Metabolite of mycophenolic acid

麦考酚酸葡萄糖苷酸的 IC50 为 3.3 mg/L，对 IMP 脱氢酶 (IMPDH) 表现出适度的 II 型抑制作用[3]。

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MPA和MPAG/霉酚酸7-O-葡糖苷酸对hNaDC3[1]
的影响 在表达hNaDC3的卵母细胞中，添加0.1 与单独的ORI-2相比，mM MPA诱导了较小的内向电流（图1A）。当钠被N-甲基-D-葡糖胺替代时，MPA相关的内向电流被消除，表明MPA的钠依赖性易位（图1A）。图1还显示了0.1 mM MPA（B，空心圆）和0.1 hNaDC3卵母细胞中的mMMPAG（C，开环）是膜电位的函数，与1 同一卵母细胞中的mM琥珀酸盐（闭合圆圈）。在所有测试的电位下，琥珀酸依赖性内向电流的幅度均大于MPA或MPAG诱导的电流。当添加琥珀酸、MPA或MPAG时，在H 2 O注射的卵母细胞中没有观察到内向电流（数据未显示）。与1一起使用时 mM琥珀酸、MPA在0.1和1时分别使内向电流衰减了16±10%和28±8% mM。MPAG的作用更强，在0.1时，电流已经下降了32±19% mM（图2）。这些数据表明MPA和MPAG与人类NaDC3相互作用并由其运输。

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MPAG和AcMPAG对hOAT1-和hOAT3-介导的转运的影响[1]
在肾脏清除方面，MPA的葡萄糖醛酸代谢产物，特别是MPAG，通常从肝脏输送到肾脏[1]，具有特别重要的意义。与MPA相比，葡糖苷酸MPAG和AcMPAG在临床相关浓度下没有显著减弱表达hOAT1的卵母细胞对PAH的摄取（图5）。然而，hOAT3卵母细胞对ES的摄取受到100μg/ml的显著抑制 μM AcMPAG（80.9±6.5%，P<0.01），以及10 µM和100 μM MPAG（分别为53.7±5.2%，P<0.01和69.2±12.7%，P<0.05）（图5）。在这些实验中，抑制10 µM AcMPAG略低于10 µM MPAG（46.8±14.5%），由于其高度可变性，没有统计学意义。然而，剂量反应曲线表明，AcMPAG是一种更有效的hOAT3抑制剂（IC 50 2.88±0.42 µM）比MPAG（IC 50 15.2±18.5 µM）（图6）。 使用纯化的重组人II型肌苷酸单磷酸脱氢酶（IMPDH）评估霉酚酸葡糖苷酸（MPAG）抑制动力学。发现MPAG抑制浓度（IC50）比MPA高532至1022倍。正如预期的那样，根据紧密结合抑制剂动力学，霉酚酸（MPA）的IC50值随着IMPDH浓度的增加而增加，而黄嘌呤单磷酸（用作对照的竞争性IMPDH抑制剂）的IC50值更不依赖于酶浓度。尽管MPAG对IMPDH活性的抑制作用较弱，但与MPA相比，IC50值随着酶浓度的增加而增加。高效液相色谱分析检测到MPAG制剂中存在痕量MPA（0.2%摩尔），这可以解释这一观察结果。这些数据支持MPAG是MPA的药理学非活性代谢产物的说法。[2]

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结果：MPA和AcMPAG对rhIMPDH II有抑制作用（IC（50）分别为25.6微克/升和301.7微克/升；MPA对NAD和IMP的K（i）分别为50.8和57.7nmol/L；AcMPAG对NAD和IMP的敏感性分别为382.0和511.0 nmol/L。MPAG对酶没有显著影响。AcMPAG显然通过与MPA相同的非竞争性抑制机制起作用，IC（50）高12倍，K（i）高8-10倍。当与MPA共孵育时，AcMPAG在药理学浓度下的活性可以忽略不计。此外，在各自的最大浓度（C（max））下孵育6小时后，Jurkat细胞中MPA的浓度是AcMPAG的10倍。 结论：AcMPAG是一种比MPA弱的rhIMPDH II抑制剂，在体外淋巴细胞中的浓度较低，这表明它在体内没有药理活性，可能不需要在MPA治疗的患者中进行监测[3]。

