EGFR (IC50 = 13 nM); HER2 (IC50 = 38 nM)

在HER2依赖性细胞系（BT474、SK-OV-3）中，马来酸帕罗替尼表现出很强的抑制作用；在 HER2 阴性细胞系 (MDA-MB-231) 中，效果较差。 BT474 和 SK-OV-3 细胞被吡咯替尼二马来酸盐抑制，IC50 值分别为 5.1 和 43 nM。在包括 KDR、c-Kit、PDGFRβ、c-Src 和 C-Met 在内的一组激酶中进行测试时，马来酸吡咯替尼表现出与 HKI-272 相同的高选择性（c-Src 的 IC50 为 790 nM，其他 >3000纳米）[1]。

马来酸吡咯替尼在大鼠、狗和裸鼠中的耐受生物利用度分别为 20.6%、43.5% 和 13.5%。马来酸吡咯替尼的理化性质与药物相似。它还显示出在人类受试者中相对较高的口服暴露量（口服；t1/2=15小时），其半衰期短于临床前动物物种，例如大鼠（iv；t1/2=1.56小时；ig ；t1/2= 2.52 h）和小鼠（iv；t1/2=4.42 h；ig；t1/2=3.38 h）[1]。

EGFR/HER2激酶抑制试验用于测定化合物的体外活性。通过将一系列浓度的受试化合物与特定酶和底物孵育，测量每种化合物的半最大抑制浓度IC50（受试化合物显示酶活性50%抑制的浓度）。EGFR激酶测定使用了一种人源重组蛋白，该蛋白在含有60 mM HEPES（pH 7.5）、5 mM MgCl2、5 mM MnCl2、3μM Na3VO4、1.25 M DTT和20μM ATP的混合物的缓冲溶液中，在25°C下与肽底物在不同浓度的测试化合物反应45分钟。HER2激酶测定试剂盒与蛋白质底物（Tyr 87）在包含60 mM HEES（pH 7.5通过时间分辨荧光法测定EGFR和HER2激酶活性[1]。

体外细胞增殖抑制测定的一般程序在合适浓度（例如5000个细胞/mL培养基）的癌症细胞（A431、SK-BR-3和NCI-N87）上进行。然后将细胞在二氧化碳（5%CO2）培养箱中孵育，直到它们达到85%的融合，随后，用新鲜的细胞培养基替换细胞培养基，并以一系列浓度（通常为6至7个浓度）添加测试化合物。然后将细胞放回培养箱中并连续培养。72小时后，通过磺基罗丹明B（SRB）法测定测试化合物抑制细胞增殖的活性。IC50值由试验化合物系列浓度的抑制率数据计算[1]。

本研究采用来自SLAC的BALB/Ca裸鼠（6-7周龄，雌性）进行体内疗效研究。裸鼠皮下注射BT-474人乳腺癌细胞或SK-OV-3卵巢癌细胞。待肿瘤生长至150-250 mm³后，将小鼠随机分组，每日给药一次。每周测量并记录2-3次肿瘤体积和小鼠体重。肿瘤体积（V）的计算公式为：V = 1/2 × a × b²（a：肿瘤长度，b：肿瘤宽度）。肿瘤生长抑制率（TGI）的计算公式为：TGI (%) = 100 − (VT − VT0) / (VC − VC0) × 100%；其中，VT0和VT分别为给药组起始日和结束日的肿瘤体积；VC0和VC分别为对照组起始日和结束日的肿瘤体积。肿瘤消退时，TGI 的计算公式为：TGI (%) = 100 − (VT − VT0) / VT0 ∗ 100。[1]

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体内药代动力学和人体药代动力学研究[1] 用于临床前研究的动物包括裸鼠、大鼠和犬。所有动物均按照机构《实验动物饲养和使用指南》进行处理。裸鼠（约20 g，9只雄性，9只雌性）购自上海中英赛普/博科实验动物有限公司（SCXK 2013-0016），Sprague Dawley (SD) 大鼠（200–250 g，3只雄性，3只雌性）购自上海斯莱克实验动物有限公司（SYXK 2003-0029），比格犬（9–13 kg，2只雄性，2只雌性）购自北京马歇尔生物技术有限公司（SCXK 2009-0002）。简而言之，为了测定化合物的生物利用度，分别采用静脉注射（iv）和灌胃（ig）两种给药途径对小鼠、大鼠和犬进行给药。裸鼠、SD大鼠和犬的血浆样本分别于静脉注射给药前及给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时采集；SD大鼠的血浆样本分别于给药前及给药后1.0、2.0、3.0、3.5、4、4.5、5、6、8、12和24小时采集；比格犬的血浆样本分别于灌胃给药前及给药后0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12和24小时采集。人体样本采集在泰达国际心血管医院进行，研究方案已获得该院伦理委员会批准。所有受试者均签署了书面知情同意书。本研究纳入10名健康受试者，旨在进行人体药代动力学、代谢物鉴定及清除研究。受试者禁食过夜后，单次口服240 mg马来酸吡咯替尼片。分别于给药前及给药后0.5、1、2、3、4、5、6、7、9、12、24、36、48、72和96小时采集血浆样本。分别于给药前及给药后0-4、4-8、8-12、12-24、24-36、36-48、48-72和72-96小时采集尿液样本。分别于给药前及给药后0-24、24-48、48-72和72-96小时采集粪便样本。所有样品均保存在−80 °C直至分析。I期剂量递增研究采用了五种剂量（80、160、240、320和400 mg）。所有PK和TK参数均使用Phoenix WinNonlin软件（5.2）通过非房室模型计算。

