OX1 receptor

体外活性：在 CHO-OX1 细胞中，SB-334867 抑制 orexin-A (10 nM) 和 orexin-B (100 nM) 诱导的钙反应，pKB 分别为 7.27 和 7.23，对 UTP (3 microM) 没有影响。 ）诱导的钙反应。激酶测定：SB-334867 游离碱是一种选择性非肽食欲素 OX1 受体拮抗剂，pKb 值为 7.2。 IC50 值：7.2 (pKb)。 SB-334867-A抑制食欲素-A (10 nM)和食欲素-B (100 nM)诱导的钙反应(pK(B)分别=7.27+/-0.04和7.23+/-0.03，n=8)，但对 CHO-OX(1) 细胞中 UTP (3 microM) 诱导的钙反应没有影响。 SB-334867-A (10 microM) 还抑制 OX(2) 介导的钙反应（与 orexin-A 相比，为 32.7+/-1.9%）。细胞测定：食欲素-A 和食欲素-B 是从大鼠下丘脑分离的两种肽。它们参与一些生理功能，如控制进食、能量代谢和调节睡眠-觉醒周期。 SB-334867 可抑制 CHO-OX1 细胞中 orexin-A 和 orexin-B 诱导的钙反应，pKB 值分别为 7.27 和 7.23。 SB-334867 对 OX1 受体的选择性高于 OX2 受体。它分别抑制 CHO-OX2 细胞中食欲素 A 和食欲素 B 诱导的钙反应 32.7% 和 22%。

在雄性和雌性大鼠中，SB-334867（30 mg/kg，腹膜内注射）显着减少自然和食欲素 A 诱导的食物摄入。 SB-334867（2 mg/kg，静脉注射）可阻断抗精神病药物对大鼠多巴胺神经元活动的影响。 SB-334867 还抑制大鼠吗啡镇痛耐受的发展。

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本研究的重点是SB-334867，一种食欲素-1受体拮抗剂，在吗啡诱导小鼠运动活动敏化的获得中的作用。行为致敏是对相同剂量的成瘾物质的一种增强的全身反应，这可能会增加对药物的渴望和复发成瘾的风险。吗啡诱导的小鼠致敏是通过零星剂量（每3天注射5次）吗啡（10 mg/kg, i.p）实现的，而7天后注射吗啡（10 mg/kg）。为了评估食欲素系统阻断对致敏性获得的影响，除吗啡激发剂量外，每次吗啡注射前均给予SB-334867。吗啡给药后每天进行运动活动试验。行为学测试后收集脑结构（纹状体、海马和前额皮质）进行分子实验，利用qRT-PCR技术检测食欲素、多巴胺和腺苷受体mRNA表达。此外，采用相同的技术分析GFAP和Iba-1等标记物的mRNA表达。SB-334867抑制吗啡诱导的小鼠运动活动敏化。在行为致敏过程中，食欲素、多巴胺和腺苷受体mRNA表达以及GFAP和Iba-1的表达均发生了显著变化，表明食欲素、多巴胺、腺苷和胶质细胞在中脑边缘系统中存在广泛的相互作用。综上所述，食欲素系统可能是抑制吗啡诱导的行为致敏的有效措施。[1] 为了研究orexin-1和orexin-2受体活性在乙醇自我给药中的作用，我们利用高饮啮齿动物模型，在不同的自我给药范式中评估了不同的orexin （OX）受体亚型靶向化合物。采用2瓶选择法，研究了OX1拮抗剂SB334867、OX2拮抗剂LSN2424100和混合OX1/2拮抗剂almorexant （ACT-078573）对乙醇偏好(P)大鼠家笼乙醇消耗的影响。在单独的实验中，我们评估了SB334867、LSN2424100和almorexant对维持渐进式比例强化操作计划的P大鼠操作性乙醇自我给药的影响。在第三个系列的实验中，我们将SB334867、LSN2424100和almorexant给药于乙醇偏好的C57BL/6J小鼠，以观察在狂饮（黑暗中饮酒）模型中，OX受体阻断对乙醇摄入的影响。在长期在家笼中自由选择乙醇的P大鼠中，SB334867和almorexant显著减少了乙醇摄入量，但almorexant也减少了水摄入量，表明对完成行为有非特异性影响。在递进比例操作实验中，LSN2424100和almorexant降低了P大鼠的断点和乙醇消耗，而almorexant无活性对构象和SB334867对乙醇消耗动机没有显著影响。正如预期的那样，车辆注射小鼠在黑暗中饮酒模型中表现出类似狂欢的饮酒模式。与对照对照相比，这三种OX拮抗剂均降低了乙醇摄入量和由此产生的血液乙醇浓度，但SB334867和LSN2424100在不同的小鼠队列中也降低了蔗糖消耗，提示非特异性作用。总的来说，这些结果提供了越来越多的证据，表明OX1和OX2受体活性影响乙醇的自我给药，尽管这种影响可能对乙醇的消耗没有选择性。[2]

