S-Nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine   中文名称: S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺

Platelet aggregation

在含氧量正常的条件下，S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺（10 mM；8 小时）在 6 小时后通过释放一氧化氮 (NO) 引起约 80% 的毒性 [1]。在离体心室肌细胞中，S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺（100 μM；30 分钟）产生近 6 小时的半衰期 [3]。

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1. 研究了两种新的s -亚硝基-n -乙酰基- dl -青霉胺（SNAP）类似物s -亚硝基-n -甲酰基- dl -青霉胺（SNFP）和s -亚硝基- dl -青霉胺（SNPL）对血小板功能的影响。2. SNAP及其类似物是有效的血小板聚集抑制剂和血小板分解诱导剂。3. 所有化合物都能抑制纤维蛋白原与血小板的结合。4. 它们还减少了血小板中p选择素的释放。5. 纤维蛋白原结合的抑制和p -选择素的释放都与血小板内环GMP浓度的增加相关。6. 在足以抑制血小板功能和诱导环状GMP形成的浓度（0.01-3微米）下，SNPL可以检测到NO的释放，而SNAP和SNFP则无法检测到NO的释放。7. 在浓度为bb0或= 10微米时，检测到所有化合物中NO的释放。8. 因此，SNPL自发释放NO解释了该化合物对血小板功能的作用；然而，血小板介导的机制可能参与了SNAP和SNFP中NO的释放。[1]

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已知s -亚硝基- n -乙酰基- dl -青霉胺（SNAP）和硝普钠（SNP）释放一氧化氮（no），对培养的内皮细胞表现出细胞毒性。在缺氧条件下，5 mM SNAP和20 mM SNP孵育8 h后，细胞活力分别下降约90%和80%。在常压条件下，同一时间段内细胞死亡率分别为45%和42%。通过氧合血红蛋白法和两种新近开发的一氧化氮螯合陷阱（NOCTs）测量从SNAP和SNP中释放的一氧化氮浓度。在缺氧培养15 min内，SNAP和SNP的no浓度分别从74 μ m和28 μ m上升到136 μ m和66 μ m，然后下降到36 μ m和28 μ m。在正常孵育条件下，来自SNAP和SNP的. no水平分别保持在30微米和20微米左右。相比之下，精胺/NO加合物（精胺烯酸盐）在常氧条件下比在缺氧条件下毒性更大。在这两种条件下，从2 mM的精胺中释放的一氧化氮浓度约为20微米。结果表明，与常氧孵育相比，低氧条件下SNAP和SNP的细胞毒性显著增强，而精胺enonoate的细胞毒性没有显著增强。对这些化合物释放一氧化氮行为的研究表明，缺氧条件下SNAP和SNP毒性的增加与O2对前体产生一氧化氮的化学过程的影响有关，而不是与缺氧细胞对一氧化氮的敏感性增加有关。[2]

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1. 先前的研究表明，外源性一氧化氮（NO）和NO依赖的信号通路调节不同细胞类型的细胞内pH(pH(i))，但NO在心脏pH(i)调节中的作用知之甚少。因此，在本研究中，我们研究了NO供体s -亚硝基-n -乙酰- dl -青霉胺、精胺NONOate和丙胺NONOate对大鼠离体心室肌细胞pH(i)的影响。2. 从成年Wistar大鼠心脏中分离细胞，用pH敏感荧光指示剂5-（和6）-羧基半萘达氟(SNARF)-1 （10 μmol/L）和共聚焦显微镜监测pH(i)。为了测试NO供体对Na + /H +交换剂（NHE）的影响，监测了无Na +缓冲液的基础pH(i)和氯化铵（10 mmol/L）预脉冲后细胞内酸中毒恢复pH(i)。用乙酰唑胺（50 μmol/L）检测碳酸酐酶的作用。4,4-二异硫氰酸二苯乙烯-2,2'-二磺酸(0.5 mmol/L；DIDS)被用来抑制Cl - /OH -⁻和Cl - /HCO₃交换物。乙酰唑胺和DIDS分别于NO供体前1分钟和5分钟通过超滤系统应用。3. 所有三名NO供者都急剧降低了pH值(i)，这种影响一直持续到NO供者被移除。在不含Na⁺的缓冲液中，基础pH值的下降(i)增加了，而碳酸酐酶和Cl - /OH⁻和Cl - /HCO₃⁻交换物的抑制作用并没有改变NO供体对pH值的影响(i)。在铵预负荷后，在NO供体存在的情况下，pH(i)的恢复速度加快。4. 综上所述，外源NO降低了基础pH(i)，导致NHE活性增加。碳酸酐酶和氯化物依赖的肌层HCO₃（⁻）和OH（⁻）运输物与no诱导的大鼠分离心室肌细胞pH(i)下降无关。［３］

