JAK2 (IC50 = 2.8 nM); JAK1 (IC50 = 3.3 nM); Tyk2 (IC50 = 19 nM); JAK3 (IC50 = 428 nM)

Ruxolitinib 磷酸盐 (INCB018424) 以有效且特异的方式抑制 JAK2V617F 介导的信号传导和增殖。 Ruxolitinib 磷酸盐的 EC50 值为 186 nM，这意味着它抑制 HEL 细胞生长。 Ruxolitinib 磷酸盐可显着抑制原发性 MPN 患者样本中造血祖细胞的增殖并增加 Ba/F3-EpoR-JAK2V617F 细胞凋亡 [1]。

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INCB018424抑制白细胞介素-6信号传导（50%抑制浓度[IC50]=281nM）和JAK2V617F+Ba/F3细胞的增殖（IC50=127nM）。在原代培养中，INCB018424优先抑制JAK2V617F+真性红细胞增多症患者（IC50=67nM）与健康供体（IC50>400nM）的红系祖细胞集落形成。[1]

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此外，在用JAK1抑制剂ruxolitinib治疗后，具有活性JAK/STAT信号传导的HOXA9+患者来源的异种移植物（PDX）样本中，PIM1 RNA和蛋白质水平迅速下调（图6C）。这为JAK/STAT信号下游PIM1调控的功能信号网络提供了进一步的证据。利用这一观察结果，我们接下来试图确定PIM1和JAK1的双重抑制是否对JAK/STAT突变T-ALL样本有益。在这里，我们观察到在离体细胞培养中用JAK激酶抑制剂（ruxolitinib）与PIM1抑制剂（AZD1208）联合治疗JAK3突变T-ALL样品时出现了协同反应[3]。

在注射 JAK2V617F 表达细胞的小鼠中，磷酸卢福替尼（180 mg/kg，口服）可减轻肿瘤负荷，且不会导致贫血或淋巴细胞减少症 [1]。

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在JAK2V617F+MPN的小鼠模型中，口服INCB018424显著降低了脾肿大和循环中炎性细胞因子的水平，并优先消除了肿瘤细胞，从而显著延长了存活时间，而没有骨髓抑制或免疫抑制作用。初步临床结果支持这些临床前数据，并将INCB018424确立为治疗MPNs的有前景的口服药物。[1]

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JAK1/2抑制剂鲁索利替尼可降低CSF3RT618I小鼠的白细胞计数并减少脾肿大[2]
我们之前已经证明，激活CSF3R突变会导致通过JAK激酶的优先下游信号传导，一名携带JAK激活CSF3RT618I突变的CNL患者在服用JAK1/2抑制剂ruxolitinib后表现出明显的临床改善。1为了确定CSF3RT68I小鼠中观察到的粒细胞扩增是否依赖于JAK激酶途径，我们在第二组CSF3RT617I小鼠中测试了ruxolitnib的效果。移植后第12天开始口服ruxolitinib（90mg/kg 2×/d）或赋形剂，此时小鼠已经出现白细胞增多。鲁索利替尼治疗导致白细胞计数迅速减少，脾脏重量减少（图2A-C）。与改善骨髓纤维化疲劳和早期饱腹感等体质症状的能力一致，12,13鲁索利替尼治疗的小鼠与赋形剂治疗的小鼠相比体重增加（图2D）。这表明CSF3RT618I小鼠模型中粒细胞的病理扩张对JAK抑制敏感，并值得进一步研究JAK抑制剂在携带CSF3RT617I突变的CNL患者中的治疗应用。

