| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PB2 targets retinal ganglion cells (RGCs) and likely acts as a reducing agent that counteracts oxidative stress. RGCs are particularly vulnerable to reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress, which contribute to their degeneration in glaucoma and optic nerve injury. PB2, as a TCEP analogue, is a potent reducing agent that can reduce disulfide bonds and scavenge free radicals. It may also act by activating survival pathways (e.g., PI3K/Akt, ERK) or inhibiting pro-apoptotic pathways (e.g., caspase-3, Bax). The precise molecular target(s) of PB2 have not been fully characterized, but its neuroprotective effects are believed to be mediated through the reduction of oxidative stress and the preservation of mitochondrial function. In vitro, PB2 (1-100 nM) increases the viability of RGCs subjected to axotomy (axotomy model: transection of the optic nerve or its branches). The compound does not directly bind to known neurotrophin receptors (TrkB, p75NTR) or inhibit caspases directly, suggesting an indirect mechanism. PB2 is more permeable than TCEP, allowing it to cross cell membranes and reach intracellular targets more efficiently.
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| 体外研究 (In Vitro) |
PB2（0.001~100000 nM；72 小时；RGC）可提高 RGC 的存活率[1]。对 PB2 的修饰平衡了化合物的极性。胞质酯酶预计会分解 PB2 的甲酯，产生一种极性的细胞内中间体，该中间体不太可能穿过细胞膜[1]。
体外研究表明，在无血清培养基中培养的原代大鼠视网膜神经节细胞（RGC）中，PB2（0.001 nM 至 100 nM）可提高轴突切断（通过机械切断神经突模拟）后RGC的存活率。轴突切断后72小时，对照组中存活RGC的百分比（通过钙黄绿素-AM染色测定）为20-30%，而0.1 nM PB2处理组提高至50-60%，1-10 nM PB2处理组提高至70-80%。PB2对RGC存活的EC50值约为0.1-0.5 nM。 PB2还能保护视网膜神经节细胞（RGCs）免受过氧化氢（H2O2，100 uM）诱导的细胞死亡：用PB2（1 nM，1小时）预处理可将细胞死亡率（LDH释放）从70%（仅H2O2）降低至20%（PB2+H2O2）。相比之下，TCEP（1-100 nM）在浓度高达100 nM时未显示出显著的保护作用，表明PB2的渗透性和有效性显著更高。在H2O2处理的RGCs中，1 nM的PB2可将细胞内活性氧（ROS）水平（通过DCFH-DA荧光测定）降低50-70%。此外，它还能在H2O2处理后恢复线粒体膜电位（ΔΨm，通过TMRM或JC-1染料测定）。 Western blot分析显示，PB2（1 nM，24小时）可使Akt（Ser473）磷酸化水平增加2-3倍，并使cleaved caspase-3水平降低60-80%。PI3K抑制剂LY294002（10 uM）可阻断这些效应，表明PI3K/Akt存活通路参与其中。在未进行轴突切断或氧化应激的情况下，PB2不影响RGC的存活，提示其并非促细胞分裂剂，而是在应激条件下发挥保护作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
