TFB-TBOA (CF3-Bza-TBOA)

别名: TFB-TBOA; 480439-73-4; (3S)-3-[[3-[[4-(TRIFLUOROMETHYL)BENZOYL]AMINO]PHENYL]METHOXY]-L-ASPARTIC ACID; (2S,3S)-2-amino-3-[[3-[[4-(trifluoromethyl)benzoyl]amino]phenyl]methoxy]butanedioic acid; CHEMBL1257519; (2S,3S)-2-amino-3-(3-(4-(trifluoromethyl)benzamido)benzyloxy)succinic acid; CF3-Bza-TBOA; (2~{s},3~{s})-2-Azanyl-3-[[3-[[4-(Trifluoromethyl)phenyl]carbonylamino]phenyl]methoxy]butanedioic Acid; (2S,3S)-2-氨基-3-((3-(4-(三氟甲基)苯甲酰胺基)苄基)氧基)琥珀酸
目录号: V74187 纯度: ≥98%
TFB-TBOA (CF3-Bza-TBOA) 是一种有效的谷氨酸转运蛋白阻断剂,可以有效抑制胶质转运蛋白的活性。
TFB-TBOA (CF3-Bza-TBOA) CAS号: 480439-73-4
产品类别: EAAT
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
TFB-TBOA (CF3-Bza-TBOA) 是一种有效的谷氨酸转运蛋白阻断剂,可以有效抑制胶质转运蛋白的活性。 TFB-TBOA 对谷氨酸转运蛋白 EAAT1、EAAT2 和 EAAT3 的 IC50 分别为 22、17 和 300 nM。
生物活性&实验参考方法
靶点
Excitatory amino acid transporter-1/2/3 (EAAT-1/2/3)
体外研究 (In Vitro)
TFB-TBOA (CF3-Bza-TBOA) 在 100 nM 时将突触激活转运电流 (STC) 降低至对照的约 10%。它在大鼠海马切片辐射层的星形胶质细胞中以剂量依赖性方式发挥作用,IC50 为 13 nM[2]。根据 Na+i 响应的幅度,TFB-TBOA 对 200 µM 谷氨酸引起的 Na+i 响应表现出浓度依赖性抑制,IC50 值为 43 nM[1]。
谷氨酸转运体的不可运输阻断剂是研究突触传递机制的重要工具。DL-苏-β-苄氧天冬氨酸(DL-TBOA)是兴奋性氨基酸转运体(EAAT)所有亚型的强效阻断剂。我们表征了在各自苯环上具有取代基的新型L-TBOA类似物。类似物显著抑制了标记的谷氨酸摄取,其中最有效的是(2S,3S)-3-{3-[4-(三氟甲基)苯甲酰氨基]苄氧基}天冬氨酸(TFB-TBOA)。在使用瞬时表达EAAT的细胞的摄取试验中,TFB-TBOA对EAAT1、EAAT2和EAAT3的IC50值分别为22、17和300 nM。与L-TBOA相比,TFB-TBOA在抑制EAAT1和EAAT2方面明显更有效(EAAT1-3的IC50值分别为33、6.2和15μM)。电生理分析显示,TBOA类似物阻断了所有五种EAAT亚型中的运输相关电流,也阻断了EAAT5中的漏电流。类似物在抑制底物诱导电流方面的效力排名与摄取试验中观察到的顺序相同。然而,TFBTBOA的动力学与L-TBOA的动力学不同,这可能是因为它具有很强的结合亲和力。值得注意的是,TFB-TBOA不影响其他代表性神经递质转运蛋白或受体,包括离子型和代谢型谷氨酸受体,表明它对EAAT具有高度选择性。此外,侧脑室注射TBOA类似物诱导了小鼠的严重惊厥行为,这可能是由于谷氨酸的积累。综上所述,这些发现表明,新型TBOA类似物,特别是TFB-TBOA,应该成为阐明谷氨酸转运体生理作用的有用工具。[1]
