| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VHL; FKBP12F36V fusion protein
The molecular target of dTAGV-1 TFA is the F36V single-point mutated FKBP12 protein. The compound binds to this mutant FKBP12 and recruits the VHL E3 ubiquitin ligase, leading to the ubiquitination and proteasomal degradation of the FKBP12F36V fusion protein. It is a PROTAC that induces degradation of FKBP12F36V-Nluc in vivo. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在293FT细胞中，dTAGV-1（0.1 nM-10 μM；24 h）与TFA共同处理可导致FKBP12F36V-Nluc的强烈降解，而对FKBP12WT-Nluc无影响[1]。THAL-SNS-032与dTAGV-1（125-2000 nM；24 h）与TFA共同处理可导致CDK9和LACZ-FKBP12F36V的显著降解[1]。dTAGV-1（500 nM；1-24 h）与TFA共同处理可导致pERK1/2和KRASG12V快速降解[1]。在尤文氏肉瘤中，dTAGV-1（50-5000 nM；24 小时）TFA 可促进 EWS/FLI 的降解[1]。体外研究表明，dTAGV-1 TFA 可诱导 FKBP12F36V 融合蛋白的强效且选择性降解。用该化合物处理表达 FKBP12F36V 标签目标蛋白的细胞，并通过蛋白质印迹或其他方法检测标签蛋白的水平。该化合物可用作化学工具，通过诱导目标蛋白的降解来研究其功能。
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| 体内研究 (In Vivo) |
dTAGV-1（35 mg/kg；腹腔注射，每日一次，连续4天）在小鼠中，TFA 可导致 FKBP12F36V-Nluc 降解[1]。dTAGV-1（2-10 mg/kg；腹腔注射）对小鼠体内 TFA 的半衰期（T1/2=3.64 和 4.4 小时）、Cmax（595 和 2123 ng/mL）以及高暴露量（AUCinf = 3136 和 18517 h·ng/mL）均有影响[1]。小鼠的半衰期（T1/2=3.02 h）、Cmax（7780 ng/mL）和高暴露量（AUCinf = 3329 h·ng/mL）均受 dTAGV-1（2 mg/kg；静脉注射）TFA 的影响[1]。体内研究表明，dTAGV-1 TFA 可诱导小鼠体内 FKBP12F36V-Nluc 的降解。该化合物通过腹腔注射等方式给药于小鼠，并在各种组织中检测 FKBP12F36V 标记蛋白的降解情况。这使得可以通过靶向降解来研究体内蛋白质的功能。
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| 酶活实验 |
FKBP12WT 和 FKBP12F36V 双荧光素酶报告基因检测 [1]
使用 293FT FKBP12WT-Nluc 和 FKBP12F36V-Nluc 细胞进行双荧光素酶报告基因检测6。简而言之，将细胞以每孔 2000 个细胞的密度接种于 384 孔白色培养板中，每孔加入 20 µL 适宜培养基，过夜培养使其贴壁。然后使用 Janus 工作站的针式工具加入 100 nL 化合物，于 37 °C 孵育 24 小时。为了评估荧光素酶 (Fluc) 信号，将培养板恢复至室温，加入 20 µL Dual-Glo 试剂，孵育 10 分钟，并在 Envision 2104 酶标仪上测量发光值。随后，加入 20 µL Dual-Glo Stop & Glo 试剂，孵育 10 分钟，再次测量发光值以获取荧光素酶 (Nluc) 信号。使用 GraphPad PRISM v8 分析并绘制了 DMSO 归一化的 Nluc/Fluc 信号比值。 dTAGV-1 TFA 的体外检测通常涉及研究其诱导 FKBP12F36V 融合蛋白降解的能力。用该化合物处理表达 FKBP12F36V 标签蛋白的细胞，并通过蛋白质印迹或其他方法检测蛋白水平。可以进行三元复合物形成实验，以评估该化合物同时与 FKBP12F36V 和 VHL E3 连接酶结合的能力。 |
| 细胞实验 |
细胞活力分析[1]
使用 CellTiter-Glo 试剂盒检测二维贴壁或超低贴壁三维球状体中的细胞活力。在 Envision 2104 酶标仪和 Fluostar Omega 读板仪上测量发光值，并使用 GraphPad PRISM v8 软件进行数据分析。协同作用评估采用 CellTiter-Glo 试剂盒，并对参考文献 34 中的方案进行了如下修改。简而言之，将 EWS502 细胞以每孔 1000 个细胞的密度接种于 384 孔白色培养板中，每孔加入 50 µL 适宜培养基，过夜培养使其贴壁。然后使用 Janus 工作站的针式工具加入 100 nL 化合物，孵育 72 小时。通过加入 10 µL CellTiter-Glo 试剂盒，并在室温下孵育 15 分钟来测量细胞活力。使用 Envision 2104 酶标仪测量发光值，并使用 GraphPad PRISM v8 软件分析数据。 dTAGV-1 TFA 的体外细胞检测通常包括用该化合物处理表达 FKBP12F36V 标签蛋白的细胞，然后评估蛋白质降解情况。用 dTAGV-1 TFA 处理细胞后，通过蛋白质印迹或荧光法检测标签蛋白的水平。进行剂量反应实验以确定 DC50（半数最大降解浓度）。可进行功能性检测以评估蛋白质降解的后果。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：将8周龄免疫缺陷雌性小鼠移植MV4;11 luc-FKBP12F36V细胞[1]
