| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RA190 covalently binds to cysteine 88 of the ubiquitin receptor RPN13 in 19S regulatory granules, inhibits proteasome action, and induces the fast accumulation of polyubiquitinated proteins. Multiple myeloma (MM) lines, especially those resistant to bortezomib, are sensitive to RA190 through endoplasmic reticulum stress-associated apoptosis. RA190 stabilizes the target of the human papillomavirus (HPV) E6 oncoprotein and preferentially kills HPV-transformed cells [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
RA190 与 19S 调节颗粒中泛素受体 RPN13 的半胱氨酸 88 共价结合，抑制蛋白酶体作用，并诱导多泛素化蛋白的快速积累。多发性骨髓瘤 (MM) 系，尤其是对硼替佐米耐药的系，通过内质网应激相关的细胞凋亡对 RA190 敏感。 RA190 稳定人乳头瘤病毒 (HPV) E6 癌蛋白的靶点，并优先杀死 HPV 转化的细胞 [1]。
RA190 对多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系 (IC50 ~0.1 μM) 和人乳头瘤病毒 (HPV) 转化的宫颈癌细胞系 (HeLa, CaSki, SiHa; IC50 ~0.3 μM) 表现出强效的抗增殖活性，但对 HPV 阴性的宫颈癌细胞系效果较差 (HT3 和 C33A 的 IC50 >5 μM)。[1] RA190 对硼替佐米耐药的 MM 细胞系 (ANBL6-V10R, RPMI-8226-V10R) 及其亲本细胞系具有同等效力。[1] 用 RA190 处理 HeLa 和 CaSki 细胞会导致高分子量 K48 连接的多聚泛素化蛋白快速、剂量依赖性地积累，其发生速度和积累谱与硼替佐米不同。[1] RA190 不抑制蛋白酶体 20S 核心颗粒 (CP) 的胰凝乳蛋白酶样、胰蛋白酶样或 PGPH (肽酰谷氨酰肽水解) 活性。[1] 在 Ub-AMC 切割实验中，RA190 对纯化的重组 UCH37 或 19S 调节颗粒 (RP) 的去泛素酶活性影响极小。[1] 在 HeLa 细胞中使用四聚泛素融合荧光素酶 (4UbFL) 报告基因检测，RA190 能稳定报告蛋白，证实其在活细胞中抑制蛋白酶体功能。[1] RA190 处理会上调内质网 (ER) 应激标志物：在 MM.1S 和 HeLa 细胞中，ATF-4 蛋白水平升高，CHOP-10 和剪接型 XBP1 (XBP1s) 的 mRNA 水平升高。Bax 蛋白水平也升高。[1] 在 HPV 阳性的宫颈癌细胞 (HeLa, CaSki, SiHa) 中，RA190 处理能以时间依赖的方式稳定 HPV E6 癌蛋白的靶点 p53、p21、Puma、Bax、Bak 和 hDLG-1。[1] RA190 在 MM 和 HeLa 细胞中诱导细胞凋亡，证据包括 Annexin V 染色、caspase-3/7 的激活以及 PARP 的切割。[1] RA190 处理可诱导 HeLa 细胞表面展示 HSP90，这是一种与免疫原性细胞死亡相关的现象。[1] 消除 RA190 迈克尔受体特性的化学修饰 (例如 RA190ME, RA190R) 会显著降低或消除其细胞杀伤活性和诱导多聚泛素积累的能力。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
RA190 抑制皮肤和肌肉中蛋白酶体的活性，并分布到血浆和主要器官（不包括大脑）。当给予 RA190 时，多发性骨髓瘤和卵巢癌异种移植物的生长速度要慢得多，口服 RA190 治疗可减缓 HPV16+ 同基因小鼠中肿瘤的生长，而不会改变 HPV 特异性 CD8+ T 细胞的自发反应 [1]。
腹腔注射 (i.p.) 或口服 (p.o.) RA190 可抑制小鼠皮肤和肌肉中的蛋白酶体功能，这通过基因枪或电穿孔递送的 4UbFL 报告基因的稳定性得到证实。[1] 每天腹腔注射 20 mg/kg RA190，连续 7 天，能强效抑制 NOG 小鼠体内 NCI-H929 多发性骨髓瘤异种移植瘤的生长。[1] 每天腹腔注射 10 mg/kg RA190，连续 14 天，能显著抑制裸鼠体内 ES2 卵巢癌异种移植瘤的生长。[1] 口服 RA190 (40 mg/kg，每三天一次) 能显著抑制 C57BL/6 小鼠体内同系 TC-1 (HPV16+) 肿瘤的生长，且不影响自发的 E7 特异性 CD8+ T 细胞反应或动物体重增加。[1] 来自 RA190 处理的 TC-1 荷瘤小鼠的肿瘤裂解物显示多聚泛素化蛋白水平急剧升高。[1] 局部涂抹 4% 的 RA190 Cremophor-EL 制剂能稳定小鼠皮肤中的 4UbFL 报告蛋白。[1] |
| 酶活实验 |
20S 蛋白酶体催化活性实验用于测量胰凝乳蛋白酶样、胰蛋白酶样和 PGPH 活性。将细胞裂解物或纯化的 20S 蛋白酶体与特定的荧光底物肽 (例如，用于胰凝乳蛋白酶样活性的 Suc-LLVY-AMC) 在反应缓冲液中孵育。通过荧光分光光度法监测游离 AMC 的释放。在此实验中测试了 RA190，结果显示其对这三种催化活性均无抑制作用。[1]
