γ-Glutamylcysteine synthetase (γ-GCS) / Glutamate-cysteine ligase (GCL) - catalytic subunit (GCLC). IC50 (cell-free enzymatic assay) = 570 nM (95% CI: 429-757 nM). [1][3]
This compound targets gamma-glutamylcysteine synthetase, the key enzyme responsible for catalyzing the first and rate-limiting step of glutathione biosynthesis from glutamate and cysteine.

在ZAZ和M14黑色素瘤细胞系中，用L-丁硫氨酸-(S,R)-suLfoximine (BSO: 50 μM)处理48小时后，GSH水平降低了95%，GST酶活性降低了60%。在两种细胞系中，GST-π蛋白和mRNA的含量均显著降低[1]。L-丁硫氨酸-(S,R)-suLfoximine (BSO)通过不可逆地阻断合成谷胱甘肽(GSH)必需酶γ-谷氨酰半胱氨酸合酶，从而产生细胞氧化应激[2]。在癌细胞中，L-丁硫氨酸-(S,R)-suLfoximine (BSO) 可诱导铁死亡[3]。

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- 在无细胞酶活性测定中，BSO 抑制 GCL 活性，IC50 为 570 nM（95% CI：429-757 nM）。[3]
- 在 SH-SY5Y 细胞中，MTT 法检测显示，浓度为 250 μM 的 BSO（0-500 μM）可使细胞存活率达到 80-85%，Annexin-V/PI 双染法检测显示，在 100 μM 和 250 μM 浓度下处理 48 小时后，细胞凋亡未见显著增加。[1]
- 在 ZAZ 和 M14 黑色素瘤细胞系中，50 μM 的 BSO（96 小时）可使 GSH 水平降低约 95%。在较低浓度（1-3 μM）下，GSH 耗竭不完全，在 24-72 小时内部分恢复。[1] 在 ZAZ 和 M14 细胞中，BSO（50 μM，48-96 小时）使 GST 酶活性降低约 2-3 倍。Western blot 分析显示 GST-μ 蛋白水平降低，而 GST-π 表达未受影响。Northern blot 分析证实 GST-μ mRNA 水平降低。[1] 在 ZAZ 和 M14 细胞中，BSO（50 μM，48-96 小时）降低了 DNA 合成（³H-TdR 掺入）。在 ZAZ 细胞中观察到细胞毒性作用（96 小时细胞计数减少 60%），而 M14 细胞则表现出细胞抑制作用（48-72 小时细胞数量稳定，96 小时增加 2 倍）。 [1] 在PANC-1胰腺癌细胞中，BSO（100 μM，24 h）降低了总谷胱甘肽（GSH+GSSG）水平并诱导了脂质过氧化（通过BODIPY 581/591 C11染色测定）。铁死亡抑制剂ferrostatin-1、谷胱甘肽单乙酯（GSHee）和N-乙酰半胱氨酸（NAC）可减弱这种降低细胞活力的作用，而柠檬酸铁铵（FAC）则可增强这种作用。[3] 在SW48结肠癌细胞中，NAC可减弱BSO诱导的细胞活力降低作用，而ferrostatin-1则无此作用，这表明其作用机制与铁死亡无关。 [3]
- 在一组癌细胞系（结直肠癌、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌）中，BSO 显示出不同的敏感性。敏感细胞系（logIC50 < -4.0 M）包括 G402（肾癌，-5.73）、PANC-1（胰腺癌，-5.33）、RCC4 VHL-/-（肾癌，-4.777）、786-O（肾癌，-4.10）、A-498（肾癌，-4.09）、A2780 CDDP（卵巢癌，-4.05）和 SW48（结肠癌，-4.04）。耐药细胞系（logIC50 > -3.5 M）包括 HCT-15、SW620、COLO 205、LS 174T、HCT-116、RKO、HT-29、SW480、ACHN 和 DU 145。[3]
- 与不敏感细胞（RCC4 VHL+/+、Caki-2、HCT-116）相比，BSO 敏感细胞（G402、RCC4 VHL-/-、A-498）的基础总谷胱甘肽水平较低（P=0.08）。GCLC 蛋白水平与谷胱甘肽水平呈正相关（r²=0.814，P=0.04），而 GSS 蛋白水平与谷胱甘肽水平无相关性（r²=0.021，P=0.82）。[3]

