| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Tight junctions (TJs)
AT-1002 TFA targets epithelial tight junctions, causing the redistribution of ZO-1 away from cell junctions. By regulating tight junction integrity, it reversibly increases the paracellular transport of molecules across the epithelial barrier. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
六肽合成肽AT-1002属于一类新发现的药物，该类药物可逆地增强分子通过上皮屏障的细胞旁路转运。AT-1002可发生半胱氨酸-半胱氨酸二聚化[1]。细胞活力通过测量细胞内ATP浓度进行评估，并使用AT-1002（0至5 mg/mL，3或24小时）评估未分化的Caco-2细胞。在AT-1002处理长达三小时的情况下，任何浓度的细胞活力均未受到影响。具体而言，5 mg/mL的AT-1002对Caco-2细胞的活力没有影响。当AT-1002浓度达到2.5 mg/mL及以上时，24小时后细胞活力会降低。然而，在AT-1002处理三小时后清洗细胞并不会造成细胞的不可逆损伤，因为细胞在24小时后仍然具有功能[2]。
六肽AT-1002可导致ZO-1从细胞连接处重新分布，这可通过荧光显微镜观察到。AT-1002还能激活Src和丝裂原活化蛋白激酶（MAP）通路，增加ZO-1酪氨酸磷酸化水平，并导致肌动蛋白丝重排。在功能上，AT-1002可逆性地降低了Caco-2细胞单层的跨上皮电阻（TEER），并增加了荧光素黄的通透性。[2] 使用CellTiter-Glo®细胞活力检测试剂盒检测了AT-1002对细胞活力的影响。处理3小时后，与未处理的对照细胞相比，AT-1002并未显著降低细胞活力（图2）。这些数据表明，该化合物增强LY通透性是由于其通透性调节活性，而非细胞活力降低[1]。体外实验表明，AT-1002可导致ZO-1从细胞连接处重新分布，这可通过荧光显微镜观察到。它可逆地增加分子跨上皮屏障的细胞旁路转运。该肽属于一类新发现的、可逆地增强细胞旁路转运的药物。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内活性[2]
确定上述AT-1002的体外效应是否能转化为体内效应，具有重要意义。此前已有研究表明，AT-1002能够提高体内经胃肠道给药的有效载荷的递送效率（Motlekar等，2006；Song等，2008a；Song等，2008b）。在此，我们希望确定AT-1002是否能够增强作用于气道上皮的有效载荷的递送。因此，我们测试了AT-1002是否能够提高鲑鱼降钙素（sCT）的全身暴露量，sCT本身的生物利用度非常低。将10 μg sCT与递增剂量的AT-1002一起气管内滴注至大鼠体内，结果显示，AT-1002剂量最高的治疗组肺部吸收增加，且sCT全身浓度更高（图8）。当在AT-1002给药2小时后再次给予sCT时，未观察到吸收增强，表明AT-1002的作用是短暂的（数据未显示）。在AT-1002给药剂量低于300 μg时，各药代动力学参数均未观察到差异（数据未显示）。在AT-1002剂量为300 μg和1000 μg时，sCT的AUC0-240 min较对照组（0 μg剂量）显著增加（表2）。与对照组相比，sCT 与 300 μg 和 1000 μg AT-1002 联合给药分别使 AUC 值增加了 1.6 倍 (161.8%) 和 5.2 倍 (522.5%)。Cmax（即达到的最高浓度）在 1000 μg AT-1002 与 sCT 联合给药时也比对照组高 2.3 倍。 现有文献中未详细列出 AT-1002 TFA 的具体体内活性数据。作为一种紧密连接调节剂和吸收增强剂，它可能具有改善体内药物跨上皮屏障递送的潜力。 |
| 酶活实验 |
跨上皮电阻 (TEER) 和荧光素黄渗透性测定 [2]
该方法及其改进的详细信息已在之前的文献中描述（Artursson，1990；Ginski 和 Polli，1999）。对于跨上皮电阻 (TEER) 和荧光素黄 (LY) 渗透性测定，将 Caco-2 细胞以 100,000 个细胞/cm2 的密度接种于 12 孔 Transwell™ 小室（孔径 0.4 μm）中，培养 21-28 天直至完全分化。将 Caco-2 细胞单层的顶端和基底外侧室在 37 °C 的 HBSS 溶液中预孵育 30 分钟。将浓度范围为 0.4 至 5 mg/ml 的 AT-1002 或 5 mg/ml 的乱序肽（溶于 HBSS）加入到每个单层细胞的顶端室，然后在 37 °C、50 rpm 下孵育 180 分钟。