生化测定[1]
用N-末端表位标签通过PCR克隆人JAK1（837-1142）、JAK2（828-1132）、JAK3（781-1124）和Tyk2（873-1187）的激酶结构域。使用Sf21细胞和杆状病毒载体表达重组蛋白，并用亲和层析纯化。JAK激酶测定使用肽底物（-EQUEDEPEGDYFEWLE）的均匀时间分辨荧光测定。用测试化合物或对照、JAK酶、500nM肽、三磷酸腺苷（ATP；1mM）和2.0%二甲基亚砜（DMSO）进行每种酶反应1小时。50%抑制浓度（IC50）计算为抑制50%荧光信号所需的化合物浓度。CHK2和c-MET酶的生化测定使用标准条件（Michaelis常数[Km]ATP）进行，具有来自每种蛋白质和合成肽底物的重组表达的催化结构域 使用标准条件（CEREP；www.CEREP.com）使用200nM INCB018424进行额外的激酶测定（Abl、Akt1、AurA、AurB、CDC2、CDK2、CDK4、CHK2、c-kit、c-Met、EGFR、EphB4、ERK1、ERK2、FLT-1、HER2、IGF1R、IKKα、IKKβ、JAK2、JAK3、JNK1、Lck、MEK1、p38α、p70S6K、PKA、PKCα、Src和ZAP70）。显著抑制被定义为与对照值相比大于或等于30%（重复测定的平均值）。

细胞增殖测定[1]
将细胞接种在2000/孔的白色底部96孔板上，用来自DMSO储备的化合物（0.2%的最终DMSO浓度）处理，并在37°C下用5%CO2孵育48小时。通过使用Cell Titer Glo萤光素酶试剂的细胞ATP测定或活细胞计数来测量存活率。将值转换为相对于车辆控制的抑制百分比，并根据使用PRISM GraphPad的数据的非线性回归分析拟合IC50曲线<小时> 细胞凋亡[1]

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膜联蛋白V染色。
将细胞处理20至24小时，并用膜联蛋白V和碘化丙啶染色，分别用于分析早期凋亡和死亡细胞。使用FACSCaliber流式细胞仪进行分析。 线粒体膜电位。将细胞处理24小时，然后与2μM染料JC-1一起孵育。使用488nm激发和530nm和585nm发射滤光片通过流式细胞术进行分析。JC-1在线粒体中表现出电位依赖性积累，其发射在红色光谱（590nM）中。从红色（590nM）到绿色（530nM）的荧光转移表明，由于线粒体膜电位的丧失，染料重新分布到细胞质中，线粒体膜电位是细胞凋亡的早期标志物<小时> 菌落形成测定[1]

在骨髓增生性肿瘤小鼠模型中用 INCB018424 进行体内治疗 [1]
小鼠喂食标准啮齿动物饲料，并可自由饮水。将 Ba/F3-JAK2V617F 细胞（每只小鼠 10⁵ 个）静脉注射到 6 至 8 周龄的雌性 BALB/c 小鼠体内。每日监测小鼠存活情况，濒死小鼠被实施安乐死，并在死亡时判定为死亡。在细胞接种后 24 小时内开始用载体（5% 二甲基乙酰胺，0.5% 甲基纤维素）或 INCB018424 进行治疗，每日两次，通过灌胃给药。使用 Bayer Advia120 分析仪测量血液学参数，并使用 Dunnett 检验确定统计学意义。

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组织学和形态计量学分析[1]
脾脏组织样本用 10% 中性缓冲福尔马林固定，经梯度酒精和透明剂处理，浸润并包埋于石蜡中，切片厚度为 5 μm，并用苏木精-伊红染色。为了量化INCB018424对脾脏白髓的影响，我们设计了一种基于点计数的简单形态计量学方法。将脾脏图像以2倍放大倍率与标准化网格叠加。通过统计覆盖整个脾脏和白髓的网格交点数量进行点计数。将各组（即未处理组（N = 3）、载体处理组（N = 6）和INCB018424处理组（N = 6））的白髓点计数相加，并计算平均值。利用各组脾脏的平均重量以及整个脾脏和白髓的相对平均点计数，计算白髓的近似平均质量。使用配备尼康20×/0.75 Plan Apo物镜和尼康DXM1200数码相机的尼康Eclipse E800显微镜采集图像。图像处理在戴尔电脑上进行，使用尼康ACT/1软件和Adobe Photoshop 7.0软件。