SB-334867 free base 的 IC50 值为 7.2 (pKb)，是一种选择性非肽 orexin OX1 受体拮抗剂。在 CHO-OX(1) 细胞中，SB-334867-A 不影响 UTP (3 microM) 诱导的钙反应，但确实抑制对 orexin-A (10 nM) 和 orexin-B (100 nM) 的反应（ pK(B)分别=7.27+/-0.04和7.23+/-0.03，n=8)。 OX(2) 介导的钙反应也被 SB-334867-A (10 microM) 抑制（与 orexin-A 相比，抑制率为 32.7+/-1.9%）。

从大鼠下丘脑提取的两种肽称为食欲素-A 和食欲素-B。它们参与的一些生理过程包括摄食调节、能量代谢和睡眠-觉醒周期调节。在 CHO-OX1 细胞中，SB-334867 可以抑制 orexin-A 和 orexin-B 诱导的钙反应，pKB 值分别为 7.27 和 7.23。对于 OX1 受体，SB-334867 比 OX2 受体表现出更高的选择性。它可抑制 CHO-OX2 细胞中由 orexin-A 和 orexin-B 分别诱导 32.7% 和 22% 的钙反应。

行为实验中的药物[1]
实验中使用的药物如下：盐酸吗啡三水合物（波兰 Cosmetic Pharma 公司）和 1-(2-甲基苯并恶唑-6-基)-3-[1,5]萘啶-4-基脲盐酸盐（SB-334867）——一种选择性 OX-1 受体拮抗剂。吗啡溶于0.9%生理盐水，SB-334867溶于三滴DMSO，再用0.9%生理盐水稀释（最终DMSO浓度为0.1%）。所有药物均以10 ml/kg的剂量腹腔注射（ip）。吗啡的剂量为10 mg/kg，SB-334867的剂量为20 mg/kg。文献数据显示，SB-334867的最小有效剂量为30 mg/kg。根据行为致敏研究的普遍原则，建议使用无效剂量的药物（本研究中为SB-334867）。因此，根据文献数据和我们初步的未发表结果，本研究中使用的SB-334867剂量（20 mg/kg）低于阈值。对照组动物在测试前相应时间点接受了相同体积的生理盐水。

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行为敏化程序[1]
SB-334867（OX-1受体拮抗剂，20 mg/kg，腹腔注射）对吗啡致敏作用获得的影响[1]
小鼠吗啡行为致敏的诱导方法基于Kuribara描述的方法，并根据Kotlińska和Bocheński的方法进行了改进。动物每3天接受一次吗啡注射（腹腔注射），剂量为10 mg/kg，共注射5次（实验第1、4、7、10和13天）。最后一次吗啡注射后7天（实验第20天），小鼠接受一次吗啡激发剂量（10 mg/kg，腹腔注射）。为了评估行为敏化的发展情况，立即将小鼠放入活动记录仪中，记录其60分钟的运动活动。对照组动物腹腔注射生理盐水。[1] 随后，研究了选择性OX-1受体拮抗剂SB-334867对吗啡诱导敏化的影响。在实验的第1、4、7、10和13天，于吗啡注射前15分钟给予SB-334867，但第20天未给予。对照组动物腹腔注射生理盐水。