在这里,我们描述了最近开发的谷氨酸转运体抑制剂(2S,3S)-3-[3-[4-(三氟甲基)苯甲酰氨基]苄氧基]天冬氨酸(TFB-TBOA)对原代培养的小鼠皮质星形胶质细胞的影响。神经胶质Na(+)-谷氨酸转运系统非常有效,谷氨酸对其的激活会导致细胞内Na(+,i)浓度的快速变化,从而能够实时监测转运蛋白的活性。使用荧光Na(+)敏感探针结合苯并呋喃异戊酸钠,通过荧光显微镜监测单个星形胶质细胞中的Na(+i)。当单独使用时,浓度为1微M的TFB-TBOA会引起Na(+)(i)的微小变化。TFB-TBOA以浓度依赖的方式抑制了200微M谷氨酸盐诱发的Na(+)(i)反应,IC(50)值为43+/-9nM,如Na(+i)反应的振幅所示。TFB-TBOA对谷氨酸诱发的Na(+)(i)增加的最大抑制率>80%,但仅部分可逆。在AMPA/红藻氨酸受体拮抗剂CNQX存在的情况下,残余反应仍然存在。TFB-TBOA还有效地抑制了由d-天冬氨酸(一种不激活非NMDA离子型受体的转运蛋白底物)引起的Na(+)(i)升高。发现TFB-TBOA不影响全细胞膜片钳记录的培养皮层神经元的膜特性。因此,TFB-TBOA因其高效能和明显缺乏神经元效应,似乎是迄今为止研究胶质谷氨酸转运体最有用的药理学工具之一[3]。
体内研究 (In Vivo)
谷氨酸转运体迅速吸收突触释放的谷氨酸,并将突触间隙中的谷氨酸浓度维持在较低水平。(2S,3S)-3-[3-[4-(三氟甲基)苯甲酰氨基]苄氧基]天冬氨酸(TFB-TBOA)是一种新型谷氨酸转运体阻断剂,可有效抑制神经胶质转运体的活性TFB-TBOA以剂量依赖的方式抑制大鼠海马切片辐射层星形胶质细胞中的突触激活转运蛋白电流(STC),IC50为13 nM,并在100 nM时将其降低到对照组的约10%。我们研究了TFB-TBOA对CA1锥体细胞谷氨酸能突触传递和细胞兴奋性的影响。TFB-TBOA(100 nM)延长了N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)介导的兴奋性突触后电流(EPSCs)的衰减,而只有当环噻嗪(CTZ)降低AMPAR的脱敏时,它才延长了α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体(AMPAR)介导EPSCs的衰减。此外,长期应用TFB-TBOA可诱导自发性癫痫样放电,并伴有膜电位的持续去极化偏移。这些癫痫样活动主要归因于NMDAR的激活。然而,即使在NMDAR的药理学阻断后,TFB-TBOA也会在CTZ存在的情况下通过激活AMPAR诱导类似的变化。因此,神经胶质转运体持续摄取突触释放的谷氨酸对于保护海马神经元免受谷氨酸受体介导的过度兴奋是必不可少的[2]。
细胞实验
神经元全细胞电生理记录[3]
使用电阻为5.5-8MΩ的硼硅酸盐玻璃移液管进行全电池电压钳记录。在电压钳位模式下,钳位电位设置为-70 mV。使用Axopatch 200A放大器进行记录。电流以1kHz进行滤波。数据是用Digidata 1440A以10 kHz的采样率采集的,用Pclamp 10软件控制,用Clampfit软件分析。在建立全细胞配置后,通常允许5分钟的时间。膜片钳细胞内溶液含有(以mM计)葡萄糖酸钾130、NaCl 5、磷酸肌酸钠10、MgCl2 1、EGTA 0.02、HEPES 10、Mg ATP 2和Na3-GTP 0.5,pH 7.3(用KOH调节)。 实验使用开放式灌注室进行。对照细胞外溶液和含有受试药物的溶液在培养细胞上以600μl/min和35°C的速度重力进料。
动物实验
从15至21日龄的Wistar大鼠中制备海马切片。雌雄大鼠均用异氟烷深度麻醉,然后断头处死。迅速取出海马,置于冰冷的蔗糖林格氏液中,该溶液成分为(mM):234蔗糖、2.5 KCl、1.25 NaH₂PO₄、10.0 MgSO₄、0.5 CaCl₂、26 NaHCO₃和11葡萄糖,并用95% O₂和5% CO₂饱和。在冰冷的蔗糖溶液中孵育5分钟后,用琼脂块将海马固定在微型切片机的载物台上,然后浸入冰冷的充氧蔗糖林格氏液中。使用微型切片机将额叶海马切片切成 300 μm 厚,并在室温下于对照外液中孵育 1 小时,并维持长达 9 小时。记录时,将切片转移到安装在正置显微镜载物台上的 2.5 ml 记录室中,并以 2 ml min−1 的速率灌注外液,外液通过在线加热器维持在 32 °C。[2]
参考文献