剂量：35 mg/kg 给药途径：腹腔注射，每日一次，连续4天 实验结果：首次和第三次给药后4小时观察到生物发光信号显著下降。最后一次给药后28小时降解明显。 动物研究：化合物制剂[1] 对于腹腔注射，dTAG-13和dTAGV-1的制剂方法是先将其溶解于DMSO中，然后用20% solutol：0.9%无菌生理盐水（w:v）稀释，最终制剂中DMSO含量为5%。 dTAG-13 和 dTAGV-1 的最大溶解度分别为 35 mg kg⁻¹ 和 40 mg kg⁻¹。制剂在室温下可稳定保存 7 天。用于静脉注射时，dTAG-13 和 dTAGV-1 的配制方法为：先将其溶解于 DMSO 中，然后用 5% 溶菌酶：0.9% 无菌生理盐水（w/v）稀释，最终制剂中含有 5% DMSO。 动物研究：药代动力学 (PK) 评价 [1] 在 8 周龄 C57BL/6J 雄性小鼠中评估了药代动力学，分别在 0.08、0.25、0.5、1、2、4、6 和 8 小时（2 mg kg−1 dTAG-13 经尾静脉静脉注射 (IV)、10 mg kg−1 dTAG-13 经腹腔注射 (IP) 和 2 mg kg−1 dTAGV-1 经尾静脉静脉注射给药）以及 0.25、0.5、1、2、4、6、8、24 和 48 小时（2 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药和 10 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药）采集血液样本。通过离心法制备血浆，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆浓度，质谱跃迁为49600→340 AMU。使用Phoenix WinNonlin软件计算药代动力学参数，包括血浆峰浓度（Cmax）、口服生物利用度（%F）、暴露量（AUC）、半衰期（t1/2）、清除率（CL）和分布容积（Vd）。dTAGV-1 TFA的体内动物研究通常包括给小鼠服用该化合物以诱导FKBP12F36V标记蛋白的降解。该化合物通过腹腔注射给药（例如，连续3天）。收集组织，并通过Western blotting或其他方法测定标记蛋白的水平。这使得可以研究蛋白质在体内的功能。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
为了验证dTAGV-1在体内的适用性，我们对其在小鼠体内的药代动力学（PK）和药效学（PD）特性进行了表征。与dTAG-13相比，dTAGV-1表现出更优异的特性，包括更长的半衰期（T1/2分别为4.43 h和2.41 h）以及腹腔注射10 mg kg−1剂量后更高的药物暴露量（AUCinf分别为18,517 h ng mL−1和6,140 h ng mL−1）（补充表1）。为了报告dTAG分子的药效学特征，我们使用了MV4;11 luciferase-FKBP12F36V (luc-FKBP12F36V)细胞系，该细胞系能够无创地监测小鼠体内dTAG分子给药后的生物发光信号。6 在尾静脉注射MV4;11 luc-FKBP12F36V细胞并建立白血病负荷后，我们分别在给药载体、35 mg kg−1 dTAG-13或35 mg kg−1 dTAGV-1后4小时进行每日生物发光测量。首次给药dTAGV-1后4小时，生物发光信号显著降低（图2d和补充图3）。在连续三次给药dTAG-13或dTAGV-1后4小时，观察到生物发光信号持续降低。 dTAGV-1 的降解持续时间比 dTAG-13 更长，在最后一次给药后 28 小时仍可观察到降解。这些结果支持将 dTAGV-1 用作高效且选择性的分子，用于体外和体内靶向降解的评估。[1] dTAGV-1 TFA 的分子式为 C70H91F3N6O16S，分子量为 1361.56，CAS 编号为 2624313-15-9。该化合物为固体，在 DMSO 中的溶解度为 37.5 mg/mL。它是一种强效且选择性的 FKBP12F36V 突变融合蛋白降解剂。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
dTAGV-1 TFA 是一种研究用化合物，其毒性特征尚未得到充分阐明。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体治疗。建议遵循标准的实验室安全操作规程，包括使用个人防护装备。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化学生物学策略，如降解标签（dTAG）系统，可以直接破坏蛋白质稳态，相比基因方法提供了时间优势，并且比小分子抑制剂具有更高的选择性。我们描述了dTAGV-1，这是一种特异性针对VHL的dTAG分子，能够快速降解FKBP12F36V标记的蛋白质。dTAGV-1克服了先前报道的CRBN招募的dTAG分子在降解顽固癌基因方面的局限性，支持共降解研究，并促进了在细胞和小鼠中研究蛋白质功能的进展。[1]
我们报告了dTAGV-1，这是一种高效且特异性针对VHL的FKBP12F36V标记蛋白降解剂。dTAGV-1具有优越的药代动力学/药效学特性，使其成为体内应用的最佳工具。通过在胰腺导管腺癌（PDAC）模型中评估突变KRAS的降解，我们发现CRBN或VHL可以协同利用，以缓解由该癌蛋白协调的异常信号。相反，我们观察到这些E3泛素连接酶复合体在降解EWS/FLI方面的能力存在上下文差异。这与我们最近的报告一致，即dTAGV-1有效降解HCT116细胞中的核心介导亚单位（MED14），而CRBN招募的dTAG分子在该细胞中无效。我们观察到，MED14的快速降解阻断了谱系特异性转录回路。总之，我们的研究支持使用dTAGV-1来克服dTAG系统的当前局限性，从而能够评估难以被CRBN招募的dTAG分子降解的融合蛋白的直接影响。[1] 我们使用dTAGV-1研究EWS/FLI，结果显示VHL介导的EWS/FLI降解迅速改变下游靶蛋白的表达，并导致尤文肉瘤细胞显著的生长缺陷，从而提供了一个强有力的模型系统来研究EWS/FLI缺失的直接后果。数据支持针对EWS/FLI的降解使用直接作用的异双功能降解剂或分子凝胶的可能性，并揭示了与BET溴域降解剂联合使用的潜在策略。本研究中提供的dTAG分子及其配对对照将有助于评估精确的翻译后蛋白去除对更广泛靶标的功能后果。dTAG系统可以快速调节蛋白质丰度，并可以作为一种多功能策略，用于确定靶向降解是否是针对特定靶标在体内和体外药物开发的有效方法。[1] dTAGV-1 TFA（CAS 2624313-15-9）是一种强效且选择性降解突变FKBP12F36V融合蛋白的化合物。它由一种选择性结合F36V单点突变FKBP12的配体、一个连接子和一个VHL结合配体组成。它在体内诱导FKBP12F36V-Nluc的降解，并作为靶向蛋白降解的化学工具使用。 |
| 分子式 |
C70H91F3N6O16S
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|---|---|
