| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BRD4
ZL0420 forms crucial interactions with Asn140 directly and Tyr97 indirectly through an H2O molecule when it is properly docked into the acetyl-lysine (KAc) binding pocket of BRD4. In cultured human small airway epithelial cells (hSAECs), ZL0420 demonstrates submicromolar potency of suppressing the TLR3-dependent innate immune gene program, including ISG54, ISG56, IL-8, and Groβ genes, with IC50s of 0.49-0.86 µM[1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
当 ZL0420 正确对接至 BRD4 的乙酰基赖氨酸 (KAc) 结合袋时，它会直接与 Asn140 形成重要的相互作用，并通过 H2O 分子间接与 Tyr97 形成重要的相互作用。在培养的人小气道上皮细胞 (hSAEC) 中，ZL0420 表现出亚微摩尔抑制 TLR3 依赖性先天免疫基因程序的效力，包括 ISG54、ISG56、IL-8 和 Groβ 基因，IC50 为 0.49-0.86 µM[1]。
ZL0420 在 poly(I:C) 刺激的人小气道上皮细胞 (hSAECs) 中，对 TLR3 依赖性先天免疫基因 (ISG54, ISG56, IL-8, Groβ) 的表达表现出亚微摩尔级的抑制效力。其 IC50 值分别为：ISG54 0.49 µM，ISG56 0.51 µM，IL-8 0.53 µM，Groβ 0.58 µM。该效力比化合物 23 强约15-20倍，且比阳性对照 (+)-JQ1 和 RVX-208 更有效。[1] 分子对接研究预测，ZL0420 占据 BRD4 BD1 的乙酰化赖氨酸结合口袋，形成关键相互作用，包括与 Asn140 直接形成氢键，以及通过一个水分子与 Tyr97 间接形成氢键。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
ZL0420 对小鼠模型气道炎症具有强效、低毒作用。 ZL0420 表现出显着的功效，几乎消除了中小型气道周围因施用聚 (I:C) 而引起的深层中性粒细胞积聚[1]。
在经鼻内给予 poly(I:C) 诱导的 TLR3 介导的小鼠急性气道炎症模型中，腹腔注射 ZL0420 (10 mg/kg) 能有效阻断 poly(I:C) 引起的支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中总细胞和中性粒细胞的增加。同时，它还能降低肺组织中的细胞因子表达，并且显示出比阳性对照 (+)-JQ1 或 RVX-208 更高的疗效。肺组织切片组织学分析显示，ZL0420 几乎完全阻断了 poly(I:C) 诱导的中小型气道周围显著的中性粒细胞聚集。[1] |
| 酶活实验 |
时间分辨荧光能量转移（TR-FRET）测定[1]
使用基于384孔板的商业TR-FRET检测试剂盒，通过时间分辨荧光能量转移（TR-FRET）检测，使用两种重组BRD4-BD或BRD2-BD，确定所测试的BRD4抑制剂与BRD4和BRD2溴结构域（BD）的结合能力。将0.01 nM至100μM的一系列浓度的BRD4抑制剂加入384孔测试板中，并根据供应商的说明与其他反应组分混合，然后在室温下孵育1小时。使用市售的BRD抑制剂JQ1和RVX208作为对照。通过在340 nm处激发样品并在620和670 nm处读取发射，在Tecan M1000 pro阅读器上使用100μs延迟和500μs窗口，以时间分辨格式读取板。TR-FRET比值（670 nm发射/620 nm发射与半对数轴上的抑制剂浓度）的图显示了竞争性测定的典型S形剂量反应曲线。这些数据分别用测试的BRD4抑制剂对BRD2和BRD4的溴结构域以及其他相关靶蛋白的IC50值进一步计算得出。 ZL0420 与溴结构域的结合亲和力使用商业化的时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 实验进行测定。简要流程如下：将一系列浓度的抑制剂加入含有重组溴结构域蛋白 (如 BRD4 BD1, BRD4 BD2 等) 的 384 孔板中。混合各反应组分并在室温下孵育 1 小时。使用时间分辨模式读取板子，激发波长为 340 nm，在 620 nm 和 670 nm 处测量发射光。将发射光比值 (670 nm/620 nm) 相对于抑制剂浓度的对数作图，生成 S 形剂量反应曲线，据此计算 IC50 值。[1] |
| 细胞实验 |
细胞培养[1]
