| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 27 nM (BRD4 BD1), 32 nM (BRD4 BD2)[1]
ZL0420 specifically targets BRD4 (Bromodomain-containing protein 4), a key epigenetic reader that recognizes acetylated lysine residues on histones. It inhibits both the first (BD1) and second (BD2) bromodomains of BRD4, with reported IC50 values of 27 nM for BD1 and 32 nM for BD2. By binding to the acetyl-lysine binding pocket, it disrupts BRD4-mediated transcriptional activation of inflammatory genes. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ZL0420 正确对接至 BRD4 的乙酰赖氨酸 (KAc) 结合口袋时，可直接与 Asn140 形成关键相互作用，并通过 H2O 分子间接与 Tyr97 形成关键相互作用。在培养的人类小气道上皮细胞 (hSAEC) 中，ZL0420 表现出亚微摩尔级的抑制 TLR3 依赖性先天免疫基因程序的能力，包括 ISG54、ISG56、IL-8 和 Groβ 基因，IC50 为 0.49-0.86 µM[1]。
体外实验表明，ZL0420 能有效抑制 TLR3 依赖的固有免疫基因程序。在培养的人小气道上皮细胞 (hSAEC) 中，它能抑制干扰素刺激基因（如 ISG54、ISG56、IL-8 和 Grobeta）的表达，IC50 值范围为 0.49 至 0.86 uM。分子对接研究证实，ZL0420 能很好地结合到 BRD4 的 KAc 结合口袋中，形成关键的相互作用，包括与 Asn140 的直接氢键。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
ZL0420 在小鼠模型中对气道炎症具有强效、低毒性的作用。ZL0420 表现出显著的疗效，几乎完全消除了由 poly(I:C) 给药引起的中小气道周围深层中性粒细胞的积聚[1]。
在体内实验中，ZL0420 在小鼠气道炎症模型中表现出强效且低毒性的疗效。它几乎完全阻断了聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)）给药诱导的小气道和中等气道周围中性粒细胞的大量聚集，显示出显著的疗效。这表明其具有治疗肺部急性炎症的潜力。 |
| 酶活实验 |
采用基于384孔板的商业化TR-FRET检测试剂盒，通过时间分辨荧光能量转移（TR-FRET）检测方法，测定待测BRD4抑制剂与BRD4和BRD2溴结构域（BD）的结合能力。实验使用两种重组BRD4 BD或BRD2 BD。将浓度范围为0.01 nM至100 μM的BRD4抑制剂加入384孔板中，并根据供应商说明与其他反应组分混合，室温孵育1小时。使用市售BRD抑制剂JQ1和RVX208作为对照。使用 Tecan M1000 pro 读板仪，以 100 μs 的延迟时间和 500 μs 的时间窗口，在 340 nm 处激发样品，并在 620 nm 和 670 nm 处读取发射光，采用时间分辨模式读取微孔板。以半对数坐标绘制 TR-FRET 比值（670 nm 发射光/620 nm 发射光）与抑制剂浓度的关系图，得到典型的竞争性检测的 S 形剂量反应曲线。进一步计算了所测试的 BRD4 抑制剂对 BRD2 和 BRD4 溴结构域以及其他相关靶蛋白的 IC50 值。
采用无细胞时间分辨荧光能量转移 (TR-FRET) 检测方法测定 ZL0420 与 BRD4 溴结构域的结合亲和力。将纯化的重组 BRD4 BD1 或 BD2 蛋白与生物素标记的乙酰化组蛋白 H4 肽段和铕标记的抗组蛋白抗体孵育。向反应体系中加入 ZL0420 化合物，并测量 TR-FRET 信号以计算 IC50 值。 |
| 细胞实验 |
细胞培养[1]