在艾利希小鼠自发性腺癌模型中，霉酚酸葡萄糖醛酸（腹膜内注射；6 mg/小鼠；两天一次；6 天）治疗可抑制肿瘤生长[2]。

IMPDH活性测定[2]
如前所述测定IMPDH活性。简而言之，测定混合物（最终体积，1ml）含有400 nmol NAD、200 nmol IMP、0.1 mol pH 7.8的磷酸钾、0.5 mol氯化钾、3 mmol EDTA、适当浓度的IMPDH，以及一系列浓度的酶抑制剂MPA、MPAG或XMP。在贝克曼DU 640分光光度计上，在37°C下在340 nm处监测NADH形成20分钟。使用PS-Plot计算机程序统计计算中位抑制浓度（IC50）（最小二乘拟合）。

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RHimpdh ii酶测定[3]
rhIMPDH II测定在100 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8，37°C）中进行，该缓冲液含有100 mmol/L KCl、2 mmol/L EDTA和1 mmol/L二硫苏糖醇。我们将100μL rhIMPDH II（4%vol/vol）加入850μL酶缓冲液中，并将其与20μL IMP（0.01-10mmol/L）充分涡旋混合。使用培养箱块将反应介质预热至37°C。我们向培养混合物中加入10μL的潜在抑制剂（MPA、AcMPAG或MPAG），用乙腈稀释（最终百分比为1%vol/vol）。对照培养物中加入了相同量的乙腈。然后，我们通过加入20μL NAD+（0.25-20mmol/L）开始反应。立即将混合物充分混合，转移到1-mL紫外微孔中，并放置在调温分光光度计中。由于rhIMPDH II催化的反应是等摩尔的，NADH的形成与IMP和NAD+的用量直接相关。反应监测包括NAD+还原的分光光度测量（λ=340nm处的摩尔吸光系数6220）。每秒进行两次测量，持续5分钟。我们使用内部程序计算结果，该程序使用线性回归模型计算每个反应的初始速度。
为了在测定过程中测试AcMPAG和MPAG的稳定性，将这两种分子在37°C下以2种不同浓度（10μg/L和10 mg/L）在1 mL反应混合物中分别孵育30分钟。每5分钟取样100μL，与100μL乙腈/甲酸（97%/3%vol/vol）混合，并立即在冰上冷却以避免进一步降解。通过在37°C的水中以相同浓度孵育AcMPAG和MPAG，进行了三次阴性对照。然后使用经过验证的HPLC-MS/MS方法在每个样品中测定MPA、AcMPAG和MPAG。

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抑制实验[3]
如上所述，将rhIMPDH II与饱和浓度的两种共底物（IMP 200μmol/L；NAD+400μmol/L）和10种浓度递增的3种潜在抑制剂（MPA（1μg/L至1 mg/L）、AcMPAG（10μg/L至10 mg/L）和MPAG（200μg/L至20 mg/L））孵育三次。我们使用Hill模型和Winreg 3.1计算了每种潜在抑制剂的半最大抑制浓度（IC50）。 为了计算IMPDH II共底物NAD+和IMP的抑制常数（Ki），每种抑制剂在5个递增的浓度下孵育（AcMPAG为50μg/L至3.0 mg/L，MPA为1μg/L至1.0 mg/L）。我们首先在固定饱和浓度（200μmol/L）的IMP和增加浓度的NAD+（5-400μmol/L）下进行实验，然后在饱和NAD+浓度（400μmol/L）和6个增加浓度的IMP（2μmol/L至200μol/L）下进行。我们使用名为Inhib 1.1的内部软件通过非线性回归计算了每种共基质的每种抑制剂的Ki。 为了比较AcMPAG单独或在MPA存在下对rhIMPDH II的影响，将AcMPAG与rhIMPDHⅡ以MPA IC50值的0.05至10倍的浓度孵育，MPA或AcMPAG的IC50约为IC50（分别为25μg/L和300μg/L）。对于没有任何抑制剂的阳性对照计算抑制率。