使用 MilliCell-ERS 测量 TEER 值，分别在 0、30、60、120 和 180 分钟时进行测量。在 180 分钟时，将顶端室中的 AT-1002 替换为 7.5 mM 荧光素黄。在 37 °C 下孵育 1 小时后，从基底外侧室取出样品，并在 Tecan Spectrofluor 荧光酶标仪上分析荧光素黄的含量，激发波长为 485 nm，发射波长为 535 nm。计算每种处理组的跨上皮电阻 (TEER) 降低值和荧光素黄 (LY) 渗透性增加值，并以未处理的荧光素黄对照组为基准进行标准化。渗透性计算公式如下：Papp = [(dC/dt) × Vr]/(Co × A)，其中 dC/dt 为渗透率，Vr 为接收室体积，A 为膜过滤器表面积，Co 为供体室初始浓度，增强比定义为 Papp AT-1002/Papp HBSS。 AT-1002 对 Caco-2 细胞作用的可逆性 [2] 如上所述，将 Caco-2 细胞接种于 Transwell 膜上，并在 DMEM 培养基中于 37 °C、5% CO2 和 95% 湿度条件下培养 21 天，每隔一天更换一次培养基。培养结束后，移除上室（顶端室）和下室（基底外侧室）的培养基。将细胞置于预热至 37 °C 的含钙镁离子的 HBSS 缓冲液（含 10 mM HEPES，pH 7.4）中孵育。Transwell 小室顶端分别加入或不加入浓度为 5 mg/ml 的 AT-1002（溶于 HBSS 缓冲液）处理不同时间。AT-1002 分别在 15、30、45 和 60 分钟后用 HBSS 缓冲液替换，或不移除。在不同时间点使用欧姆表监测跨上皮电阻 (TEER) 值。由于 AT-1002 TFA 的作用机制是通过调节细胞内的紧密连接，因此通常不进行非细胞检测。其活性在基于细胞的系统中通过测量细胞旁路转运和紧密连接蛋白定位来评估。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[2]
细胞类型： Caco-2 细胞 测试浓度： 0 至 5 mg/mL 孵育时间： 3 或 24 小时 实验结果： 在任何浓度下，处理 3 小时以内均未影响细胞活力。浓度为 2.5 mg/mL 及以上时，24 小时后细胞活力下降。 体外细胞毒性检测[2] 细胞活力通过发光 ATP 检测法测定细胞内 ATP 含量来确定。ATP 浓度通过荧光素酶催化甲虫荧光素单加氧反应（该反应依赖于 Mg2+ 和 ATP）产生的光量来确定。将浓度范围为 0 至 5 mg/ml 的 AT-1002（溶于 100 μl Hank's 平衡盐溶液 (HBSS)）加入到培养于 96 孔组织培养板中的 30,000 个 Caco-2 细胞中（去除培养基）。3 小时后，向孔中加入等体积的 Cell Titer-Glo 试剂，并在 Tecan Spectrafluor Plus 酶标仪中孵育 15 分钟后测量化学发光值。生成 ATP 标准曲线，并用于计算 AT-1002 处理后 ATP 的浓度。 免疫荧光[2] 将 IEC6 细胞以每孔 60,000 个细胞的密度接种于 8 孔载玻片上。接种24小时后，用无血清培养基洗涤细胞，并在37℃下用稀释于无血清培养基中的AT-1002（5 mg/ml）孵育60分钟。处理后，用PBS洗涤细胞，并在室温下用含4%多聚甲醛的PBS固定15分钟。用PBS洗涤细胞，在室温下用含0.5% Triton X-100的PBS透化5分钟，并在室温下用含2%山羊血清的PBS封闭30分钟。然后将细胞与稀释于封闭缓冲液（pMLC (1:50)）中的一抗在37℃下孵育1-2小时。用PBS洗涤细胞，并在室温下与FITC标记的抗兔二抗孵育45分钟。分别使用 Alexa Fluor555-鬼笔环肽和 FITC 标记的抗 ZO-1 抗体检测肌动蛋白和 ZO-1。将玻片洗涤后，用含 DAPI 的 Vectashield 封片剂封片，并在 Nikon-TE2000 荧光显微镜下成像。将 Caco-2 BBE 细胞顶端用 AT-1002 (5 mg/ml) 处理 3 小时（37 °C）。处理后，用甲醇：丙酮 (1:1) 固定细胞，并在含 2% 山羊血清的 PBS 中封闭。将滤膜与 FITC 标记的抗 ZO-1 抗体在室温下孵育 1 小时，洗涤后按上述方法封片。 流式细胞术[2] 将 Caco-2 BBE 细胞顶端用 AT-1002 (5 mg/ml) 处理 3 小时（37 °C）。处理后，用胰蛋白酶将细胞从滤膜上消化下来。将分离的细胞用PBS洗涤，在室温下用含4%多聚甲醛的PBS固定15分钟，在室温下用含0.5% Triton X-100的PBS透化5分钟，并在室温下用含2%山羊血清的PBS封闭30分钟。将细胞与Alexa Fluor555-鬼笔环肽在室温下孵育1小时，用PBS洗涤，并使用FACSCAN流式细胞仪进行分析。 AT-1002 TFA的体外细胞实验采用生长在透性支持物上的上皮细胞单层进行。用肽处理细胞，并测量荧光或标记分子的细胞旁转运。通过荧光显微镜评估紧密连接蛋白（如ZO-1）的重新分布。 |
| 动物实验 |