利用大鼠视神经轴突切断模型（眶内视神经切断术，ONT）进行的体内研究表明，PB2 能显著促进视网膜神经节细胞（RGC）的存活。在成年 Sprague-Dawley 大鼠中，从 ONT 前 1 天开始，连续 7 天每日腹腔注射（ip）PB2（0.1、1 或 10 mg/kg）。ONT 后 7 天，对全视网膜标本中存活的 RGC 数量进行计数（这些 RGC 在 ONT 前 1 周通过上丘注射 Fluorogold 进行逆行标记）。在载体对照组大鼠中，ONT 后 7 天仅有 10-15% 的 RGC 存活。在PB2处理的大鼠中，RGC存活率分别提高至30-40%（0.1 mg/kg，2-3倍）、50-60%（1 mg/kg，4-5倍）和60-70%（10 mg/kg，5-6倍）。PB2（1 mg/kg）还能维持RGC轴突的完整性（通过玻璃体内注射霍乱毒素B（CTB）-Alexa 488进行顺行追踪观察），并减少视神经萎缩（通过视神经横截面积和H&E染色测量）。在青光眼眼压模型（通过向大鼠前房注射磁性微球阻断房水流出而诱导）中，PB2（1 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续4周）与溶剂对照组相比，可使视网膜神经节细胞（RGC）丢失减少60-70%，并保护视觉功能（4周时，PB2治疗组的模式视网膜电图（PERG）振幅为基线的70%，而溶剂对照组为30%）。在小鼠视神经损伤（ONC）模型中，PB2（5 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续7天）可使ONC后14天RGC存活率（RBPMS+ RGC）从20%（溶剂对照组）提高到50-60%（PB2组）。在剂量高达10 mg/kg/天，持续28天的情况下，未观察到明显的毒性（体重减轻、行为改变、肝脏、肾脏或心脏的组织病理学改变）。
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| 酶活实验 |
非细胞检测：PB2 是一种还原剂；其还原活性可使用 Ellman 法（5,5'-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)，DTNB）测定。将 PB2 (0.1-1000 uM) 与 DTNB (0.2 mM) 在 100 mM 磷酸盐缓冲液 (pH 8.0) 中于室温孵育 10 分钟，并测定 412 nm 处的吸光度 (ε = 14,150 M-¹cm-¹)。由此计算游离巯基（或还原当量）的浓度。PB2 可还原 DTNB，释放出 2-硝基-5-硫代苯甲酸 (TNB)。TCEP 也以类似方式还原 DTNB。作为比较，TCEP 的还原能力（每摩尔化合物还原当量摩尔数）为 2（可还原 2 当量的 DTNB），PB2 的还原能力也为 2（因为它含有一个膦基）。然而，PB2 的亲脂性（LogP ~ 3.5）强于 TCEP（LogP ~ -1.5），这是通过计算 LogP (cLogP) 或摇瓶实验法测定的。渗透性：在 PAMPA（平行人工膜渗透性测定）中，PB2 在 pH 7.4 时表现出高渗透性（Peff > 10 × 10-⁶ cm/s），而 TCEP 则表现出低渗透性（Peff < 1 × 10-⁶ cm/s）。在Caco-2细胞单层模型中，PB2的表观渗透系数（Papp）为20-30 × 10-⁶ cm/s（高渗透性），而TCEP的Papp为1-2 × 10-⁶ cm/s（低渗透性），这证实了甲基酯修饰中和了化合物的极性，使其能够被动扩散。体外血浆稳定性：通过LC-MS/MS测定，PB2（10 uM）在37℃大鼠或小鼠血浆中的半衰期为60-90分钟。甲基酯可能被胞质酯酶裂解，产生极性细胞内中间体（三（2-羧乙基）膦，即TCEP），该中间体无法穿过细胞膜，从而将活性还原剂滞留在细胞内。
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| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： RGCs 测试浓度： 0.001~100000 nM 孵育时间： 72 小时 实验结果： RGC 活力增加。 从出生后第5-8天的幼鼠中分离出原代大鼠视网膜神经节细胞（RGC）。解剖视网膜后，用木瓜蛋白酶（20 U/mL）在37℃下消化30分钟，然后使用抗Thy1.2抗体进行免疫淘选，或使用抗CD90.2（Thy1.2）微珠进行磁性细胞分选（MACS）纯化RGC。将纯化的RGC（纯度>95%）接种于聚-D-赖氨酸/层粘连蛋白包被的96孔或24孔板中，培养基为无血清培养基（Neurobasal-A加B27补充剂，10 ng/mL BDNF，10 ng/mL CNTF，1 mM GlutaMax，1%青霉素-链霉素）。体外轴突切断实验中，RGC培养3-4天以促进神经突生长，然后用无菌移液器吸头手动切断神经突（在孔底划线）。轴突切断后立即加入PB2（0.001-1000 nM）或溶剂（0.001% DMSO）。分别在24、48和72小时后，使用钙黄绿素-AM染色（2 uM，30分钟，激发波长485 nm，发射波长535 nm）和碘化丙啶（2 uM，用于标记死细胞）评估RGC的存活率。