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L-丁硫氨酸亚砜亚胺通过不可逆地抑制γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶，诱导细胞氧化应激，导致细胞内谷胱甘肽水平降低。酶活性测定中IC50约为10 uM（在此浓度下抑制率达100%）。它对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶具有选择性，在浓度高达500 uM时对谷氨酰胺合成酶无活性。

BSO 会增加发育中小鼠 DNA 缺失的频率。与未处理的小鼠相比，BSO 处理分别使小鼠胎儿的 GSH 水平在 2 mM 和 20 mM 剂量下降低了 55% 和 70%。由于 BSO 能够抑制 GSH 合成所需的 γ-GCS 酶，因此，2 mM BSO 与 20 mM NAC 联合处理可将 GSH 水平降低至与 2 mM BSO 相当的水平。BSO 治疗后，半胱氨酸水平下降，与 GSH 水平的下降类似 [2]。在 C57BL/6J pᵘⁿ/pᵘⁿ 小鼠中，从交配后 0.5 天到 18.5 天通过饮用水给予 BSO（2 mM 或 20 mM），导致 70 kb DNA 缺失（视网膜色素上皮中的眼斑）的频率呈剂量依赖性增加。 2 mM BSO 导致眼斑数量增加约 30%（7.79 ± 0.45 vs. 对照组 5.36 ± 0.29，P<0.001），20 mM BSO 导致眼斑数量增加约 40%（8.78 ± 0.61 vs. 5.36 ± 0.29，P<0.001）。与 20 mM NAC 联合治疗可使缺失频率恢复正常（6.18 ± 0.47 vs. 7.79 ± 0.45，P=0.016）。 [2]
在同一小鼠模型中，BSO治疗（2 mM 和 20 mM）分别使胎鼠体内 GSH 浓度降低了 55% (P<0.01) 和 70% (P<0.001)，半胱氨酸浓度分别降低了 27% (P<0.05) 和 55% (P<0.01)。NAC 联合治疗可恢复半胱氨酸水平，但不能恢复 GSH 水平。[2]
在异种移植研究中，BSO 治疗延长了携带黑色素瘤小鼠的生存期（参见 Prezioso 等，1990b，1992）。[1]
在一项 I 期临床试验中，持续输注 BSO 可使稳态血清浓度超过 500 μM，并将肿瘤谷胱甘肽水平降低至基线水平的 10% 以下。一名转移性恶性黑色素瘤患者在接受持续输注BSO联合推注美法仑治疗后获得完全缓解。[1]

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丁硫氨酸亚砜亚胺 (BSO) 已被证明能够耗竭细胞内谷胱甘肽，并在体外和体内逆转对铂类和烷化剂的耐药性。目前，它正与美法仑联合用于癌症治疗，作为化疗的辅助药物进行 I 期临床试验研究。

无细胞GCL酶活性测定：N端His标签的人GCLM和C端His标签的人GCLC在大肠杆菌中表达，并经Ni-NTA亲和层析纯化，随后进行Superdex 200凝胶过滤。将BSO（0.1、1、10和100 μM）与酶（各10 nM）预混合30分钟，然后加入200 μM ATP、1.2 mM谷氨酸和200 μM半胱氨酸。孵育60分钟后，加入1%甲酸终止反应，并使用RapidFire300质谱仪（与API4000三重四极杆质谱仪联用）测定ATP和γ-谷氨酰半胱氨酸的水平。IC50值使用XLfit或GraphPad Prism计算。 [3]
- 谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性测定：采用Habig等人（1975）的方法，以1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB）和谷胱甘肽（GSH）为底物，测定细胞上清液中的谷胱甘肽S-转移酶活性。活性采用分光光度法测定。[1]
- 谷胱甘肽还原酶（GSSG-R）活性测定：采用分光光度法，通过监测NADPH的氧化速率来测定活性。[1]
- 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定：采用Paglia和Valentine的方法，以H₂O₂为底物测定活性。[1]