去泛素酶活性实验用于评估 19S 调节颗粒 (RP) 或重组 UCH37 的活性。将纯化的 19S RP 或重组 UCH37 (有或无 RPN13) 与泛素-AMC (Ub-AMC) 底物在适当的 assay 缓冲液中孵育。通过荧光测量指示去泛素酶活性的游离 AMC 的释放。RA190 对此活性影响极小。[1] |
| 细胞实验 |
使用 XTT 实验测定细胞活力/抗增殖活性。将癌细胞系接种于 96 孔板中，用梯度浓度的化合物处理 48 小时。然后加入 XTT 试剂，孵育后测量吸光度，以确定相对于未处理对照组的活细胞百分比。根据剂量反应曲线计算 IC50 值。[1]
对于多聚泛素化蛋白积累实验，用化合物处理细胞指定时间 (例如 4 或 12 小时)。然后裂解细胞，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，转移至 PVDF 膜，并用抗 K48 连接泛素抗体进行检测。使用 β-tubulin 或 actin 免疫印迹作为上样对照。[1] 使用四聚泛素融合荧光素酶 (4UbFL) 报告基因实验评估活细胞中的蛋白酶体功能。将 HeLa 细胞瞬时转染 4UbFL 或未融合的萤火虫荧光素酶 (FL) 表达质粒。48 小时后，用化合物处理细胞 4 小时。测量荧光素酶活性，并计算 4UbFL 转染细胞与 FL 转染细胞的生物发光比率，以指示蛋白酶体抑制情况。[1] 通过流式细胞术使用 Annexin V-PE 染色试剂盒评估细胞凋亡，操作按照制造商说明书进行。用化合物处理细胞，收集细胞，用 Annexin V-PE 和 7-AAD (或类似的活力染料) 染色，然后进行流式细胞术分析。[1] 通过流式细胞术使用针对活性 caspase-3 的特异性抗体测量 Caspase-3/7 活性。处理后的细胞被固定、透化，用该抗体染色，然后进行流式细胞术分析。[1] 通过蛋白质印迹分析凋亡标志物 (如 PARP 切割) 和 ER 应激/UPR 标志物 (如 ATF-4, Bax)。处理细胞后裂解，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，转膜，并用特异性抗体进行检测。[1] 通过流式细胞术分析细胞表面 HSP90 的展示。处理后的细胞被收集，在不透化的条件下用抗 HSP90 抗体染色，然后使用 PE 标记的二抗，并进行流式细胞术分析。[1] 使用定量 PCR (q-PCR) 测量 CHOP-10 和 XBP1s 的 mRNA 水平。从处理过的细胞中提取总 RNA，进行反转录，并使用特异性引物和探针进行 q-PCR。mRNA 水平以 GAPDH 为内参进行标准化，并表示为相对于对照的倍数变化。[1] |
| 动物实验 |
在药代动力学研究中，小鼠单次腹腔注射（10 mg/kg）或口服（20 mg/kg）RA190，该药物配制于20% (w/v) β-羟丙基环糊精水溶液中。给药后不同时间点通过眼眶后静脉丛取血或心脏穿刺采集血样。分离血浆，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定RA190浓度。在组织分布研究中，于腹腔注射给药后48小时采集器官，并分析RA190含量。[1]
为了评估体内蛋白酶体抑制情况，小鼠接受4UbFL报告质粒，该质粒可通过电穿孔（106 V，20 ms，8个脉冲）肌内注射或氦气驱动基因枪皮内注射导入。一天后，小鼠分别接受以下治疗：RA190（40 mg/kg，腹腔注射或口服）、硼替佐米（1.5 mg/kg，腹腔注射）、赋形剂或局部涂抹4% RA190/Cremophor-EL溶液。在治疗后特定时间点注射荧光素后，通过IVIS成像技术测量生物发光。[1] 为评估多发性骨髓瘤异种移植瘤的疗效，将NCI-H929-GFP-Luc细胞静脉注射到NOG小鼠体内。肿瘤建立后（4周），小鼠接受RA190（20 mg/kg/天，腹腔注射）或赋形剂治疗，持续7天。在治疗前后，通过生物发光成像监测肿瘤生长情况。[1] 为评估卵巢癌异种移植瘤的疗效，将ES2-荧光素酶细胞腹腔注射到裸鼠体内。三天后，小鼠接受RA190（10 mg/kg/天，腹腔注射）或载体治疗，持续14天。每周通过生物发光成像评估肿瘤负荷。[1] 为了评估同源HPV阳性肿瘤的疗效，将TC-1细胞皮下接种到C57BL/6小鼠体内。当肿瘤可触及时，小鼠接受RA190（40 mg/kg，每三天一次）或载体口服治疗，持续14天。定期测量肿瘤体积。在实验终点，称量肿瘤重量，并收集脾细胞，通过肽刺激后细胞内细胞因子（IFN-γ）染色评估E7特异性CD8+ T细胞反应。 [1] 为进行毒性评估，将无肿瘤小鼠每隔三天口服40 mg/kg的RA190或赋形剂，共三次，并在第12天处死。采集血液进行血液学和临床化学分析。取主要器官（肺、肾、脾、肝）进行组织病理学检查。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠单次腹腔注射10 mg/kg RA190后，血浆峰浓度（Cmax）在2小时（Tmax）达到。分布半衰期（T1/2,α）为4.2小时，末端半衰期（T1/2,β）为25.5小时。[1] 单次口服20 mg/kg RA190后，血浆浓度在1小时内迅速升高，末端半衰期（T1/2,β）为2.6小时。[1] 根据AUC值，RA190的口服生物利用度相对于腹腔注射约为7.2%。 [1]
单次腹腔注射10 mg/kg后48小时，在肾脏（0.61 µg/g）、肝脏（0.57 µg/g）、肺脏（0.66 µg/g）和脾脏（0.59 µg/g）中检测到了RA190，但在脑组织中未检测到。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