气管内给予鲑鱼降钙素[1]
本研究采用雄性Sprague-Dawley大鼠，研究开始时大鼠年龄约为12周。所有大鼠均经气管内滴注10 μg鲑鱼降钙素（sCT），溶于200 μl生理盐水中，生理盐水中分别含有0、300或1000 μg AT-1002（每剂量组n=6）。分别于给药前及给药后2.5、5、10、15、30、60、120和240分钟采集血样（200 μl），置于EDTA抗凝管中。分离血浆，并于≤-70 °C保存，直至进行sCT测定。本研究采用略作修改的DSL 10–3600 ACTIVE®鲑鱼降钙素酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒测定大鼠血浆中sCT的浓度。该检测方法是一种酶促扩增的“两步法”夹心免疫测定，采用生物素-链霉亲和素桥联检测系统。本研究使用大鼠血清作为基质配制标准品，浓度范围为15.6至1000 pg/ml，定量下限（LLOQ）为31.3 pg/ml。样品体积为50 μl。必要时，对于预期或实测浓度高于1000 pg/ml的样品，使用大鼠血清作为基质进行稀释。使用BioTek酶标仪上的KC4软件，采用四参数拟合模型计算标准曲线。结果表明，样品（大鼠血浆）和标准品（大鼠血清）基质的差异似乎并未影响检测性能。使用 Microsoft Excel® 和线性梯形法则计算 AUC，并使用 GraphPad Prism 4.01 版绘制数据图。同时测定了每种条件下的 Cmax 和 Tmax。 AT-1002 TFA 的体内动物实验通常在动物模型中进行，以评估其增强药物跨上皮屏障吸收的能力。该化合物将通过适当的给药途径给药，并评估药物的吸收和生物利用度。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
现有资料中未详细列出AT-1002 TFA的药代动力学性质。该化合物的分子量为821.91，分子式为C34H54F3N9O9S。其游离碱的CAS号为835872-35-0。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于AT-1002 TFA的毒理学数据。作为一种研究用肽，其安全性尚未得到充分表征。该肽仅供研究使用，不得用于人体。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AT-1002是一种六肽合成肽，属于一种新型化合物的新类别，能够可逆地增强分子通过上皮屏障的跨上皮旁路运输。该项目旨在阐明该肽的结构-活性关系，并重点研究其P2半胱氨酸残基的替代。本文报告了我们发现的具有可逆渗透性增强特性和更高稳定性的肽。[1] 紧密连接（TJs）是控制跨上皮旁路渗透性和上皮极性的细胞间结构。一般认为，TJs是高度动态的结构，其活性受到内源性和外源性刺激的调节。本文详细阐述了AT-1002的作用机制，它是霍乱弧菌第二种毒素——紧密连接毒素（ZOT）的活性区域。AT-1002是一种六肽，荧光显微镜显示它可以从细胞连接处重新分布ZO-1。AT-1002还可以激活Src和有丝分裂原激活蛋白激酶（MAP）通路，增加ZO-1酪氨酸磷酸化水平，并导致肌动蛋白纤维重排。功能上，AT-1002可逆地降低Caco-2细胞单层的跨上皮电阻（TEER），并增加荧光素黄色的渗透性。在体内实验中，与对照组相比，结合1 mg AT-1002的鲑鱼降钙素的AUC值增加了5.2倍。我们的结果为AT-1002诱导的紧密连接解体提供了机制解释，并证明AT-1002可以用于体内输送其他药物。[2] 药物吸收主要通过被动的跨细胞和旁细胞运输机制进行（Behrens等，2001）。亲脂性药物主要通过跨细胞途径和细胞膜上的通道、泵和载体等运输蛋白进行运输。然而，旁细胞途径通常是亲水性药物（蛋白质、肽等）的主要吸收途径。我们证明了源自ZOT的小肽AT-1002可以导致Caco-2细胞单层中紧密连接的打开（Motlekar等，2006；Song等，2008a），并显示这一效应是可逆的。其他实验表明，AT-1002与鲑鱼降钙素的联合气管内给药可使鲑鱼降钙素的全身暴露增加多达5.2倍，提示AT-1002在抗原和其他载荷的全身输送中的潜在应用。确实，先前的研究表明AT-1002可以增强小分子的输送（Motlekar等，2006；Song等，2008a；Song等，2008b）。另一项研究表明，来自紧密连接蛋白occludin的细胞外环肽可以通过增加紧密连接的渗透性来调节紧密连接（Tavelin等，2003），而不会造成短期毒性。然而，这些肽仅在添加到单层细胞的基底外层时有效。增强药物或抗原输送的试剂必须施加在上皮细胞表面的顶端才能发挥作用。本文表明AT-1002就是这样的试剂，因此代表了一种新型紧密连接（TJ）调节剂的原型。像AT-1002这样的TJ开启分子可以设想用于两种主要应用：常规药物输送和疫苗接种的抗原输送。最近的研究表明，轮状病毒衣壳中的一种肽可以促进大鼠的胰岛素吸收（Nava等，2004）。其他调节紧密连接（TJM）的肽和肽YY（PYY）也可以改善药物在上皮组织中的运输（Chen等，2006；Gonzalez-Mariscal和Nava，2005）。因此，能够实现高效、无毒和非侵入性药物输送的化合物将彻底改变多种疾病的治疗。因此，像AT-1002这样的TJ调节肽在粘膜药物输送领域代表了一个有前景的进展。[2]
