1.3767 mL | 2.7533 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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