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动物：裸鼠（BALB/Ca-nude，6-7周龄，雌性）用于疗效研究；Sprague Dawley大鼠和比格犬用于药代动力学研究。所有动物均按照机构指南进行处理。[1]
体内疗效研究：将BT-474人乳腺癌细胞或SK-OV-3卵巢癌细胞皮下接种于裸鼠。待肿瘤体积达到150-250 mm³后，将小鼠随机分组，每日一次分别给予吡咯替尼（2.5、5、10 mg/kg）或溶剂对照。每周测量2-3次肿瘤体积（V = 1/2 × a × b²，其中a = 长度，b = 宽度）和体重。计算肿瘤生长抑制率（TGI）。 [1]体内药代动力学研究：将受试化合物通过静脉注射 (iv) 和胃内灌注 (ig) 途径给予小鼠、大鼠和犬，以测定其生物利用度。分别在给药前和给药后不同时间点采集血浆样本（静脉注射：0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24 小时；大鼠胃内灌注：1.0、2.0、3.0、3.5、4、4.5、5、6、8、12、24 小时；犬胃内灌注：0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24 小时）。[1]人体药代动力学研究：健康受试者单次口服 240 mg 马来酸吡咯替尼片。在给药后96小时内，按指定时间间隔采集血浆、尿液和粪便样本。一项剂量递增研究（80、160、240、320、400 mg）已在I期临床试验中开展。[1]
组织分布研究：大鼠以3 mg/kg的剂量接受吡咯替尼给药；在不同时间点采集组织样本进行浓度分析。[1]

[1]. Discovery and development of Pyrotinib: A novel irreversible EGFR/HER2 dual tyrosine kinase inhibitor with favorable safety profiles for the treatment of breast cancer. Eur J Pharm Sci. 2017 Jan 21. pii: S0928-0987(17)30043-X.

吡咯替尼二马来酸酯是吡咯替尼的二马来酸酯，吡咯替尼是一种口服生物利用度高的双重激酶抑制剂，可抑制表皮生长因子受体（EGFR，ErbB1 或 HER-1）和人表皮生长因子受体 2（ErbB2 或 HER-2），具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，吡咯替尼可与 EGFR 和 HER2 结合并抑制其活性，从而抑制肿瘤生长和血管生成，并使表达 EGFR/HER2 的肿瘤细胞发生消退。EGFR 和 HER2 是受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤细胞类型中表达上调，并在肿瘤细胞增殖和肿瘤血管生成中发挥重要作用。

C36H35CLN6O7

815.22

814.236

C, 61.84; H, 5.05; Cl, 5.07; N, 12.02; O, 16.02

1397922-61-0

Pyrotinib;1269662-73-8

72710866

Typically exists as light yellow to yellow solids at room temperature

262Ų

6

16

14

58

1080

1

CCOC1=C(C=C2C(=C(C=NC2=C1)C#N)NC3=CC(=C(C=C3)OCC4=CC=CC=N4)Cl)NC(=O)/C=C/[C@@H]5N(CCC5)C.C(=C\C(=O)O)\C(=O)O.C(=C\C(=O)O)\C(=O)O

ZUZJPRMSUMMELD-ZLWATVBPSA-N

InChI=1S/C32H31ClN6O3.C4H4O4/c1-3-41-30-17-27-25(16-28(30)38-31(40)12-10-24-8-6-14-39(24)2)32(21(18-34)19-36-27)37-22-9-11-29(26(33)15-22)42-20-23-7-4-5-13-35-235-3(6)1-2-4(7)8/h4-5,7,9-13,15-17,19,24H,3,6,8,14,20H2,1-2H3,(H,36,37)(H,38,40)1-2H,(H,5,6)(H,7,8)/b12-10+2-1-/t24-/m1./s1

(R,E)-N-(4-((3-chloro-4-(pyridin-2-ylmethoxy)phenyl)amino)-3-cyano-7-ethoxyquinolin-6-yl)-3-(1-methylpyrrolidin-2-yl)acrylamide maleate

SHR-1258; SHR1258; SHR-1258 dimaleate; Pyrotinib Maleate; 1397922-61-0; 85KUE857XM; 2-Propenamide, N-(4-((3-chloro-4-(2-pyridinylmethoxy)phenyl)amino)-3-cyano-7-ethoxy-6-quinolinyl)-3-((2R)-1-methyl-2-pyrrolidinyl)-, (2E)-, (2Z)-2-butenedioate (1:2); (Z)-but-2-enedioic acid;(E)-N-[4-[3-chloro-4-(pyridin-2-ylmethoxy)anilino]-3-cyano-7-ethoxyquinolin-6-yl]-3-[(2R)-1-methylpyrrolidin-2-yl]prop-2-enamide; UNII-85KUE857XM; SHR 1258.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ≥ 106 mg/mL (~130.03 mM)
DMSO : ~100 mg/mL (~122.67 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.07 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.07 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。