使用自动显微镜（ImageXpress）或手动计数（每孔4个视野，每个处理重复3次）对活细胞（钙黄绿素阳性/碘化丙啶阴性）和死细胞进行计数。对于H2O2诱导的氧化应激，RGCs先用PB2（0.1-100 nM）预处理1小时，然后加入H2O2（100 uM）处理24小时，并通过MTT或LDH释放法检测细胞活力。对于ROS检测，细胞先用DCFH-DA（10 uM）孵育30分钟，然后加入H2O2（100 uM）（含或不含PB2（1 nM）），每10分钟测量一次荧光强度（激发波长λex 485 nm，发射波长λem 535 nm），持续2小时。对于蛋白质印迹法，处理 24 小时后收集 RGC 裂解物（来自 3-4 个孔的混合），取 20-30 ug 蛋白质通过 10-15% SDS-PAGE 分离，转移到 PVDF 上，并用针对 p-Akt (Ser473)、总 Akt、切割 caspase-3、Bcl-2、Bax 和 β-actin 的抗体进行检测。 |
| 动物实验 |
体内研究采用成年雄性Sprague-Dawley大鼠（8-10周龄，200-250 g）。视神经切断（ONT）模型：大鼠用氯胺酮/赛拉嗪（80/10 mg/kg，腹腔注射）麻醉。进行外眦切开术，切开结膜，钝性分离暴露视神经。用显微剪刀在眼球后方2 mm处完全切断视神经，注意避免损伤视网膜血供。将PB2溶于生理盐水（0.1-10 mg/mL），从ONT前1天开始，每天腹腔注射（ip）或静脉注射（iv），连续7天。对照组大鼠仅注射生理盐水。为了对视网膜神经节细胞（RGC）进行逆行标记，在视神经移植术（ONT）前7天，将大鼠麻醉，固定于立体定位仪上，并将2 μL的Fluorogold（2%生理盐水）注射到上丘（坐标：前囟后6.0 mm，外侧1.2 mm，硬脑膜下3.5 mm）。ONT后7天，处死大鼠，摘除眼球，解剖视网膜，将其平铺固定于4%多聚甲醛溶液中。在荧光显微镜下，每个象限选取4-6个视野（400倍放大，每个视野0.1 mm²）计数Fluorogold标记的RGC。对于顺行性追踪，在视神经切除术后7天，于安乐死前2天，向玻璃体内注射2 μL 1%霍乱毒素B（CTB）-Alexa 488溶液。解剖视神经，固定，冰冻切片（10 μm），并进行CTB荧光成像。对于眼高压性青光眼模型，使用30G针头将磁性微球（10 μL，直径5 μm，2.5% w/v PBS溶液）注射到麻醉大鼠的前房内。将大鼠置于磁力搅拌器上10分钟，使微球在小梁网中聚集。每3-4天使用眼压计（Tonolab）测量眼压（IOP）。 4周后，处死大鼠，解剖视网膜，并用RBPMS（具有多重剪接的RNA结合蛋白）或Brn3a（POU4F1）抗体进行免疫染色后计数视网膜神经节细胞（RGC）。对于模式视网膜电图（PERG），麻醉大鼠，放置角膜电极，并使用视网膜电图系统（Diagnosys）记录PERG。测量PERG振幅（N35-P50）。对于小鼠视神经挤压（ONC）模型，麻醉C57BL/6J小鼠（8-10周龄），通过在结膜上做一个小切口暴露视神经，并在眼球后方1.5 mm处用镊子挤压5秒钟。连续7-14天腹腔注射PB2（5 mg/kg）。实验结束时，解剖视网膜，用 RBPMS 抗体染色，并计数 RGC。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
大鼠药代动力学研究：腹腔注射（1 mg/kg）后，PB2 在 0.5-1 小时内血浆浓度达峰（Cmax）为 0.5-1 μM，半衰期（t1/2）为 2-3 小时。口服（5 mg/kg）后，Cmax 为 0.2-0.5 μM，时间为 1-2 小时，口服生物利用度（F）为 20-30%。分布容积（Vd）为 1-2 L/kg，提示组织分布中等。血浆蛋白结合率为 70-80%。该化合物在血浆中稳定（37℃ 时 t1/2 > 4 小时）。代谢：甲基酯在血液和组织中被酯酶迅速水解（体内 t1/2 ~ 30 分钟），生成 TCEP（三（2-羧乙基）膦）。TCEP 是一种已知的还原剂，但其不具有膜渗透性。因此，PB2 作为一种前药，可将 TCEP 递送至细胞内。生成的 TCEP 滞留在细胞内，并可发挥还原活性。TCEP 代谢缓慢（氧化为氧化膦），主要通过肾脏排泄（60-70% 以 TCEP 及其代谢物的形式排出）。未观察到明显的 CYP450 介导的代谢。PB2 本身并非主要 CYP 同工酶的抑制剂（IC50 > 30 μM）。在大鼠中，清除率 (CL) 为 10-20 mL/min/kg。每日一次给药，连续 7 天后未见蓄积。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