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所有32只P大鼠在本次研究开展前约8-14个月内均可在笼内长期摄入乙醇。P大鼠被分为3组。一组（n = 10）用于测试SB-334867的作用，另一组（n = 11）用于测试LSN2424100的作用（由于基线饮酒量过低，一只大鼠被排除在实验之外）。采用受试者内实验设计来测试OX1和OX2受体拮抗剂。这些大鼠与另外 11 只大鼠（即全部 32 只 P 大鼠）一起，采用组间设计（每剂量组 n = 8）参与了阿莫雷沙特研究。[2]
N-((1H-咪唑-2-基)甲基)-N-([1,1′-联苯]-2-基)-4-氟苯磺酰胺盐酸盐 (LSN2424100)、SB-334867、(S)-阿莫雷沙特 (ACT-078573) 以及阿莫雷沙特的非活性 (R) 对映体均由礼来研究实验室（印第安纳州印第安纳波利斯）合成。盐酸纳曲酮购自 Sigma Aldrich 公司（密苏里州圣路易斯）。在大鼠实验中，OX1拮抗剂SB-334867溶解于由10% (2-羟丙基)-β-环糊精、2%二甲基亚砜和0.05%乳酸组成的水溶液中，并以1 ml/kg的剂量进行腹腔注射（ip）。OX2拮抗剂LSN2424100悬浮于由1%羧甲基纤维素、0.25%聚山梨醇酯-80和0.05%陶氏消泡剂组成的水溶液中，并以1 ml/kg的剂量进行腹腔注射（ip）。混合型OX1/2拮抗剂almorexant及其非活性对映体溶解于20% Captisol溶液中，并以1 ml/kg的剂量进行口服（po）。纳曲酮溶于水中，并加入15 μl 85%乳酸。[2]
小鼠实验中，SB-334867溶于0.01%聚山梨醇-80生理盐水中。阿莫雷沙特溶于20% Captisol水溶液中。LSN2424100悬浮于1%羧甲基纤维素和0.25%聚山梨醇-80水溶液中。所有化合物均以10 ml/kg的剂量通过腹腔注射给药。

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P大鼠笼内双瓶选择饮水实验[2]
P大鼠单独饲养于TSE LabMaster笼中，随时可获得食物、水和15%（v/v）乙醇溶液。在12小时黑暗周期内，每5分钟测量一次水和乙醇的摄入量（ml），并记录以供后续分析。在第一项实验中，采用组内设计，大鼠（n = 10）在12小时光暗周期黑暗期开始前60分钟分别接受赋形剂、3、10或30 mg/kg的SB-334867（腹腔注射）。在第二项实验中，采用组内设计，大鼠（n = 10）在12小时光暗周期黑暗期开始前60分钟分别接受赋形剂、纳曲酮（10 mg/kg）或LSN2424100（10或30 mg/kg，腹腔注射）（一只大鼠因基线饮水量过低而被排除在实验之外）。在第三项实验中，采用组间设计，大鼠（n = 32）在黑暗周期开始前60分钟分别接受赋形剂、纳曲酮（10 mg/kg）或S-almorexant（60或100 mg/kg，口服）给药。纳曲酮作为阳性对照被纳入研究设计，因为该剂量的纳曲酮已被证明能在这些测试条件下有效降低P大鼠的乙醇摄入量。所有实验均选择60分钟的预处理期，以使黑暗周期的开始时间大致与脑内药物浓度达到峰值的时间相吻合（数据未报告）。基于化合物的短半衰期和高代谢率，在黑暗周期的前3小时内测量了水和乙醇的消耗量。