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非细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制试验采用纯化的鼠肾酶或重组人GCLC/GCLM异二聚体进行。反应混合物包含50 mM Tris-HCl（pH 8.0）、20 mM MgCl2、2 mM ATP、10 mM L-谷氨酸、10 mM L-半胱氨酸以及不同浓度的L-丁硫氨酸亚砜亚胺（0.01-100 uM）。加入酶启动反应，并在37℃孵育30分钟。加入10%三氯乙酸终止反应。离心后，产物（γ-谷氨酰半胱氨酸）经邻苯二甲醛（OPA）衍生化后，通过高效液相色谱-荧光检测法进行定量。IC50值通过绘制剩余活性与抑制剂浓度的关系曲线计算得出。采用Lineweaver-Burk作图法，在不同谷氨酸和半胱氨酸浓度下测定动力学参数。对于不可逆抑制研究，在加入底物之前，将酶与抑制剂预孵育不同时间，以确定失活速率常数。

琼脂基胸苷掺入实验：将肿瘤细胞悬浮于软琼脂中，以每孔 20,000 个细胞的密度接种于 24 孔板中，分别在有或无 BSO 的条件下培养 5 天。对于联合实验，细胞预先在 BSO 中孵育 24 小时。在最后 48 小时，向孔中加入 ³H-胸苷。将培养板加热至 90°C 以液化琼脂，将细胞收集到玻璃纤维滤膜上，并计数放射性。增殖分数 (FC) = 处理组 CPM / 对照组 CPM。[1]
- 细胞活力检测（CellTiter-Glo）：将细胞以每孔 1,000-3,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中。24 小时后，分别加入 BSO、GSHEe、ferrostatin-1、NAC、顺铂或 FAC。 3天后，使用CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒评估细胞活力。[3]
- 总谷胱甘肽测定（GSH+GSSG）：用BSO处理24小时后，使用GSH/GSSG-Glo检测试剂盒（Promega）测定细胞总谷胱甘肽水平。[3]
- 脂质过氧化测定：将PANC-1细胞（1 × 10⁶）接种于10 cm培养皿中，用BSO处理24小时，然后与5 μM BODIPY 581/591 C11脂质过氧化传感器孵育30分钟。洗涤后，使用流式细胞仪（FACS Verse）评估脂质过氧化水平。 [3] - GSH 测定（改良 Tietze 法）：将细胞在 0.01 M NaPO₄ + 0.005 M EDTA 缓冲液（pH 7.5）中冻融三次，然后在 4°C 下以 30,000 g 离心 30 分钟。通过测定 25°C 下 412 nm 波长处光密度值的变化率来确定 GSH 水平。[1] - Western 印迹：将细胞在 SDS 样品缓冲液中裂解，并在 95°C 下加热 5 分钟。取 3 μg 蛋白进行 SDS-PAGE 电泳（7.5-15% 梯度凝胶），然后转移至 PVDF 膜，封闭后，与一抗（抗 GCLC、抗 GSS、抗 Hsp90）在 4°C 下孵育过夜，随后与 HRP 标记的二抗孵育。使用 LAS-3000 检测化学发光信号。 [3] Northern印迹：将总RNA（50 μg）进行琼脂糖-甲醛凝胶电泳，转移至硝酸纤维素膜，并在65℃下与³²P随机引物标记的GST-μ和GST-π cDNA探针进行杂交。[1] 免疫组织化学（GST-π）：将石蜡包埋的组织切片脱蜡，用3% H₂O₂孵育，封闭，与抗GST-π单克隆抗体（1:10）孵育60分钟，然后与LINK和LABEL试剂孵育，DAB显色，苏木精复染。通过光学显微镜确定染色细胞的百分比和强度。[1]

