IKK (IC50 = 88 nM)
IκB Kinase β (IKKβ): PS-1145 is a selective inhibitor of IKKβ, with a Ki value of 4.8 ± 0.5 μM (determined by recombinant human IKKβ kinase activity assay) [1]
- Nuclear Factor-κB (NF-κB) Signaling Pathway: PS-1145 indirectly inhibits NF-κB activation by targeting IKKβ (upstream kinase of NF-κB) [1,2,3]

PS-1145 通过抑制 IkappaBalpha 磷酸化来阻断 TNFalpha 诱导的 NF-kappaB 激活，并阻断 IL-6 对 Dex 诱导的细胞凋亡的保护作用。 PS-1145 还抑制旁分泌 MM 细胞生长和 BMSC 中由 MM 细胞粘附引发的 IL-6 分泌。在人原代 CD4(+) T 细胞中，PS-1145 通过与 CD3 和 CD28 辅助受体结合来消除细胞增殖并损害 NF-κB 和 AP-1 转录因子的激活 激酶测定：将 PS-1145 溶解在 DMSO 中并保存在−20 °C 直至使用。 PS-1145 针对 IKK 复合物的 Ki 值是通过测量 Km 、 ATP 相对于不同固定浓度的抑制剂来确定的。简而言之，使用 sf9 中表达的 MEKK1 催化结构域预激活从未刺激的 HeLa S3 细胞中获得的部分纯化的 IKK 复合物。使用生物素化 IκBα 肽（250 μM，RHDSGLDSMKD，Km，肽 = 30 μM，K m，ATP = 10 μM）和磷酸-[Ser32]-磷酸抗体以 ELISA 形式评估激酶活性，并具有适当的标准曲线进行定量。对于 PS-1145 Ki 测量，首先将活化的 IKK 复合物在不同固定浓度的抑制剂 (0.1–1 μM) 中于 25 °C 预孵育 1 小时。然后在每个离散抑制剂浓度下进行 MgATP 的表观 K m 测量。细胞测定：通过测量细胞的 MTT 染料吸光度来评估 PS-1145 对 MM 生长的抑制作用。在 48 小时培养的最后 4 小时，将来自 48 小时培养物的细胞（MM.1S、U266 和 RPMI8226 细胞系）用 10 μL 5 mg/ml MTT 脉冲到每个孔中，然后加入 100 μl 含有异丙醇的0.04N HCl。使用分光光度计在 570 nm 处测量吸光度。

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IKKβ激酶活性抑制：重组人IKKβ与PS-1145（0.1~10 μM）孵育后，其激酶活性（以GST-IκBα为底物的磷酸化水平衡量）呈浓度依赖性降低。1 μM时，IKKβ活性降42%；5 μM时降85%；10 μM时抑制率>95%。浓度高达20 μM时，PS-1145 不抑制其他激酶（如IKKα、PKA、JNK），证实其对IKKβ的选择性 [1]
- NF-κB报告基因抑制：HEK293T细胞转染pNF-κB-luc（NF-κB荧光素酶报告质粒）和pRL-TK（海肾内参质粒），24小时后用PS-1145（0.5~5 μM）处理2小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激6小时。PS-1145 剂量依赖性降低荧光素酶活性：1 μM时抑制约30%，3 μM时抑制约65%，5 μM时抑制约90% [1]
- 免疫细胞中促炎细胞因子抑制：小鼠脾细胞用PS-1145（1~5 μM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。ELISA显示，TNF-α分泌从820±60 pg/mL降至5 μM时的150±20 pg/mL，IL-6分泌从1100±80 pg/mL降至5 μM时的180±30 pg/mL。RT-PCR证实，TNF-α mRNA降75%（5 μM），IL-6 mRNA降70%（5 μM） [2]
- 癌细胞抗增殖与促凋亡作用：人结肠癌细胞HT-29用PS-1145（0.5~10 μM）处理48小时。MTT实验显示浓度依赖性增殖抑制，IC50=3.2±0.3 μM；10 μM时活力降78%。Western blot显示促凋亡蛋白Bax升高（5 μM时约2.5倍），核内NF-κB p65降低（5 μM时降70%），提示通过抑制NF-κB诱导凋亡 [3]

在患有 DMBA 诱导的皮肤肿瘤的雄性 Wistar 大鼠中，PS-1145（50 mg/kg，静脉注射）通过上调 p53、激活 Caspases 并下调 NF-κB 和 VEGF 因子来增强肿瘤细胞凋亡，从而诱导肿瘤进展。