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PDX样本的体内和体外处理[3]
将PDX样本通过尾静脉注射移植到8周龄的NSG小鼠体内。通过对血液样本进行人CD45染色来监测人白血病细胞的扩增。从脾脏中分离出单个细胞，处死时脾脏中含有>85%的人CD45+细胞。将脾细胞接种于96孔板（5 × 10⁵个细胞/孔），并用载体（DMSO）或抑制剂孵育。48小时后使用ATP-Lite评估细胞活力。使用CompuSyn计算组合指数。对于体内治疗研究，将XC65细胞用慢病毒pCH-SFFV-eGFP-P2A-fLuc进行过夜转导。随后使用S3分选仪对GFP阳性细胞进行分选，并重新移植回受体NSG小鼠体内。确认XC65小鼠GFP阳性细胞比例大于95%后，从脾脏中分离出白血病细胞，并将其重新注射到更多NSG小鼠体内，进行为期7天的急性体内治疗。鲁索替尼溶于0.5%甲基纤维素溶液，AZD1208溶于50% PEG400/0.5%甲基纤维素溶液，两者均采用灌胃法给药。

溶于 5% 二甲基乙酰胺、0.5% 甲基纤维素；180 mg/kg/天；灌胃

JAK2V617F 驱动的小鼠模型

吸收、分布和排泄
口服后，鲁索替尼吸收迅速，给药后1小时内即可达到血药峰浓度。单次给药剂量在5 mg至200 mg范围内，平均最大血浆浓度（Cmax）呈比例增加。Cmax范围为205 nM至7100 nM，AUC范围为862 nM·h至30700 nM·h。口服给药后，达峰时间（Tmax）为1至2小时。口服生物利用度至少为95%。
单次口服放射性标记的鲁索替尼后，药物主要通过代谢消除。约74%的总剂量经尿液排出，22%经粪便排出，主要以鲁索替尼的羟基和氧代代谢物的形式排出。
未代谢的母体药物占排泄总放射性的不到1%。
在骨髓纤维化患者中，稳态时的平均分布容积（变异系数百分比）为72 L（29%），在真性红细胞增多症患者中为75 L（23%）。尚不清楚鲁索替尼是否能穿过血脑屏障。
在骨髓纤维化女性患者中，鲁索替尼的清除率（变异系数百分比）为17.7 L/h，在男性患者中为22.1 L/h。在真性红细胞增多症患者中，药物清除率为12.7 L/h（42%），在急性移植物抗宿主病患者中为11.9 L/h（43%）。
口服后，鲁索替尼的吸收率约为95%，平均全身生物利用度估计约为80%。口服鲁索替尼后，血浆峰浓度在 1-2 小时内达到。……健康受试者单次口服放射性标记的鲁索替尼后，药物主要通过代谢清除，分别有 74% 和 22% 的放射性物质经尿液和粪便排出。未代谢的药物占总排泄放射性的不到 1%。

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代谢/代谢物
口服的鲁索替尼超过 99% 通过 CYP3A4 代谢，CYP2C9 的代谢较少。人血浆中的主要循环代谢物是 2-羟基化生成的 M18，以及 3-羟基化生成的 M16 和 M27（立体异构体）。其他已鉴定的代谢物包括 M9 和 M49，它们分别由羟基化和酮体形成。并非所有代谢物的结构都已完全表征，据推测，许多代谢物以立体异构体的形式存在。鲁索替尼的代谢物对JAK1和JAK2的抑制活性低于其母体药物。细胞色素P-450 (CYP) 同工酶3A4是负责鲁索替尼代谢的主要酶。在健康个体的血浆中鉴定出两种主要的活性代谢物；所有活性代谢物贡献了鲁索替尼总体药效活性的18%。
鲁索替尼主要通过细胞色素P-450 (CYP) 同工酶3A4代谢。

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生物半衰期
鲁索替尼的平均消除半衰期约为3小时，其代谢物的平均半衰期约为5.8小时。
单次口服鲁索替尼后，其平均半衰期约为3小时，鲁索替尼及其代谢物的平均半衰期约为5.8小时。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无鲁索替尼在哺乳期临床应用的信息。由于鲁索替尼与血浆蛋白的结合率高达97%，因此其在乳汁中的含量可能很低。生产商建议，在鲁索替尼治疗期间以及口服片剂末次给药后2周内、外用乳膏末次给药后4周内应停止哺乳。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

[1]. Preclinical characterization of the selective JAK1/2 inhibitor INCB018424: therapeutic implications for the treatment of myeloproliferative neoplasms. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.