| 分子量 |
1361.56
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| 精确质量 |
1360.616
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| CAS号 |
2624313-15-9
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| 相关CAS号 |
2624313-15-9 (dTAGV-1 TFA); 2624313-16-0 (dTAGV-1 hydrochloride); 2451573-87-6 (dTAGV-1-NEG)
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| PubChem CID |
154828675
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| 外观&性状 |
White to light brown solid powder
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| tPSA |
308
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
21
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| 可旋转键数目(RBC) |
32
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| 重原子数目 |
96
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| 分子复杂度/Complexity |
2290
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| 定义原子立体中心数目 |
7
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| SMILES |
CC[C@@H](C1=CC(=C(C(=C1)OC)OC)OC)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O[C@H](CCC3=CC(=C(C=C3)OC)OC)C4=CC=CC=C4OCC(=O)NCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N5C[C@@H](C[C@H]5C(=O)N[C@@H](C)C6=CC=C(C=C6)C7=C(N=CS7)C)O)C(C)(C)C.C(=O)(C(F)(F)F)O
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| InChi Key |
KSEWNBIDXKMTNT-LNVAYBNASA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C68H90N6O14S.C2HF3O2/c1-12-49(47-36-57(84-9)61(86-11)58(37-47)85-10)65(79)73-34-20-18-22-51(73)67(81)88-54(31-25-44-26-32-55(82-7)56(35-44)83-8)50-21-16-17-23-53(50)87-40-60(77)69-33-19-14-13-15-24-59(76)72-63(68(4,5)6)66(80)74-39-48(75)38-52(74)64(78)71-42(2)45-27-29-46(30-28-45)62-43(3)70-41-89-62;3-2(4,5)1(6)7/h16-17,21,23,26-30,32,35-37,41-42,48-49,51-52,54,63,75H,12-15,18-20,22,24-25,31,33-34,38-40H2,1-11H3,(H,69,77)(H,71,78)(H,72,76);(H,6,7)/t42-,48+,49-,51-,52-,54+,63+;/m0./s1
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| 化学名 |
[(1R)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[2-[2-[[7-[[(2S)-1-[(2S,4R)-4-hydroxy-2-[[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-7-oxoheptyl]amino]-2-oxoethoxy]phenyl]propyl] (2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carboxylate;2,2,2-trifluoroacetic acid
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| 别名 |
dTAGV-1 TFA; 2624313-15-9; dTAGV-1 (TFA);
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~37.5 mg/mL (~27.54 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (2.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (2.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 37.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.7345 mL | 3.6723 mL | 7.3445 mL | |
| 5 mM | 0.1469 mL | 0.7345 mL | 1.4689 mL | |
| 10 mM | 0.0734 mL | 0.3672 mL | 0.7345 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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