永生化人小气道上皮细胞 (hSAECs) 的制备方法已在前期文献中描述。hSAECs 在 SAGM 小气道上皮细胞生长培养基中，于 5% CO2 的湿润环境下培养。细胞培养中使用浓度为 10 μg/mL 的 Poly(I:C)。化合物溶于 DMSO，并按指定浓度添加。 定量实时 PCR (Q-RT-PCR)[1] 基因表达分析中，1 μg RNA 使用 SuperScript III 进行逆转录，方法如前所述。取 1 μL cDNA 产物，使用 SYBR Green Supermix 和指定的基因特异性引物进行扩增。反应混合物在 iCycler 中进行 40 个循环，每个循环包括 94 °C 15 秒、60 °C 60 秒和 72 °C 1 分钟。采用ΔΔCt法计算基因表达相对变化的定量，并将实验组和对照组之间的表达倍数变化标准化为内参环孢菌素（PPIA）。 BRD4抑制剂对poly(I:C)诱导的先天免疫反应的体外疗效[1] 首先用0.01 nM至100 μM的一系列BRD4抑制剂预处理hSAECs 24小时，然后在收集细胞前加入10 μg/mL的poly(I:C)继续处理4小时。收集的细胞先用PBS洗涤两次，然后用酸性胍法（Tri Reagent）提取总RNA。将总RNA进一步逆转录，用于通过Q-RT-PCR进行基因表达分析。将BRD4抑制剂对poly(I:C)诱导的先天免疫基因表达的抑制作用与单独使用poly(I:C)进行比较，并计算各处理的抑制率。对于化合物23、28和35，以IC50值表示这些BRD4抑制剂对poly(I:C)诱导的先天免疫反应的体外抑制效果。化合物溶于DMSO，并在细胞培养基中进一步稀释至适当浓度。 在细胞实验中，将hSAECs接种于96孔板中，并使其过夜贴壁。然后用ZL0420系列稀释液（0.01 nM至100 uM）预处理细胞24小时。之后，向培养基中加入10 ug/mL的Poly(I:C)以激活TLR3通路，并继续培养4小时。收集细胞后，提取总RNA，并通过RT-qPCR检测先天免疫基因（例如ISG54、IL-8）的表达水平。 |
| 动物实验 |
BRD4抑制剂对聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)）诱导的急性气道炎症的体内疗效[1]
动物实验按照美国国立卫生研究院（NIH）《实验动物饲养和使用指南》进行，并经德克萨斯大学医学分部（UTMB）动物护理和使用委员会批准（批准号：1312058A）。雄性C57BL6/J小鼠（12周龄）购自杰克逊实验室，饲养于无特定病原体（SPF）条件下，自由摄食饮水。在聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)）刺激前一天，C57BL/6小鼠预先接受指定BRD4抑制剂（10 mg/kg体重，腹腔注射）处理。第二天，小鼠再次接受BRD4抑制剂处理，随后立即经鼻内给予磷酸盐缓冲液（PBS，50 μL）或聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)，300 μg溶于50 μL PBS）。一天后，对小鼠实施安乐死。收集经处理的小鼠的支气管肺泡灌洗液 (BALF) 和肺组织进行进一步分析。化合物首先溶解于 DMSO 中，然后在腹腔注射前用 10% 羟丙基-β-环糊精 PBS 溶液稀释至适当浓度。 气道炎症评估[1] 在支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中评估细胞向气道腔内的募集情况。用 1 mL 无菌 PBS (pH 7.4) 灌注肺脏两次以获得 BALF。取 50 μL BALF 进行台盼蓝染色，并使用血细胞计数器计数活细胞，从而确定总细胞数。对 Wright-Giemsa 染色的细胞离心涂片进行细胞分类计数。使用光学显微镜对每个样本计数 300 个细胞。福尔马林固定的肺组织经石蜡包埋，切片厚度为4 μm，并用苏木精-伊红染色或马松三色染色。显微镜观察在尼康Eclipse Ti系统上进行。 在接受聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)）刺激前一天，C57BL/6小鼠接受单次腹腔注射（IP）ZL0420（10 mg/kg）或载体对照。第二天，小鼠再次接受该化合物注射，随后立即经鼻内（in）给予poly(I:C)（300 μg）或PBS。一天后，处死动物。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）以检测中性粒细胞浸润，并采集肺组织进行组织病理学分析。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
现有文献中未提供ZL0420的具体ADME数据。然而，腹腔注射（10 mg/kg）的体内疗效表明，该化合物吸收良好，并在肺部达到足以发挥药理作用的浓度。该化合物的分子量为296.32，可溶于DMSO（30 mg/mL），便于其在体外和体内应用中使用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有文献表明，ZL0420 在小鼠模型中具有“低毒性”。在有效剂量 10 mg/kg 下，该化合物耐受性良好，能够完全阻断中性粒细胞聚集，且未观察到明显的不良反应。然而，文献中并未提供详细的全身毒理学数据。作为一种 BRD4 抑制剂，其长期疗效仍需评估，以用于后续的治疗开发。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