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谷胱甘肽耗竭实验可使用多种癌细胞系和原代细胞，包括 HEK293、HeLa、HepG2、A549、MCF-7 和 T98G 胶质瘤细胞。将细胞接种于 6 孔或 96 孔板中，待细胞汇合度达到 70-80% 后，加入浓度为 10-1000 uM 的 L-丁硫氨酸亚砜亚胺，孵育 12-48 小时。使用基于酶促循环法的 GSH 检测试剂盒（以 DTNB [5,5'-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)] 和谷胱甘肽还原酶为底物），按照制造商的说明书测定细胞内 GSH 水平。收集细胞，裂解，并测定总蛋白浓度进行标准化。GSH 水平以 nmol/mg 蛋白表示。为评估细胞毒性，将细胞用 50-500 uM 的 BSO 处理 24-72 小时，然后进行 MTT 或 CellTiter-Glo 检测以确定其对细胞活力的影响。为研究化疗增敏作用，将细胞与 BSO 和化疗药物（顺铂、美法仑、曲奥舒凡、阿霉素）共同处理，以评估其对细胞毒性的增强作用。采用 Chou-Talalay 法计算联合指数 (CI)。使用 DCFH-DA (20 uM) 测定 ROS 水平，并定量荧光强度。

动物/疾病模型： C57BL/6J pun/pun 小鼠[2]。
剂量： 2mM L-丁硫氨酸-(S,R)-亚砜亚胺 (BSO)、20mM BSO、2mMBSO 和 20mM NAC、20mM NAC 或未添加任何物质的水，从感染后 0.5 天到 18.5 天，持续 18 天。添加药物的水的 pH 值如下：6.88（20mM BSO）；3.37（2mMBSO）；2.65（2mMBSO 加 20mM NAC）；2.58（20mM NAC）。我们实验室使用的普通水的 pH 值约为 4。
给药途径： 饮用水。
实验结果： 未经处理的对照组、2 mM L-丁硫氨酸-(S,R)-亚砜亚胺 (BSO) 处理组和 20 mM BSO 处理组小鼠的眼点平均数（平均值±SEM）分别为 5.36±0.29 (n=46)、7.79±0.45 (n=34) 和 8.78±0.61 (n=32)。与未处理的小鼠相比，2 mM BSO 处理可使眼斑数量增加约 30%，而 20 mM BSO 处理可使眼斑数量增加约 40%。

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饮用水灌胃给药（小鼠妊娠研究）：妊娠 C57BL/6J pᵘⁿ/pᵘⁿ 小鼠在交配后 0.5 至 18.5 天期间，可自由饮用添加了 BSO（2 mM 或 20 mM）的水，BSO 可单独使用或与 20 mM NAC 联合使用。2 mM 浓度下，每日 BSO 摄入量约为 0.1 g/kg (0.45 mM/kg)；20 mM 浓度下，每日 BSO 摄入量约为 1 g/kg (4.5 mM/kg)。子代小鼠在 20 日龄时处死，用于眼斑分析；或在妊娠 17.5 天时分离胎儿，用于硫醇测定。 [2]
- 小鼠腹腔注射：C57BL/6J 小鼠腹腔注射 BSO（300 mg/kg），每日一次，连续 7 天，单独注射或预先注射 D-甘露醇（2.0 M）以破坏血脑屏障。[1]
- 小鼠静脉注射：C57BL/6J 或 BALB/cByJ 小鼠经尾静脉注射 BSO，剂量分别为 75、115、150 和 300 mg/kg 化合物 1，每日一次，连续 3 天或 7 天。[1]
- 异种移植研究（参考文献）：荷黑色素瘤小鼠接受 BSO 单独治疗或与其他药物联合治疗。[1]