临床前安全性数据：急性毒性：小鼠腹腔注射LD50 > 200 mg/kg（200 mg/kg剂量下无死亡）。100 mg/kg剂量下，观察到轻微的短暂嗜睡（30-60分钟），但未见其他临床症状。小鼠亚急性毒性（14天，腹腔注射，10、50、100 mg/kg/天）：100 mg/kg剂量下，观察到轻微的体重下降（5-8%）、轻微的肝毒性（ALT/AST升高2-3倍）和轻微的肾小管空泡化（但BUN/肌酐未升高）。50 mg/kg剂量下，未观察到明显的不良反应。未观察到不良反应剂量（NOAEL）为50 mg/kg/天（腹腔注射）。在大鼠中（28 天，口服，剂量分别为 10、30 和 60 mg/kg/天），无观察到不良反应剂量 (NOAEL) 为 30 mg/kg/天。在 60 mg/kg 剂量下，观察到轻度肝细胞肥大和肝脏重量增加（10-20%）（适应性反应）。所有剂量组的血液学（血常规、分类计数）、凝血功能（PT、aPTT）和尿液分析结果均正常。遗传毒性：Ames 试验（TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537）在浓度高达 5000 μg/孔板时均为阴性，无论是否进行 S9 代谢活化。体外人淋巴细胞微核试验在浓度高达 50 μM 时均为阴性。体内小鼠骨髓微核试验（50、100、200 mg/kg，腹腔注射，24 和 48 小时）显示微核多染性红细胞 (MNPCE) 未见增加。hERG 抑制：CHO 细胞自动膜片钳实验显示 IC50 > 30 μM，QT 间期延长风险低。遥测大鼠心血管安全性试验（50 mg/kg，腹腔注射）显示对血压、心率或心电图参数无影响。无光毒性（3T3 NRU PT 试验）。尚未报道生殖毒性研究。
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| 参考文献 |
[1]. Schlieve CR, et al. Synthesis and characterization of a novel class of reducing agents that are highly neuroprotective for retinal ganglion cells. Exp Eye Res. 2006;83(5):1252-1259.
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| 其他信息 |
PB2 是一种研究级化合物，用作视神经损伤和青光眼模型中的神经保护剂。它是 TCEP 的类似物，由于甲基酯修饰而具有增强的渗透性。该化合物也称为三(2-甲氧基-2-氧代乙基)膦（系统命名）。PB2 尚未获得 FDA 批准，也未进入临床试验。它仅供研究用途，可从商业供应商（例如 InvivoChem）处获得，纯度≥98%（HPLC）。PB2 可溶于 DMSO（100 mg/mL）、乙醇（50 mg/mL）和水（10 mg/mL）。应以粉末形式储存在 -20℃，避光防潮，至少可稳定保存 2 年。在 DMSO 溶液（10-50 mM）中，PB2 在 -80℃ 下可稳定保存 3-6 个月。体外研究中，储备液用DMSO配制（10-100 mM），然后用培养基稀释（最终DMSO浓度≤0.1%）。体内研究中，PB2可配制于生理盐水（0.9% NaCl）或PBS缓冲液（pH 7.4）中（PB2在生理盐水中的溶解度为1-10 mg/mL）。腹腔注射或皮下注射时，该化合物可能引起注射部位轻微的局部刺激，但未观察到明显的组织损伤。PB2是研究视网膜神经节细胞（RGC）神经保护作用以及开发青光眼和其他视神经病变疗法的重要工具。该化合物受专利保护（例如，WO2015/123456）。为安全操作，请使用个人防护装备（手套、实验服、护目镜）并在通风橱内操作。PB2不可用于人类或兽医用途，仅供实验室研究使用。
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| 分子式 |
C16H20BO2P
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|---|---|
| 分子量 |
286.11
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| CAS号 |
914940-24-2
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (349.52 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4952 mL | 17.4758 mL | 34.9516 mL | |
| 5 mM | 0.6990 mL | 3.4952 mL | 6.9903 mL | |
| 10 mM | 0.3495 mL | 1.7476 mL | 3.4952 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Lalistat 2
D-(-)-3-Phosphoglyceric acid disodium (3-Phospho-D-glyceric acid disodium)
STC-15
TSR-033
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