aCmpag和mpa穿过细胞膜的能力[3]
我们在一个75平方厘米的培养瓶中，以2×106个细胞/mL的浓度，在RPMI 1640培养基中培养来自淋巴瘤人细胞系的Jurkat细胞，该培养基补充了10%FBS、2 mmol/L谷氨酰胺、1%氨基酸、1%维生素、1%丙酮酸盐、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素。在37°C和5%CO2下与MPA（终浓度20 mg/L）、AcMPAG和MPAG（此处作为AcMPAG的化学稳定对照；终浓度2 mg/L）一起孵育6小时。然后对培养基进行离心；取样并分析上清液以测量细胞外浓度，通过加入200μL 50/50（vol/vol）低渗水/甲酸溶液并在-20°C下孵育48小时，使用细胞沉淀来测量裂解后的细胞内浓度。我们使用已发表的LC-MS/MS技术定量MPA、MPAG和AcMPAG。该技术的定量限为10μg/L。在10mg/L范围内，线性关系得到验证（r=0.999）。在该线性范围内，批内CV<10%，批间CV<15%。回收率良好，线性范围内的平均相对误差<15%。
我们无法计算实际的细胞内浓度，因为无法精确测量细胞内培养基的体积，甚至细胞的体积或质量。因此，我们计算了孵育6小时后细胞中发现的药物量（μg）与时间0时孵育培养基中存在的化合物总量（例如加标量）的比率，以比较AcMPAG与MPAG和MPAG的细胞传代。

动物/疾病模型：植入艾氏腹水瘤细胞的瑞士白化品系小鼠[2]
剂量：6 mg/只小鼠
给药途径：腹腔注射（ip）；6 mg/只小鼠；每两天一次；6 天
实验结果：与未治疗的对照组相比，肿瘤抑制率为 76.8%。

代谢/代谢物
霉酚酸葡萄糖醛酸苷是已知的霉酚酸的人体代谢物。

[1]. Mycophenolic acid (MPA) and its glucuronide metabolites interact with transport systems responsible for excretion of organic anions in the basolateral membrane of the human kidney. Nephrol Dial Transplant. 2007 Sep;22(9):2497-503.

[2]. Synthesis of mycophenolic acid beta-D-glucuronide and its antitumor activity. J Antibiot (Tokyo). 1970 Aug;23(8):408-13.

[3]. Effect of mycophenolate acyl-glucuronide on human recombinant type 2 inosine monophosphate dehydrogenase. Clin Chem. 2009 May;55(5):986-93.

总之，霉酚酸酯与人OAT1和OAT3均具有高亲和力，并抑制底物转运。代谢产物MPAG和AcMPAG被发现与hOAT3相互作用，但不与hOAT1相互作用。其强效抑制作用（IC50值远低于霉酚酸酯治疗期间的血浆浓度范围）使得hOAT1和hOAT3成为干扰合用hOAT1/hOAT3药物底物（如抗病毒药、皮质类固醇或利尿剂）肾脏清除的敏感靶点。[1]