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已在包括小鼠和大鼠在内的多种动物模型中开展了体内药代动力学和疗效研究。在异种移植研究中，将人肿瘤细胞（例如T98G胶质瘤、HCT116结肠癌、A549肺癌）皮下植入免疫缺陷小鼠（例如裸鼠、SCID小鼠）体内。当肿瘤体积达到100-200 mm³时，腹腔注射L-丁硫氨酸亚砜亚胺1-5 mmol/kg（约220-1100 mg/kg），或口服2-10 mmol/kg。治疗通常在化疗前2-6小时开始，并每日持续进行。为了实现持续给药，可使用渗透泵皮下输注³⁵S标记的药物。每2-3天用游标卡尺测量一次肿瘤体积。研究结束时，切除肿瘤并测量肿瘤组织中的谷胱甘肽（GSH）水平。在毒理学和药代动力学研究中，Sprague-Dawley大鼠或BALB/c小鼠经静脉、腹腔或口服途径单次或多次接受BSO给药。在不同时间点（0、0.5、1、2、4、8、12、24小时）采集血样。分离血浆，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定BSO浓度。采集组织（肝脏、肾脏、肿瘤）用于GSH定量和药物浓度分析。药效学研究测量组织和肿瘤中GSH消耗的时间进程和程度。已在癌症患者中开展I期临床试验，以评估BSO联合美法仑的最大耐受剂量、药代动力学和药效学。

在 I 期临床试验中，持续输注 BSO 可使稳态血清浓度超过 500 μM。[1]
- 持续输注 BSO 可将肿瘤谷胱甘肽水平降低至基线水平的 10% 以下。[1]
- BSO 在体外 IC90 浓度下的曲线下面积 (AUC) 为 3,060 μM × hr，而体内 AUC 为 42,192 μM × hr（体内 AUC 比体外高 13.8 倍）。[1]
- BSO 在培养基中孵育 5 天后仍保持稳定。[1]

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在癌症患者中，BSO 在所研究的剂量范围内表现出线性药代动力学特征。静脉给药后，BSO 分布广泛，分布容积接近人体总水量。其在人体内的消除半衰期约为 2-4 小时。啮齿动物研究表明，口服 BSO 后吸收良好，生物利用度估计为 30-50%。BSO 在血浆和组织中相对稳定，且代谢不广泛。该化合物主要以原形经尿液排出。BSO 能有效渗透肿瘤，在敏感肿瘤类型中达到足以使 GSH 水平降低 80% 以上的浓度。已阐明其药代动力学-药效学关系，GSH 的消耗与 BSO 的暴露量呈正相关。由于存在 R 和 S 异构体，该化合物已在立体选择性药代动力学研究中进行了评估。

在 I 期临床试验中，静脉推注和持续输注 BSO 均耐受性良好。[1]
- 在妊娠大鼠中，妊娠期间饮用水中添加 2-6 mM/kg/天的 BSO 可降低 GSH 水平，但对子代无致畸作用。[2]
- 在小鼠胎儿中，饮用水中添加 2 mM 和 20 mM 的 BSO 可导致 GSH 和半胱氨酸显著减少，但与 N-乙酰半胱氨酸 (NAC) 联合治疗可防止 DNA 缺失，但不能恢复 GSH 水平。[2]
- 在正常小鼠中，BSO 治疗（0.26 mmol/kg，静脉注射，每日一次，连续 3 天）后肝脏切片的组织病理学分析显示，与对照组相比未见明显变化。血清肌酐和肝酶水平（ALT、AST）均在正常范围内。[1]
- 对新生大鼠施用 BSO 会导致多器官衰竭和死亡。[2]

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动物模型毒性研究表明，在能显著降低谷胱甘肽（GSH）水平的剂量下，BSO通常耐受性良好。在小鼠中，口服2-5 mmol/kg的BSO无毒，而更高剂量可能导致可逆性体重减轻和轻微的胃肠道反应。在I期临床试验中，BSO的剂量限制性毒性为短暂、可逆的肝毒性（肝功能指标升高），在治疗剂量下未观察到明显的肾毒性、骨髓抑制或神经毒性。当与化疗药物联合使用时，BSO可能会增强烷化剂（如美法仑）的毒性，导致骨髓抑制加剧。联合用药方案中需要谨慎调整剂量。目前尚未有致癌性或致突变性研究报告。

[1]. Selective and synergistic activity of L-S,R-buthionine sulfoximine on malignant melanoma is accompanied by decreased expression of glutathione-S-transferase. Pigment Cell Res. 1997 Aug;10(4):236-49.