之前已经描述了永生的人类小气道上皮细胞（hSAECs）。 hSAEC在5%CO2的加湿气氛中在SAGM小气道上皮细胞生长培养基中生长。Poly（I:C）以10μg/mL的浓度用于细胞培养。将化合物溶解在DMSO中，并以指定浓度加入。 定量实时PCR（Q-RT-PCR）[1] 对于基因表达分析，如前所述，使用Super Script III逆转录1μg RNA。使用SYBR Green Supermix扩增1μL cDNA产物，并指定基因特异性引物。在iCycler中，将反应混合物在94°C下进行40次循环，每次15秒，在60°C下60秒，在72°C下1分钟。使用ΔΔCt方法计算基因表达相对变化的定量，并将实验和对照样品之间的倍数变化归一化为内部对照亲环素（PPIA）。 BRD4抑制剂对聚（I:C）诱导的先天免疫反应的体外疗效[1] hSAEC首先用0.01 nM至100μM的一系列终浓度BRD4抑制剂预处理24小时，然后在收获细胞前以10μg/mL的浓度加入poly（I:C）再处理4小时。首先用PBS洗涤收获的细胞两次，然后使用酸性胍酚提取物（Tri-Regent）提取总RNA。通过Q-RT-PCR进一步逆转录总RNA以进行基因表达分析。比较了BRD4抑制剂对聚（I:C）诱导的先天免疫基因表达的抑制作用与单独使用聚（I:C）的抑制作用，并获得了每种处理的抑制百分比。对于化合物23、28和35，这些BRD4抑制剂对聚（I:C）诱导的先天免疫反应的体外疗效以这些化合物的IC50值表示。将化合物溶解在DMSO中，并在细胞培养基中进一步稀释至适当浓度。 ZL0420 的体外效力在人小气道上皮细胞 (hSAECs) 中进行评估。细胞先用一系列终浓度的化合物 (从 0.01 nM 到 100 µM) 预处理 24 小时。随后，向培养基中加入 TLR3 激动剂 poly(I:C) (浓度 10 µg/mL) 再培养 4 小时，以诱导先天免疫基因表达。然后收集细胞，洗涤后提取总 RNA。将提取的 RNA 逆转录为 cDNA。使用定量实时聚合酶链反应 (Q-RT-PCR) 对目标先天免疫基因 (ISG54, ISG56, IL-8, Groβ) 的表达水平进行定量。通过比较化合物处理并 poly(I:C) 刺激的细胞与仅用 poly(I:C) 处理的细胞的基因表达水平来计算抑制效果。IC50 值通过使用至少 8 个不同化合物浓度生成的剂量反应曲线确定。[1] |
| 动物实验 |
BRD4抑制剂对聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)）诱导的急性气道炎症的体内疗效[1]
动物实验按照美国国立卫生研究院（NIH）《实验动物饲养和使用指南》进行，并经德克萨斯大学医学分部（UTMB）动物护理和使用委员会批准（批准号：1312058A）。雄性C57BL6/J小鼠（12周龄）购自杰克逊实验室，饲养于无特定病原体（SPF）条件下，自由摄食饮水。在聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)）刺激前一天，C57BL/6小鼠预先接受指定BRD4抑制剂（10 mg/kg体重，腹腔注射）处理。第二天，小鼠再次接受BRD4抑制剂处理，随后立即经鼻内给予磷酸盐缓冲液（PBS，50 μL）或聚肌苷酸胞苷酸（poly(I:C)，300 μg溶于50 μL PBS）。一天后，对小鼠实施安乐死。收集经处理的小鼠的支气管肺泡灌洗液 (BALF) 和肺组织进行进一步分析。化合物首先溶解于 DMSO 中，然后在腹腔注射前用 10% 羟丙基-β-环糊精 PBS 溶液稀释至适当浓度。 气道炎症评估[1] 在支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中评估细胞向气道腔内的募集情况。用 1 mL 无菌 PBS (pH 7.4) 灌注肺脏两次以获得 BALF。取 50 μL BALF 进行台盼蓝染色，并使用血细胞计数器计数活细胞，从而确定总细胞数。对 Wright-Giemsa 染色的细胞离心涂片进行细胞分类计数。使用光学显微镜对每个样本计数 300 个细胞。福尔马林固定的肺组织经石蜡包埋，切片厚度为4 μm，并用苏木精-伊红染色或Masson三色染色。显微镜观察在NIKON Eclipse Ti系统上进行。 在C57BL/6小鼠急性气道炎症模型中评估了ZL0420的体内疗效。小鼠在接受聚肌胞苷酸（poly(I:C)）刺激前一天，通过腹腔注射预先给予该化合物（10 mg/kg体重）。第二天，小鼠再次接受该化合物，随后立即经鼻给予磷酸盐缓冲液（PBS）或聚肌胞苷酸（poly(I:C)）（300 µg溶于50 µL PBS）。聚肌胞苷酸刺激后一天，处死小鼠。用无菌PBS灌注肺脏两次，收集支气管肺泡灌洗液（BALF）。支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中的总细胞计数采用台盼蓝染色后血细胞计数板进行测定。细胞分类计数（例如，中性粒细胞）在经 Wright-Giemsa 染色的细胞离心涂片上进行。收集肺组织，用福尔马林固定，石蜡包埋，切片，并用苏木精-伊红染色进行组织学检查。[1] 在对大鼠进行药代动力学研究时，将ZL0420配制成含有 10% DMSO、60% PEG-400 和 30% 生理盐水的赋形剂。静脉注射剂量为 10 mg/kg，口服剂量为 20 mg/kg。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在静脉注射（IV，10 mg/kg）和口服（PO，20 mg/kg）给药后，对大鼠体内ZL0420的药代动力学特征进行了评估。静脉注射后，半衰期（t1/2）为1.2小时，曲线下面积（AUC0-∞）为14700 ng·h/mL，稳态分布容积（Vss）为0.864 L/kg，总清除率（CL）为11.5 mL/min/kg。口服给药后，血浆峰浓度（Cmax）为80 ng/mL，AUC0-∞为450 ng·h/mL。口服生物利用度不佳。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在一项初步安全性评估中，小鼠每日接受剂量为1至50 mg/kg的相关化合物ZL0454 (35)治疗一个月，结果显示未观察到对体重、血液学参数（白细胞、红细胞、血小板）、肝功能（白蛋白、球蛋白、碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶）或肾功能（肌酐、血尿素氮）的明显毒性作用。对接受化合物治疗的小鼠的肝脏、肾脏和肺组织进行组织学检查，也未发现明显的不良反应。尽管该数据集针对的是化合物35，但研究表明，在所测试的模型中，这类选择性BRD4抑制剂（包括ZL0420）似乎比泛BET抑制剂（如JQ1）更安全、耐受性更好。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