[1]. Characterization of novel L-threo-beta-benzyloxyaspartate derivatives, potent blockers of the glutamate transporters. Mol Pharmacol. 2004;65(4):1008-1015.

[2]. Effects of a novel glutamate transporter blocker, (2S, 3S)-3-[3-[4-(trifluoromethyl)benzoylamino]benzyloxy]aspartate (TFB-TBOA), on activities of hippocampal neurons. Neuropharmacology. 2005;48(4):479-491.

[3]. Inhibitory effects of (2S, 3S)-3-[3-[4-(trifluoromethyl)benzoylamino]benzyloxy]aspartate (TFB-TBOA) on the astrocytic sodium responses to glutamate. Brain Res. 2010;1316:27-34.

其他信息
在本研究中,当同时应用CTZ时,通过激活AMPA受体,可以模拟TFB-TBOA诱导的持续去极化和爆发性尖峰放电。如上所述,CTZ不仅能提高谷氨酸对AMPA受体的亲和力,还能显著降低AMPA受体的脱敏。这表明,由于转运蛋白功能障碍导致的细胞外谷氨酸浓度升高,会优先激活对激动剂具有高亲和力且脱敏特性较弱的受体。因此,NMDA受体在癫痫发生过程中比AMPA受体发挥更关键的作用。Shimamoto等人(2004)的研究表明,小鼠脑室内注射TFB-TBOA后数分钟内即可诱发惊厥发作。此外,我们发现大鼠海马内注射TFB-TBOA也能诱发类似的惊厥发作(Tsukada等人,未发表数据)。这些发现与目前在海马切片中获得的结果一致,并直接表明胶质细胞谷氨酸转运蛋白功能障碍会导致惊厥发作。然而,目前尚不清楚谷氨酸转运蛋白阻断到何种程度才会真正诱发癫痫发作。显然,要阐明胶质细胞谷氨酸转运蛋白功能障碍在整体动物癫痫发生中的作用,还有许多工作要做。TFB-TBOA 可作为一种药理学工具,用于阐明体内和体外实验中癫痫发生的机制。[2]
选择性抑制 EAAT2 (GLT-1) 亚型通常使用二氢红藻氨酸,但二氢红藻氨酸对该转运蛋白的亲和力相当低(Bridges 和 Esslinger,2005),并且会对原位星形胶质细胞产生复杂的影响(Bernardinelli 和 Chatton,2008)。最近的一份报告描述了首个EAAT1选择性抑制剂UCPH-101,其IC50约为1 μM,对EAAT2和EAAT3的选择性超过400倍(Jensen等人,2009)。由于TFB-TBOA作用于两种胶质细胞亚型,因此这种药理学工具可能成为谷氨酸转运功能研究的一个有益补充。综上所述,本研究表明TFB-TBOA能够高效抑制星形胶质细胞中Na+依赖性谷氨酸转运。尽管在实验设计中必须考虑其抑制作用的部分可逆性,但TFB-TBOA仍被认为是一种研究谷氨酸转运和神经元-胶质细胞相互作用的极其有价值的工具。[3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C19H17F3N2O6
分子量
426.34
精确质量
426.104
元素分析
C, 53.53; H, 4.02; F, 13.37; N, 6.57; O, 22.52
CAS号
480439-73-4
PubChem CID
52941382
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
3.112
tPSA
138.95
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
8
重原子数目
30
分子复杂度/Complexity
622
定义原子立体中心数目
2
SMILES
C1=CC(=CC(=C1)NC(=O)C2=CC=C(C=C2)C(F)(F)F)CO[C@@H]([C@@H](C(=O)O)N)C(=O)O
InChi Key
LPWONNPEPDHEAI-GJZGRUSLSA-N
InChi Code
InChI=1S/C19H17F3N2O6/c20-19(21,22)12-6-4-11(5-7-12)16(25)24-13-3-1-2-10(8-13)9-30-15(18(28)29)14(23)17(26)27/h1-8,14-15H,9,23H2,(H,24,25)(H,26,27)(H,28,29)/t14-,15-/m0/s1
化学名
(2S,3S)-2-amino-3-[[3-[[4-(trifluoromethyl)benzoyl]amino]phenyl]methoxy]butanedioic acid
别名
TFB-TBOA; 480439-73-4; (3S)-3-[[3-[[4-(TRIFLUOROMETHYL)BENZOYL]AMINO]PHENYL]METHOXY]-L-ASPARTIC ACID; (2S,3S)-2-amino-3-[[3-[[4-(trifluoromethyl)benzoyl]amino]phenyl]methoxy]butanedioic acid; CHEMBL1257519; (2S,3S)-2-amino-3-(3-(4-(trifluoromethyl)benzamido)benzyloxy)succinic acid; CF3-Bza-TBOA; (2~{s},3~{s})-2-Azanyl-3-[[3-[[4-(Trifluoromethyl)phenyl]carbonylamino]phenyl]methoxy]butanedioic Acid;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 50 mg/mL (117.28 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 12.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3455 mL 11.7277 mL 23.4555 mL
5 mM 0.4691 mL 2.3455 mL 4.6911 mL
10 mM 0.2346 mL 1.1728 mL 2.3455 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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