在豚鼠的气管中，SNAP（100 μM、300 μM）会导致电诱导的 [3H]-米胆碱释放轻微但值得注意的增加 [4]。

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研究了一氧化氮（NO）供体s -亚硝基-n -乙酰基- dl -青霉胺（SNAP）和NO合成酶抑制剂L-N(G)-硝基精氨酸（L-NOARG）对[(3)H]-胆碱预孵育的豚鼠气管无上皮制备物电诱发[(3)H]-乙酰胆碱释放的影响。SNAP（100和300微摩）引起电诱发[(3)H]-乙酰胆碱释放小但显著增加（对照的121+/-4%和124+/-10%）。[(3)H]-ACh的静息流出不受SNAP的影响。可溶性胍基环化酶的特异性抑制剂1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3- α]quinoxalin-1-one （ODQ， 1微摩）可消除SNAP的增加。辣椒素预处理气管（3 μ m）后，SNAP（100和300 μ m）的促进作用逆转为抑制释放（74+/-4%和78+/-2%）。ODQ阻止了这种抑制作用。辣椒素单独预处理对[(3)H]-乙酰胆碱的释放无显著影响。NK(2)受体拮抗剂SR 48968 （30 nM）存在时，SNAP（100微摩）对[(3)H]-乙酰胆碱释放（78+/-3%）也有显著抑制作用。L-NOARG（10和100微摩）显著增强了电诱发平滑肌收缩，但对辣椒素预处理气管条的诱发释放没有显著增加。这可能说明内源性NO对乙酰胆碱释放的抑制作用太小，溢出研究无法检测到。由此可见，NO对乙酰胆碱释放具有双重作用。在没有修饰药物的情况下，NO可以促进乙酰胆碱的释放，但在NK(2)受体被阻断或感觉神经被辣椒素耗尽后，NO会抑制乙酰胆碱的释放。这表明一氧化氮和内源性快激素共同作用，使乙酰胆碱释放增加。[4]

测量pHi [3]
完整肌细胞pHi的测定方法如前所述细胞加载5-（和6）-羧基SNARF-1和乙酰氧基甲酯(SNARF-1；10µM)在无碳酸氢盐的Tyrode溶液中，室温下浸泡15分钟。20,22染色后，将细胞用相同的溶液（不含染料）超灌注20分钟，然后开始记录。在543 nm处用绿色氖激光激发snawf -1，在590 nm和650 nm处同时收集其发出的荧光。计算每个细胞650 nm/ 590 nm的发射比，并使用尼日利亚菌素校准技术将其转换为pHi值。23、24将细胞暴露于不同外部pH（6.0、7.5和9.0）的去极化高K+缓冲液（140 mM KCl, 1.0 mM MgCl2, 5 mM D-glucose, 10 mM HEPES， 10µM尼日利亚菌素）中，绘制校准曲线25尼日利亚菌素，一个H+/K+交换离子载体集[K+]o = [K+]I，因此，尼日利亚菌素存在时的pHo = pHi。pH校准数据分别从单个细胞获得，并对超过15个细胞进行平均。将肌细胞暴露在含有10 mM氯化铵（NH4Cl）的酸负荷中3分钟后，评估NHE活性。实验在没有碳酸氢盐的情况下进行，以确保NH4Cl读取后pHi的恢复是由于NHE激活。此外，在无钠溶液中，用132 mM n -甲基- d -氨基葡萄糖替代钠，阻断NHE活性CA对细胞内二氧化碳的水合作用导致HCO3 -和H+-离子的生成，导致pHi的下降。为了研究NO供体对CA的影响，在NO供体之前，将CA抑制剂乙酰唑胺（50µM）溶解在DMSO中，并加入到过混液中。为了确定通过Cl -OH -和Cl -HCO3 -交换剂，4,4 ' -二异硫氰酸二苯乙烯-2,2 ' -二磺酸（DIDS）增加碱流出是否会导致NO诱导pHi变化；0.5 mM)，一种非选择性阴离子运输抑制剂，在NO供体灌注前5分钟给予。

细胞活力测定[1]
细胞类型： 大鼠肝窦内皮细胞
测试浓度： 2 mM、5 mM、10 mM
孵化持续时间：2 hrs（小时）、4 hrs（小时）、6 hrs（小时）、8 hrs（小时）
实验结果： 基础 pHi 持续下降[3]。针对培养的内皮细胞的细胞毒性。