[2]. Glutathione depletion by buthionine sulfoximine induces DNA deletions in mice. Carcinogenesis. 2006 Feb;27(2):240-4.

[3]. Low tumor glutathione level as a sensitivity marker for glutamate-cysteine ligase inhibitors. Oncol Lett. 2018 Jun;15(6):8735-8743.

丁硫氨酸亚砜通过L-丁硫氨酸-S-亚砜亚胺异构体与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）活性位点的共价连接，不可逆地抑制γ-GCS，从而选择性地抑制GSH的合成。[1][2]
- 由于黑色素瘤细胞依赖GSH来解毒黑色素合成过程中产生的活性邻醌和过氧化物，因此它们对BSO具有独特的敏感性。黑色素瘤标本对BSO的敏感性与黑色素含量呈正相关（r=0.63）。[1]
- BSO与BCNU（卡莫司汀）协同增强了对黑色素瘤细胞系和新鲜人黑色素瘤标本的细胞毒性。在1 μM BSO浓度下，联合指数（CI）为0.7；在3 μM BSO浓度下，联合指数为0.57。这种协同作用可能部分归因于BSO介导的GST-μ表达下调。 [1]
- BSO 处理导致 GST 酶活性降低，并在蛋白和 mRNA 水平上选择性下调 GST-μ（而非 GST-π）。[1]
- BSO 在某些癌细胞（例如 PANC-1）中诱导铁死亡，其特征是铁依赖性脂质过氧化和铁抑制素-1 的抑制。然而，在其他细胞（例如 SW48）中，BSO 诱导的细胞死亡似乎与铁死亡无关。[3]
- 与 GST-π 阴性样本相比，GST-π 阳性黑色素瘤样本对 BSO 的耐药性约为 2 倍（P<0.001），对 BSO-BCNU 联合用药的耐药性约为 2.5 倍（P<0.02）。 [1]
- 在结直肠癌患者样本中，约 15% (44/284) 的肿瘤与匹配的正常组织相比，谷胱甘肽水平较低，这表明可能有一部分患者群体能够从 GCL 抑制剂治疗中获益。[3]

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L-丁硫氨酸亚砜亚胺（BSO）被广泛用作研究工具，用于研究谷胱甘肽的生物学功能以及氧化应激在细胞凋亡、铁死亡、耐药性和衰老等细胞过程中的作用。BSO通过消耗GSH，使细胞对氧化应激诱导剂更加敏感，因此被广泛用于癌症研究中以克服化疗耐药性。在癌症的I期临床试验中，BSO与美法仑联合使用，作为化疗的辅助药物，旨在通过消耗肿瘤中保护细胞免受烷化剂侵害的GSH水平来增强化疗敏感性。BSO也被用于铁死亡的研究，其中通过BSO消耗GSH并结合GPX4抑制剂可触发铁依赖性细胞死亡。BSO是一种有价值的化学探针，可用于研究多种疾病模型中GSH依赖性通路、氧化还原信号传导和耐药机制。

C8H19CLN2O3S

258.0804913

DL-Buthionine-(S,R)-sulfoximine;5072-26-4;L-Buthionine-(S,R)-sulfoximine;83730-53-4;DL-Buthionine-(S,R)-sulfoximine hydrochloride

145710356

Typically exists as solid at room temperature

113 Ų

4

5

7

15

284

1

FMWPIVFRJOQKNQ-QNURJZHJSA-N

InChI=1S/C8H18N2O3S.ClH/c1-2-3-5-14(10,13)6-4-7(9)8(11)12;/h7,10H,2-6,9H2,1H3,(H,11,12);1H/t7-,14?;/m0./s1

(2S)-2-amino-4-(butylsulfonimidoyl)butanoic acid;hydrochloride

L-Buthionine-(S,R)-sulfoximine hydrochloride; L-Buthionine-(S,R)-sulfoximine (hydrochloride); L-BSO (hydrochloride);

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO :~250 mg/mL (~966.11 mM)
H2O :~70 mg/mL (~270.51 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。