利用基于结构的药物设计方法，结合片段合并和修饰策略，设计并合成了一系列不同的小分子化合物。化合物 ZL0420 (28) 和 ZL0454 (35) 被鉴定为高效且选择性的 BRD4 抑制剂，对 BRD4 的溴结构域 (BD) 具有纳摩尔级的结合亲和力。它们均能很好地对接至 BRD4 的乙酰赖氨酸 (KAc) 结合口袋，形成关键的相互作用，包括直接与 Asn140 形成关键的氢键，以及通过 H₂O 分子间接与 Tyr97 形成氢键。化合物 28 和 35 均表现出亚微摩尔级的抑制活性，能够抑制培养的人小气道上皮细胞 (hSAEC) 中 TLR3 依赖的先天免疫基因程序，包括 ISG54、ISG56、IL-8 和 Groβ 基因的表达。更重要的是，他们还在小鼠模型中证实了该化合物能有效降低气道炎症，且毒性较低，这证明了BRD4抑制剂可能具有阻断病毒诱导的气道炎症的治疗潜力。[1]
ZL0420是通过基于结构的药物设计方法发现的，该方法涉及片段合并和修饰。它是一种强效且选择性的BRD4溴结构域抑制剂，其设计旨在模拟乙酰赖氨酸并占据其结合口袋。该化合物通过抑制BRD4依赖的先天免疫基因程序，证明了其具有阻断病毒诱导的气道炎症的治疗潜力。[1] |
| 分子式 |
C16H16N4O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
296.33
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| 精确质量 |
296.127
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| 元素分析 |
C, 64.85; H, 5.44; N, 18.91; O, 10.80
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| CAS号 |
2229039-45-4
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| 相关CAS号 |
ZL0420;2230496-80-5
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| PubChem CID |
137285011
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| 外观&性状 |
Yellow to orange solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
645.9±55.0 °C at 760 mmHg
|
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| 闪点 |
344.4±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.704
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| LogP |
2.19
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| tPSA |
100Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
442
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1CCC2C=C(C=CC=2N1)/N=N/C1C=C(C)C(=CC=1N)O
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| InChi Key |
ANMQADUROYWADA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H16N4O2/c1-9-6-14(12(17)8-15(9)21)20-19-11-3-4-13-10(7-11)2-5-16(22)18-13/h3-4,6-8,21H,2,5,17H2,1H3,(H,18,22)
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3746 mL | 16.8731 mL | 33.7462 mL | |
| 5 mM | 0.6749 mL | 3.3746 mL | 6.7492 mL | |
| 10 mM | 0.3375 mL | 1.6873 mL | 3.3746 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Penipanoid C
(Rac)-EBET-1055
SGC-BRDVIII-NC
Ad-JQ1
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