[2]. The CSF3R T618I mutation causes a lethal neutrophilic neoplasia in mice that is responsive to therapeutic JAK inhibition. Blood. 2013 Nov 21;122(22):3628-31.

[3]. HOXA9 Cooperates with Activated JAK/STAT Signaling to Drive Leukemia Development. Cancer Discov. 2018 May;8(5):616-631.

鲁索替尼磷酸盐是鲁索替尼与一当量磷酸反应制得的磷酸盐。用于治疗中危或高危骨髓纤维化患者，包括原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症后骨髓纤维化和原发性血小板增多症后骨髓纤维化。它是一种抗肿瘤药物，也是一种EC 2.7.10.2（非特异性蛋白酪氨酸激酶）抑制剂。其主要成分为鲁索替尼。
鲁索替尼磷酸盐是鲁索替尼的磷酸盐形式，鲁索替尼是一种口服生物利用度高的Janus激酶（JAK）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤和免疫调节活性。鲁索替尼特异性结合并抑制JAK1和JAK2蛋白酪氨酸激酶，从而可能减轻炎症并抑制细胞增殖。 JAK-STAT（信号转导和转录激活因子）通路在许多细胞因子和生长因子的信号传导中发挥关键作用，并参与细胞增殖、生长、造血和免疫反应；JAK激酶在炎症性疾病、骨髓增生性疾病和各种恶性肿瘤中可能上调。
另见：鲁索替尼（含有活性成分）。

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药物适应症
Opzelura适用于治疗12岁及以上成人和青少年面部受累的非节段型白癜风。
骨髓纤维化（MF）Jakavi适用于治疗原发性骨髓纤维化（也称为慢性特发性骨髓纤维化）、真性红细胞增多症后骨髓纤维化或原发性血小板增多症后骨髓纤维化成人患者的疾病相关脾肿大或症状。真性红细胞增多症 (PV)：Jakavi 适用于治疗对羟基脲耐药或不耐受的成人真性红细胞增多症患者。移植物抗宿主病 (GvHD)：Jakavi 适用于治疗 12 岁及以上对皮质类固醇或其他全身疗法反应不足的急性移植物抗宿主病或慢性移植物抗宿主病患者（参见 5.1 节）。
治疗特应性皮炎
治疗慢性移植物抗宿主病 (cGvHD)
治疗急性移植物抗宿主病 (aGvHD)
治疗白癜风。

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JAK2V617F 突变导致造血细胞中 JAK2 组成性激活，在小鼠中重现骨髓增生性肿瘤 (MPN) 表型，表明 JAK2 抑制是一种潜在的治疗策略。尽管大多数真性红细胞增多症患者携带JAK2V617F突变，但约有一半原发性血小板增多症或原发性骨髓纤维化患者不携带该突变，这提示MPN中可能存在其他JAK-STAT信号通路组成型激活的机制。大多数原发性骨髓纤维化患者体内JAK依赖性促炎细胞因子（例如白细胞介素-6）水平升高，这与我们观察到的JAK1过度激活相符。因此，我们评估了选择性JAK1/2抑制剂在MPN相关实验模型中的有效性，并报告了首个进入临床的强效、选择性口服JAK1/JAK2抑制剂INCB018424的作用。INCB018424可抑制白细胞介素-6信号通路（半数抑制浓度[IC50] = 281 nM）和JAK2V617F(+) Ba/F3细胞的增殖（IC50 = 127 nM）。在原代培养中，INCB018424 优先抑制 JAK2V617F(+) 真性红细胞增多症患者的红系祖细胞集落形成（IC50 = 67 nM），而健康供体的 IC50 > 400 nM。在 JAK2V617F(+) MPN 小鼠模型中，口服 INCB018424 可显著减轻脾肿大并降低循环炎症细胞因子水平，并优先清除肿瘤细胞，从而显著延长小鼠生存期，且无骨髓抑制或免疫抑制作用。初步临床结果支持这些临床前数据，并证实 INCB018424 是一种有前景的口服 MPN 治疗药物。 [1]