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缓解小鼠胶原诱导关节炎（CIA）：DBA/1J小鼠免疫Ⅱ型胶原（CII）建立CIA模型。从免疫后21天（关节炎发病）开始，小鼠腹腔注射PS-1145（10 mg/kg/天），持续14天（每组n=8）。与溶剂对照组相比，PS-1145 降低关节炎严重度评分（从8.5±1.2降至3.2±0.8，0~16分制）和爪肿胀（从1.8±0.2 mm降至0.9±0.1 mm）。血清TNF-α（从650±50 pg/mL降至180±30 pg/mL）和IL-6（从920±70 pg/mL降至220±40 pg/mL）降低，关节组织病理显示滑膜增生和中性粒细胞浸润减少 [2]
- 抑制裸鼠HT-29移植瘤生长：裸鼠（BALB/c nu/nu）皮下注射5×10⁶ HT-29细胞，肿瘤达~100 mm³时，口服PS-1145（20 mg/kg/天），持续21天（每组n=6）。PS-1145 降低肿瘤体积（从350±50 mm³降至120±30 mm³）和肿瘤重量（从0.42±0.05 g降至0.17±0.03 g）。肿瘤组织免疫组化显示，核p65阳性细胞从65%降至20%，TUNEL阳性凋亡细胞从5%升至25% [3]

PS-1145溶解在DMSO中并保存在-20°C直至使用。通过测量 Km、ATP 与固定抑制剂浓度变化的关系，计算 PS-1145 针对 IKK 复合物的 Ki 值。简而言之，sf9 中表达的 MEKK1 催化结构域用于预激活从未刺激的 HeLa S3 细胞中获得的部分纯化的 IKK 复合物。 ELISA 格式用于使用生物素化 IκBα 肽（250 μM、RHDSGLDSMKD、Km、肽 = 30 M、K m、ATP = 10 μM）和磷酸-[Ser32]-磷酸抗体测量激酶活性。

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重组IKKβ激酶活性实验：反应体系含50 mM Tris-HCl（pH7.5）、10 mM MgCl₂、2 mM DTT、10 μM ATP、1 μg重组人IKKβ、2 μg GST-IκBα（底物）及PS-1145（0.1~10 μM）。30℃孵育30分钟后，用SDS上样缓冲液终止反应。样品经10% SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，用抗磷酸化IκBα（Ser32）抗体孵育。ImageJ定量条带强度，相对于溶剂对照组计算激酶活性。通过Lineweaver-Burk图（不同ATP浓度2~20 μM）计算Ki值 [1]

通过测量细胞的 MTT 染料吸光度，确定 PS-1145 对 MM 生长的抑制作用。对于 48 小时培养物的最后 4 小时，将来自 48 小时培养物的细胞用 10 μL 5 mg/ml MTT 脉冲到每个孔中，然后用 100 μl 含有 0.04N HCl 的异丙醇脉冲。使用分光光度计，在 570 nm 处测量吸光度。

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HEK293T细胞NF-κB报告基因实验：HEK293T细胞以2×10⁴个/孔接种于24孔板，过夜培养。用转染试剂将0.4 μg pNF-κB-luc和0.04 μg pRL-TK转染细胞。转染24小时后，用PS-1145（0.5~5 μM）处理2小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激6小时。用被动裂解缓冲液裂解细胞，双荧光素酶检测系统测定荧光素酶活性，以萤火虫/海肾荧光素酶比值计算相对活性 [1]
- 小鼠脾细胞细胞因子实验：研磨小鼠脾脏，密度梯度离心分离脾细胞。细胞以1×10⁶个/孔接种于96孔板，用PS-1145（1~5 μM）预处理1小时，加入LPS（1 μg/mL）孵育24小时。收集上清，ELISA检测TNF-α和IL-6；RT-PCR实验中，提取细胞总RNA，逆转录为cDNA，用TNF-α、IL-6和GAPDH引物扩增 [2]
- HT-29细胞增殖与凋亡实验：HT-29细胞接种于96孔板（5×10³个/孔，MTT实验）或6孔板（2×10⁵个/孔，Western blot）。MTT实验：PS-1145（0.5~10 μM）处理48小时，加入MTT（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解后570 nm测吸光度；Western blot实验：PS-1145（2~5 μM）处理24小时，RIPA缓冲液裂解细胞，30 μg蛋白用抗Bax、抗p65、抗组蛋白H3（核内参）或抗β-actin（胞质内参）抗体检测 [3]

Mice: The mice used are C57BL/6 (B6), B10.BR, and B6.SJL. Regular mouse food and acidified tap water are freely given to mice. PS-1145 is given intraperitoneally at a dose of 50 mg/kg, whereas animals receive bortezomib intravenously at a dose of 1 mg/kg. Before conditioning with total body irradiation (TBI), the first dose of each agent is given.
Rats: Male Wistar rats weighing between 320 and 350 g are employed. For a 9-day research period, the HFD is consumed by four groups of rats (n=6/group). Three times per week, each group's animals receive two consecutive icv injections. All animals receive a pretreatment icv injection of either the IKK inhibitor PS1145 (10 g) or its vehicle (saline) just before receiving an icv injection of IL-4 (100 ng) or vehicle. Daily measurements of food intake and body weight are taken. On days 0 and 8, body composition analysis is performed as described above. Animals are put to death and samples are taken on day nine.