[3H]-乙酰胆碱的释放[4]
平衡30分钟后停止灌流，将气管条带与[3H]-胆碱（185 KBq ml−1）孵育1小时。在此期间，使用Grass S6刺激器，通过两个平行于条带放置的铂电极（距离0.6 cm；电压降10 V cm−1），以20 Hz、1 ms的方波脉冲刺激组织，每30秒刺激一次，持续5秒。然后再次用生理盐溶液（2 ml min−1）灌流条带，该生理盐溶液中额外含有10 μM的半胆碱-3。经过90分钟的冲洗期后，收集每3分钟一次的灌流液，并用液体闪烁计数法测量样品中的氚含量。条带间隔30分钟进行两次刺激（S1，S2）。每个刺激周期包含600个脉冲，以20 Hz的频率，每30秒间隔，每100个脉冲为一组施加脉冲。刺激诱发的[3H]放射性流出量通过刺激期间和刺激后总流出量之差，减去通过刺激前后两个样本插值计算的基础流出量得出。先前的实验表明，该制备物中电刺激诱发的[3H]放射性流出量仅包含[3H]乙酰胆碱（Kilbinger等人，1991）。在S2刺激前20分钟，将SNAP和L-NOARG加入灌流液中。SNAP和L-NOARG对电刺激诱发流出量的影响通过将S2/S1比值表示为相应对照实验中获得的等效比值的百分比来计算。在相互作用实验中，速激肽受体拮抗剂 SR 48968 (30 nM) 和 CP 99994 (100 nM) 在 SNAP 前 90 分钟加入，并一直留在培养基中直至实验结束。

[1]. Comparative pharmacology of analogues of S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine on human platelets. Br J Pharmacol. 1994 Aug;112(4):1071-6.

[2]. Enhanced release of nitric oxide causes increased cytotoxicity of S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine and sodium nitroprusside under hypoxic conditions. Biochem J. 1996 Sep 15;318 ( Pt 3):789-95.

[3]. Effect of nitric oxide donors S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine, spermine NONOate and propylamine propylamine NONOate on intracellular pH in cardiomyocytes. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2012 Sep;39(9):772-8.

[4]. Modulation of acetylcholine release in the guinea-pig trachea by the nitric oxide donor, S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine (SNAP). Br J Pharmacol. 2000 Sep;131(1):94-8.

SNAP是一种含硫烷基亚硝酸盐，属于一氧化氮供体。
另见：S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（注释已移至此处）。

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当NK2受体无法被内源性速激肽刺激时，例如在SR 48968存在下或感觉神经被辣椒素耗竭后，SNAP可抑制电刺激诱发的乙酰胆碱释放。SNAP抑制乙酰胆碱释放的机制尚不清楚，但可能与豚鼠肠肌神经元中描述的机制类似，在豚鼠肠肌神经元中，可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ也能消除SNAP的抑制作用（Hebeiss & Kilbinger，1998）。在NK1受体拮抗剂CP 99994存在的情况下，SNAP既不促进也不抑制乙酰胆碱的释放。这表明NK1受体也参与了速激肽对胆碱能神经元的兴奋作用，正如Watson等人（1993）所提出的。然而，主要通路似乎涉及NK2受体，因为只有阻断NK2受体才能揭示SNAP的抑制作用。由于有证据表明NK3受体不参与速激肽对胆碱能神经传递的促进作用（Watson等人，1993），因此未研究NK3受体拮抗剂。[4]

C7H12N2O4S

220.2462

220.051

67776-06-1

5231

Light green to green solid powder

1.4±0.1 g/cm3

151ºC

1.560

1.13

121.13

2

6

4

14

254

0

ZIIQCSMRQKCOCT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C7H12N2O4S/c1-4(10)8-5(6(11)12)7(2,3)14-9-13/h5H,1-3H3,(H,8,10)(H,11,12)

2-acetamido-3-methyl-3-nitrososulfanylbutanoic acid

67776-06-1; snap; S-Nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine; Valine,N-acetyl-3-(nitrosothio)-; S-Nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine; 2-acetamido-3-methyl-3-(nitrososulfanyl)butanoic acid; 152971-80-7; DL-Valine, N-acetyl-3-(nitrosothio)-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~1135.07 mM)
H2O : ~11.11 mg/mL (~50.44 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (9.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (9.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。