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背景：霉酚酸（MPA）是前药霉酚酸酯吗替麦考酚酯的活性成分，广泛用于肾脏、肝脏或心脏移植后的免疫抑制方案。MPA主要代谢为无活性的7-O-葡萄糖醛酸苷（MPAG）。少量MPA转化为具有药理活性的酰基葡糖醛酸苷（AcMPAG）。所有化合物最终均经肾脏排泄。由于其结构特性，MPA及其代谢物是人有机阴离子转运蛋白1（OAT1）和3（OAT3）以及钠-二羧酸盐共转运蛋白3（NaDC3）的候选底物。方法：利用体外合成的cRNA，在经胶原酶去除卵泡的非洲爪蟾卵母细胞中表达人（h）OAT1、hOAT3和hNaDC3。注射后第3天，测量了以下指标：（i）使用MPA和MPAG（仅在表达hNaDC3的卵母细胞中）测定的底物相关电流；（ii）在有或无MPA、MPAG或AcMPAG存在的情况下，测定[3H]对氨基马尿酸（hOAT1）或[3H]硫酸雌酮（hOAT3）的摄取。结果：在-60 mV的膜电位下，表达hNaDC3的卵母细胞中，MPA（0.1 mM）和MPAG（0.1 mM）均诱导了内向电流，其强度分别为琥珀酸（1 mM）诱导电流的17%和25%。反之，琥珀酸（1 mM）诱导的电流被MPA和MPAG部分抑制。人OAT1和HOAT3均被MPA强效抑制（IC50分别为1.24和0.52 μM）。MPA的两种葡萄糖醛酸苷代谢物也以浓度依赖的方式抑制人OAT3（MPAG的IC50为15.2 μM，AcMPAG的IC50为2.88 μM），而对HOAT1无抑制作用，这与HOAT3相比HOAT1更倾向于转运体积较大的底物相一致。结论：MPA及其代谢物与肾脏有机阴离子转运蛋白HOAT1和HOAT3强效相互作用，从而可能干扰抗病毒药物、皮质醇和其他有机阴离子的肾脏分泌。[1]这些数据支持MPAG几乎没有或完全没有直接药理活性的假设。由于 MPAG 对 IMPDH 的抑制作用明显较弱，因此观察到的 IC50 值随 IMPDH 浓度升高而增加的现象并非由 MPAG 本身引起，因为只有高亲和力抑制剂才能产生这种效应。另一种解释是，这种看似较弱的抑制作用是由少量高亲和力抑制剂 MPA 的存在造成的。HPLC 分析在 MPAG 中检测到少量 MPA 的结果支持了这一假设。此外，当计算 MPAG 制剂中痕量污染物 MPA 的浓度并将其代入 IC50 测定中时，IC50(MPAcontam) 值与 IC50 MPA 结果非常接近（表 1），进一步支持了上述假设。这些数据支持以下假设：与 MPA 相比，MPAG 对药理靶点的直接作用很小。然而，对于血浆中MPA代谢物浓度较高的患者（例如，肾移植后移植物功能延迟恢复的患者），需要探讨葡萄糖醛酸酶的作用对活性药物浓度的潜在贡献。[2]

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背景：霉酚酸（MPA）的免疫抑制作用主要归因于其对IMPDH II的抑制，从而导致淋巴细胞增殖减少。我们研究了MPA代谢物MPA-苯基-葡萄糖醛酸苷（MPAG）和MPA-酰基-葡萄糖醛酸苷（AcMPAG）对重组人IMPDH II（rhIMPDH II）的作用，以及它们在体外进入淋巴细胞的情况。方法：我们通过分光光度法测定NADH生成的初始速率来测量rhIMPDH II的活性，从而计算动力学参数K(m)、IC(50)和K(i)（米氏常数、半数抑制浓度和抑制常数）。我们分别用每种化合物孵育 Jurkat 淋巴瘤细胞后，采用液相色谱-串联质谱法测量了 MPA、MPAG 和 AcMPAG 的细胞内和细胞外浓度。[3]

C23H28O12

496.46

496.158

C, 55.64; H, 5.68; O, 38.67

31528-44-6

Mycophenolic acid glucuronide-d3

6442661

White to off-white solid powder

1.502g/cm3

875.7ºC at 760mmHg

98-100ºC

299.6ºC

1.624

0.298

189.28

5

12

9

35

827

5

CC1=C2COC(=O)C2=C(C(=C1OC)C/C=C(\C)/CCC(=O)O)O[C@H]3[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O3)C(=O)O)O)O)O

BYFGTSAYQQIUCN-HGIHDBQLSA-N

InChI=1S/C23H28O12/c1-9(5-7-13(24)25)4-6-11-18(32-3)10(2)12-8-33-22(31)14(12)19(11)34-23-17(28)15(26)16(27)20(35-23)21(29)30/h4,15-17,20,23,26-28H,5-8H2,1-3H3,(H,24,25)(H,29,30)/b9-4+/t15-,16-,17+,20-,23+/m0/s1

(2S,3S,4S,5R,6S)-6-[[5-[(E)-5-carboxy-3-methylpent-2-enyl]-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-1H-2-benzofuran-4-yl]oxy]-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid

mycophenolic acid glucuronide; 31528-44-6; Mycophenolic acid glucosiduronate; Mycophenolic acid 7-O-glucuronide; 54TS5J9T0K; UNII-54TS5J9T0K; MPAG cpd; .BETA.-D-GLUCOPYRANOSIDURONIC ACID, 5-((2E)-5-CARBOXY-3-METHYL-2-PENTEN-1-YL)-1,3-DIHYDRO-6-METHOXY-7-METHYL-3-OXO-4-ISOBENZOFURANYL;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 33.33 mg/mL (67.14 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。