小鼠每隔三天口服 40 mg/kg RA190，连续三次，与载体对照组相比，除甘油三酯水平略有降低外，血液学参数（全血细胞计数）或临床化学指标均无显著差异。[1]
对 RA190 治疗组小鼠的肺、肾、脾和肝脏进行组织病理学检查，未发现与对照组相比有明显异常。[1] 在 TC-1 荷瘤小鼠中，RA190 治疗与载体对照组相比，对动物体重增加无显著影响。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RA190 是一种双苄基哌啶酮衍生物，设计为迈克尔受体。其 α,β-不饱和酮（烯酮）部分是发挥活性所需的最小药效团。[1]
其作用机制涉及与蛋白酶体 19S 调节颗粒中的泛素受体 RPN13 的 C88 位点共价结合。这会抑制蛋白酶体催化核心上游的功能，导致多聚泛素化蛋白的快速积累、内质网应激、未折叠蛋白反应 (UPR) 和细胞凋亡。[1] RA190 与硼替佐米在体外杀伤 HeLa 细胞方面显示出协同作用，提示二者具有不同的靶点，并具有联合治疗的潜力。[1] 该药物显示出治疗多发性骨髓瘤（包括硼替佐米耐药型）、HPV 相关癌症（例如宫颈癌）和卵巢癌的潜力。 [1] 与靶向20S核心颗粒催化β亚基的硼替佐米和卡非佐米不同，RA190靶向调节亚基RPN13，提供了一种不同的机制，可能克服某些耐药性并减少脱靶副作用，例如神经病变和血小板减少症。[1] RPN13在卵巢癌和结肠癌中经常扩增，提示存在一种癌症特异性弱点，RA190可以利用这种弱点。[1] |
| 分子式 |
C28H23CL5N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
596.7594
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| 精确质量 |
596.017
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| CAS号 |
1617495-03-0
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| 相关CAS号 |
1617572-02-7;1617495-03-0 (HCl);
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| PubChem CID |
126843229
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| tPSA |
63.4
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
809
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
ClC1=C(C([H])=C([H])C(=C1[H])/C(/[H])=C1\C(/C(=C(/[H])\C2C([H])=C([H])C(=C(C=2[H])Cl)Cl)/C([H])([H])N(C([C@]([H])(C([H])([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])N([H])[H])=O)C\1([H])[H])=O)Cl.Cl[H]
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| InChi Key |
UMWXLEVUBFNYIK-VCCJZKHWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H22Cl4N2O2.ClH/c29-22-8-6-18(12-24(22)31)10-20-15-34(28(36)26(33)14-17-4-2-1-3-5-17)16-21(27(20)35)11-19-7-9-23(30)25(32)13-19;/h1-13,26H,14-16,33H2;1H/b20-10-,21-11-;/t26-;/m0./s1
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| 化学名 |
(3Z,5Z)-1-[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]-3,5-bis[(3,4-dichlorophenyl)methylidene]piperidin-4-one;hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~167.57 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.38 mg/mL (3.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 23.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再将50 μL Tween-80 +加入到上述溶液中，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6757 mL | 8.3786 mL | 16.7572 mL | |
| 5 mM | 0.3351 mL | 1.6757 mL | 3.3514 mL | |
| 10 mM | 0.1676 mL | 0.8379 mL | 1.6757 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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