本研究采用基于结构的药物设计方法，结合片段合并和修饰策略，设计并合成了一系列不同的小分子化合物。化合物ZL0420 (28) 和ZL0454 (35) 被鉴定为高效且选择性的BRD4抑制剂，对BRD4的溴结构域(BD)具有纳摩尔级的结合亲和力。它们均能很好地与BRD4的乙酰赖氨酸(KAc)结合口袋对接，形成关键的相互作用，包括与Asn140的直接氢键以及通过H₂O分子与Tyr97的间接氢键。化合物28和35均表现出亚微摩尔级的抑制活性，能够抑制培养的人小气道上皮细胞(hSAEC)中TLR3依赖性先天免疫基因程序的表达，包括ISG54、ISG56、IL-8和Groβ基因。更重要的是，他们还证明 BRD4 抑制剂在降低小鼠模型气道炎症方面具有显著疗效，且毒性较低，这表明 BRD4 抑制剂可能具有阻断病毒引起的气道炎症的治疗潜力。[1]
ZL0420 是一种化学探针，可突出 BRD4 在炎症信号传导（特别是 TLR3 依赖性通路）中的作用。它对 BRD4 的选择性远高于其他 BET 家族成员，且具有强大的体内活性，使其成为研究急性气道炎症的宝贵工具。该化合物目前处于临床前阶段，尚未获准用于人体。它是治疗类固醇耐药性哮喘等疾病的潜在候选药物。 |
| 分子式 |
C16H16N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
296.32
|
| 精确质量 |
296.127
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| 元素分析 |
C, 64.85; H, 5.44; N, 18.91; O, 10.80
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| CAS号 |
2230496-80-5
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| 相关CAS号 |
(E/Z)-ZL0420;2229039-45-4
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| PubChem CID |
137285011
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| 外观&性状 |
Typically exists as Yellow to orange solids at room temperature
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| LogP |
2.2
|
| tPSA |
100Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
442
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
ANMQADUROYWADA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H16N4O2/c1-9-6-14(12(17)8-15(9)21)20-19-11-3-4-13-10(7-11)2-5-16(22)18-13/h3-4,6-8,21H,2,5,17H2,1H3,(H,18,22)
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| 化学名 |
6-[(2-amino-4-hydroxy-5-methylphenyl)diazenyl]-3,4-dihydro-1H-quinolin-2-one
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| 别名 |
6-[(2-amino-4-hydroxy-5-methylphenyl)diazenyl]-3,4-dihydro-1H-quinolin-2-one; 2230496-80-5; CHEMBL4176038; (E/Z)-ZL0420; 6-((2-Amino-4-hydroxy-5-methylphenyl)diazenyl)-3,4-dihydroquinolin-2(1H)-one; 6-[(2-Amino-4-hydroxy-5-methylphenyl)diazenyl]-3,4-dihydroquinolin-2(1H)-one;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 125 mg/mL (421.84 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3747 mL | 16.8737 mL | 33.7473 mL | |
| 5 mM | 0.6749 mL | 3.3747 mL | 6.7495 mL | |
| 10 mM | 0.3375 mL | 1.6874 mL | 3.3747 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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