AT-1002 TFA是一种6-mer合成肽和紧密连接调节剂，作为一种可逆的旁细胞吸收增强剂，跨越上皮屏障。仅供研究用途。没有临床试验或监管批准信息可用。 |
| 分子式 |
C34H54F3N9O9S
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|---|---|
| 分子量 |
821.91
|
| 精确质量 |
821.37172
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| 相关CAS号 |
AT-1002;835872-35-0
|
| PubChem CID |
138319696
|
| 序列 |
L-phenylalanyl-L-cysteinyl-L-isoleucyl-glycyl-L-arginyl-L-leucine trifluoroacetic acid; H-Phe-Cys-Ile-Gly-Arg-Leu-OH.TFA
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| 短序列 |
FCIGRL
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| tPSA |
312Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
11
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
15
|
| 可旋转键数目(RBC) |
22
|
| 重原子数目 |
56
|
| 分子复杂度/Complexity |
1210
|
| 定义原子立体中心数目 |
6
|
| SMILES |
CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N.C(=O)(C(F)(F)F)O
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| InChi Key |
JDVTZXDTPSAPFV-CACDTQBQSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H53N9O7S.C2HF3O2/c1-5-19(4)26(41-29(45)24(17-49)40-27(43)21(33)15-20-10-7-6-8-11-20)30(46)37-16-25(42)38-22(12-9-13-36-32(34)35)28(44)39-23(31(47)48)14-18(2)3;3-2(4,5)1(6)7/h6-8,10-11,18-19,21-24,26,49H,5,9,12-17,33H2,1-4H3,(H,37,46)(H,38,42)(H,39,44)(H,40,43)(H,41,45)(H,47,48)(H4,34,35,36);(H,6,7)/t19-,21-,22-,23-,24-,26-;/m0./s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid;2,2,2-trifluoroacetic acid
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| 别名 |
AT-1002 (TFA); AT1002 TFA;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~33.33 mg/mL (~40.55 mM)
H2O :~1 mg/mL (~1.22 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 8.33 mg/mL (10.13 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C). 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2167 mL | 6.0834 mL | 12.1668 mL | |
| 5 mM | 0.2433 mL | 1.2167 mL | 2.4334 mL | |
| 10 mM | 0.1217 mL | 0.6083 mL | 1.2167 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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