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CIA Mouse Model (DBA/1J Mice): Female DBA/1J mice (6–8 weeks old) were immunized subcutaneously with 100 μg CII emulsified in complete Freund’s adjuvant (CFA) on day 0, and boosted with CII in incomplete Freund’s adjuvant (IFA) on day 21. From day 21, mice were divided into vehicle (5% DMSO + sterile saline) and PS-1145 groups (n=8 per group). PS-1145 was dissolved in 5% DMSO + saline to 1 mg/mL, and administered intraperitoneally at 10 mg/kg/day for 14 days. Arthritis severity was scored daily (0–4 per paw, total 0–16). On day 35, mice were euthanized; serum was collected for cytokine ELISA, and hind paws were fixed in 10% formalin for histopathological analysis [2]
- HT-29 Xenograft Model (Nude Mice): Male BALB/c nu/nu mice (4–6 weeks old) were subcutaneously injected with 5×10⁶ HT-29 cells in 0.2 mL PBS into the right flank. When tumors reached ~100 mm³ (day 0), mice were randomized into vehicle (0.5% carboxymethyl cellulose sodium + 5% DMSO) and PS-1145 groups (n=6 per group). PS-1145 was suspended in vehicle to 2 mg/mL, and administered orally by gavage at 20 mg/kg/day for 21 days. Tumor volume (length × width² / 2) was measured every 3 days. On day 21, mice were euthanized; tumors were weighed, and portions were fixed in formalin for immunohistochemistry (anti-p65, TUNEL assay) [3]

In Vitro Cytotoxicity: MTT assays in HEK293T, mouse splenocytes, and HT-29 cells showed that PS-1145 (≤10 μM) had no significant cytotoxicity (cell viability >90%). At 15 μM, viability decreased by ~12% (HEK293T), ~10% (splenocytes), and ~15% (HT-29) [1,2,3]
- In Vivo Safety: In CIA mice (10 mg/kg/day, 14 days) and xenograft mice (20 mg/kg/day, 21 days), PS-1145 did not affect body weight (no difference vs. vehicle), organ weights (liver, kidney, spleen), or serum biochemical parameters (ALT, AST, BUN, creatinine). Histopathological examination of liver and kidney tissues revealed no signs of damage [2,3]

[1]. J Biol Chem . 2002 May 10;277(19):16639-47.

[2]. J Immunol . 2012 Mar 15;188(6):2545-55.

[3]. Cell Biol Int . 2015 Nov;39(11):1317-28.

N-(6-chloro-9H-pyrido[3,4-b]indol-8-yl)-3-pyridinecarboxamide is a member of beta-carbolines.

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Mechanism of Action: PS-1145 binds to the ATP-binding pocket of IKKβ, preventing its activation and subsequent phosphorylation of IκBα. Unphosphorylated IκBα remains bound to NF-κB, inhibiting NF-κB nuclear translocation and transcription of pro-inflammatory or pro-tumor genes [1]
- Therapeutic Potential:
- Inflammatory Diseases: PS-1145 alleviates CIA by suppressing NF-κB-driven cytokines, suggesting utility in autoimmune diseases (e.g., rheumatoid arthritis) [2]
- Cancer: PS-1145 inhibits colon cancer growth by inducing apoptosis via NF-κB inhibition, supporting its potential as an anti-tumor agent for NF-κB-overactivated cancers [3]
- Selectivity Advantage: Unlike non-selective IKK inhibitors, PS-1145 does not target IKKα (critical for skin development and immune homeostasis), reducing the risk of off-target toxicities [1]

C17H11CLN4O

322.75

322.062

C, 63.26; H, 3.44; Cl, 10.98; N, 17.36; O, 4.96

431898-65-6

PS-1145 dihydrochloride;1049743-58-9

9949093

Yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

511.0±50.0 °C at 760 mmHg

262.9±30.1 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.810

3.53

74.16

2

3

2

23

448

0

ClC1C([H])=C(C2=C(C=1[H])C1C([H])=C([H])N=C([H])C=1N2[H])N([H])C(C1=C([H])N=C([H])C([H])=C1[H])=O

JZRMBDHPALEPDM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H11ClN4O/c18-11-6-13-12-3-5-20-9-15(12)21-16(13)14(7-11)22-17(23)10-2-1-4-19-8-10/h1-9,21H,(H,22,23)

N-(6-chloro-9H-pyrido[3,4-b]indol-8-yl)pyridine-3-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (6.44 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。