PLK1 (IC50 = 9 nM); PDGFR (IC50 = 18 nM); Bcr-Abl (IC50 = 32 nM); Flt1 (IC50 = 42 nM); Src (IC50 = 155 nM)

体外活性：Rigosertib 是 PLK1 的非 ATP 竞争性抑制剂，IC50 为 9 nM。 Rigosertib 还表现出对 PLK2、PDGFR、Flt1、BCR-ABL、Fyn、Src 和 CDK1 的抑制作用，IC50 为 18-260 nM。 Rigosertib 对 94 种不同的肿瘤细胞系显示出细胞杀伤活性，IC50 为 50-250 nM，包括 BT27、MCF-7、DU145、PC3、U87、A549、H187、RF1、HCT15、SW480 和 KB 细胞。而在正常细胞（例如 HFL、PrEC、HMEC 和 HUVEC）中，Rigosertib 的作用很小或没有作用，除非其浓度大于 5-10 μM。在 HeLa 细胞中，Rigosertib (100-250 nM) 会诱导纺锤体异常和细胞凋亡。 Rigosertib 还抑制多种耐药肿瘤细胞系，包括 MES-SA、MES-SA/DX5a、CEM 和 CEM/C2a，IC50 为 50-100 nM。在 DU145 细胞中，Rigosertib (0.25-5 μM) 可阻断 G2/M 期的细胞周期进展，导致含有 subG1 DNA 含量的细胞积累，并激活细胞凋亡途径。在 A549 细胞中，Rigosertib (50 nM-0.5 μM) 会导致活力丧失和 caspase 3/7 激活。在最近的一项研究中，Rigosertib 可诱导慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞凋亡，但对 T 细胞或正常 B 细胞没有毒性。 Rigosertib 还消除滤泡树突状细胞对 CLL 细胞的促生存作用，并减少 SDF-1 诱导的白血病细胞迁移。激酶测定：将重组 PLK1 (10 ng) 与不同浓度的 Rigosertib 在 15 µL 反应混合物（50 mM HEPES、10 mM MgCl2、1 mM EDTA、2 mM 二硫苏糖醇、0.01% NP-40 [pH 7.5]）中孵育，室温下 30 分钟。激酶反应在 30 °C 下进行 20 分钟，体积为 20 µL（15 µL 酶 + 抑制剂、2 µL 1 mM ATP）、2 µL γ32P-ATP (40 µCi) 和 1 µL 重组 Cdc25C（100 ng）或酪蛋白（1 μg）底物。在 20 µL 2× Laemmli 缓冲液中煮沸 2 分钟终止反应。磷酸化底物通过 18% SDS-PAGE 分离。将凝胶干燥并暴露于 X 射线胶片 3-10 分钟。细胞测定：细胞（许多肿瘤细胞系，包括 BT20、MCF-7、DU145、PC3、U87、A549、H187、RF1、HCT15、HeLa 和 Raji 细胞）在补充有 10% 的 DMEM 或 RPMI 中生长胎牛血清和1单位/mL青霉素-链霉素溶液。将肿瘤细胞以 1 × 105 个细胞/mL/孔的密度接种到六孔培养皿中，24 小时后添加不同浓度的 Rigosertib。处理 96 小时后，从重复孔中测定细胞计数。活细胞总数通过台盼蓝排除法测定。

在 Bel-7402、MCF-7 和 MIA-PaCa 细胞的小鼠异种移植模型中，Rigosertib (250 mg/kg) 显着抑制肿瘤生长。 Rigosertib (200 mg/kg) 在 BT20 细胞的小鼠异种移植模型中显示出对肿瘤生长的抑制作用。

将重组 PLK1 (10 ng) 与不同浓度的 rigosertib 在 15 µL 反应混合物（50 mM HEPES、10 mM MgCl₂、1 mM EDTA、2 mM 二硫苏糖醇）中在室温下孵育 30 分钟，0.01% NP-40 [pH 7.5]）。 20 µL（15 µL 酶 + 抑制剂、2 µL 1 mM ATP）、2 µL γ³²P-ATP (40 µCi) 和 1 µL 重组 Cdc25C (100 ng) 或酪蛋白 (1 μg）底物用于激酶反应，在 30°C 下进行 20 分钟。在 20 µL 2× Laemmli 缓冲液中煮沸 2 分钟，结束反应。 18% SDS-PAGE 用于分离磷酸化底物。干燥后，将凝胶暴露在 X 射线胶片下三到十分钟。

一天后，将不同浓度的 Rigosertib 添加到含有 1×10⁵ 细胞/mL/孔的已铺板肿瘤细胞的六孔培养皿中。处理96小时后，从重复的孔中获得细胞计数。通过使用台盼蓝排除法，可以找到活细胞的总数。

Mouse (female athymic, NCR-nu/nu) xenograft models of Bel-7402, MCF-7, and MIA-PaCa cells
250 mg/kg
Intraperitonially

[1]. Cancer Cell . 2005 Mar;7(3):275-86.

[2]. J Med Chem . 2011 Sep 22;54(18):6254-76.

[3]. Clin Cancer Res . 2012 Apr 1;18(7):1979-91.

C21H24NNAO8S

473.47

451.13

C, 55.86; H, 5.58; N, 3.10; O, 28.35; S, 7.10

1225497-78-8

Rigosertib sodium;592542-60-4;Rigosertib;592542-59-1

white solid powder

COC1=C(C=C(C=C1)CS(=O)(=O)/C=C/C2=C(C=C(C=C2OC)OC)OC)NCC(=O)[O-].[Na+]

VLQLUZFVFXYXQE-USRGLUTNSA-M

InChI=1S/C21H25NO8S.Na/c1-27-15-10-19(29-3)16(20(11-15)30-4)7-8-31(25,26)13-14-5-6-18(28-2)17(9-14)22-12-21(23)24;/h5-11,22H,12-13H2,1-4H3,(H,23,24);/q;+1/p-1/b8-7+;

sodium;2-[2-methoxy-5-[[(E)-2-(2,4,6-trimethoxyphenyl)ethenyl]sulfonylmethyl]anilino]acetate

ON-01910; Rigosertib sodium; ON01910; ON 01910; brand name: Estybon

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Saline: 30 mg/mL

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。