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我们近期在60%的慢性中性粒细胞白血病（CNL）和非典型（BCR-ABL阴性）慢性粒细胞白血病（aCML）患者中发现了CSF3R（GCSFR）的可靶向突变。本文证明，最常见的激活突变CSF3R T618I足以在小鼠骨髓移植模型中诱发致命的骨髓增生性疾病。移植了表达CSF3R T618I的造血细胞的小鼠出现了骨髓增生性疾病，其特征是粒细胞过度增殖以及脾脏和肝脏的粒细胞浸润，最终导致死亡。使用JAK1/2抑制剂鲁索替尼治疗可降低白细胞计数并减轻脾脏重量。这表明CSF3R的激活突变足以驱动一种类似于aCML和CNL的骨髓增生性疾病，且该疾病对JAK抑制剂敏感。这种小鼠模型是进一步研究中性粒细胞骨髓增生性肿瘤的极佳工具，并提示JAK抑制剂可用于治疗该疾病。[2]

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白血病是由造血祖细胞中多种基因组损伤的积累引起的。然而，这些事件在致癌转化过程中如何协同作用仍知之甚少。我们研究了激活的JAK3/STAT5信号通路和HOXA9过表达之间的协同作用，这两个事件在T细胞急性淋巴细胞白血病中被发现显著共存。突变型JAK3和HOXA9的表达导致起源于多能或淋巴定向祖细胞的白血病快速发展，与单独表达JAK3或HOXA9相比，疾病潜伏期显著缩短。整合RNA测序、染色质免疫沉淀测序和转座酶可及染色质测序（ATAC-seq）技术揭示了STAT5和HOXA9在基因组中存在共定位，导致STAT5转录活性增强和FOS/JUN（AP1）异位激活。我们的数据表明，HOXA9等致癌转录因子为特定信号通路的激活提供了有利条件，解释了为何JAK/STAT通路突变会在表达HOXA9的细胞中积累。意义：癌基因协同作用在癌症发展中的机制仍不甚明了。本研究构建了T细胞白血病发展过程中JAK/STAT信号通路激活与HOXA9异位表达协同作用的模型。我们发现STAT5和HOXA9在转录水平上存在直接协同作用，并将PIM1激酶鉴定为JAK/STAT/HOXA9突变阳性白血病病例中的潜在药物靶点。 [3]

C₁₇H₂₁N₆O₄P

404.36

404.136

1092939-17-7

Ruxolitinib;941678-49-5;Ruxolitinib (S enantiomer);941685-37-6;Ruxolitinib sulfate;1092939-16-6

25127112

Typically exists as white to gray solids at room temperature

2.537

170.75

4

8

4

28

503

1

N#CC[C@H](C1CCCC1)N2N=CC(C3=C4C=CNC4=NC=N3)=C2.O=P(O)(O)O

JFMWPOCYMYGEDM-XFULWGLBSA-N

InChI=1S/C17H18N6.H3O4P/c18-7-5-15(12-3-1-2-4-12)23-10-13(9-22-23)16-14-6-8-19-17(14)21-11-20-16;1-5(2,3)4/h6,8-12,15H,1-5H2,(H,19,20,21);(H3,1,2,3,4)/t15-;/m1./s1

(3R)-3-cyclopentyl-3-[4-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)pyrazol-1-yl]propanenitrile;phosphoric acid

INCB-018424 phosphate, INCB 018424, INCB018424; INC424, INC424, INC-424; INCB18424, INCB 18424, 1092939-17-7; (R)-3-(4-(7H-Pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-3-cyclopentylpropanenitrile phosphate; OPZELURA; Ruxolitinib (phosphate); ruxolitinib monophosphate; INCB-18424; Jakafi and Jakavi (trade name)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (6.80 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (6.80 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 20.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 6 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+ddH2O:5mg/mL

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配方 7 中的溶解度: 10 mg/mL (24.73 mM) in 0.5% MC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。