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实验采用受试者内设计，不同剂量给药之间间隔3-4天的洗脱期，剂量采用拉丁方设计进行平衡。一组n=10只大鼠用于在单独的实验中测试SB-334867、LSN2424100和almorexant对渐进比率强化程序下维持的操作性反应的影响。药物每周给药两天（周二和周五），以便在后续给药之间留出洗脱期。大鼠接受赋形剂、3、10或30 mg/kg的SB-334867（腹腔注射，实验前30分钟）。给予赋形剂、3、10 或 30 mg/kg LSN2424100（腹腔注射，实验前 30 分钟）；或给予赋形剂、10、30 或 60 mg/kg 阿莫雷沙特或 60 mg/kg 阿莫雷沙特的非活性对映体（口服，实验前 60 分钟）。在其他所有实验日，大鼠均接受渐进比率操作性条件反射测试，不进行任何药物处理，以维持其操作性条件反射表现并确认其行为恢复至基线水平。一只大鼠因出现与研究药物无关的皮疹而被排除在 60 mg/kg 阿莫雷沙特组的测试之外。[2] C57BL/6J 小鼠的暴饮行为[2] 在乙醇摄入测试前一周，小鼠每天接受生理盐水注射（腹腔注射），以使其适应操作和注射程序。采用为期4天的黑暗饮酒（DID）范式评估乙醇摄入量。实验中，从黑暗周期开始3小时后，将笼内的水瓶替换为一瓶乙醇溶液（20% v/v）。该方法已被证实可在相对较短的时间内产生高血乙醇浓度（BEC），这是由于乙醇摄入量较高所致（Rhodes et al., 2005）。在前三天，动物在2小时的乙醇自由饮用期前30分钟注射生理盐水或载体。第四天，在测试前30分钟通过腹腔注射给药，测试时间延长至4小时。一组小鼠分别注射载体、3、10或30 mg/kg的SB-334867（每剂量组n = 10）。第二组小鼠分别接受载体、15、30 或 60 mg/kg LSN2424100 的测试（每剂量组 n = 9–10）。第三组动物分别接受载体、25、50 或 100 mg/kg almorexant 的测试（每剂量组 n = 10）。为了评估最终的血液乙醇浓度 (BEC)，在移除乙醇瓶后立即从眼眶后静脉丛采集血样并进行离心。[2]
为了评估药物对乙醇摄入量的影响的特异性，另取一组未接触过乙醇的动物，在相同的 DID 范式下接受蔗糖溶液 (1% w/v) 的测试（第 1–3 天：2 小时自由饮水，并注射生理盐水；第 4 天：4 小时测试，并进行药物预处理）。在第4天，分别给予小鼠载体、3、10或30 mg/kg（每剂量组n=6-7）的SB-334867，给药时间为4小时的自由摄取期之前。在随后一周的测试中，这些小鼠在4小时的摄取期之前分别给予载体或100 mg/kg的almorexant（每剂量组n=14）。在另一组小鼠中，在4小时的测试之前分别给予载体或60 mg/kg的LSN2424100（每剂量组n=9-10）。

溶于 10% (w/v) Encapsin 无菌水中；30 mg/kg; ip 管理

雄性和雌性 Sprague–Dawley 大鼠

[1]. 1,3-Biarylureas as selective non-peptide antagonists of the orexin-1 receptor.Bioorg Med Chem Lett. 2001 Jul 23;11(14):1907-10.

[2]. SB-334867 (an Orexin-1 Receptor Antagonist) Effects on Morphine-Induced Sensitization in Mice-a View on Receptor Mechanisms. Mol Neurobiol. 2018 Nov;55(11):8473-8485.

[3]. Orexin-1 and orexin-2 receptor antagonists reduce ethanol self-administration in high-drinking rodent models.Front Neurosci. 2014 Feb 25;8:33.

[4]. SB-334867-A: the first selective orexin-1 receptor antagonist.Br J Pharmacol. 2001 Mar;132(6):1179-82.

1-(2-甲基-1,3-苯并恶唑-6-基)-3-(1,5-萘啶-4-基)脲是一种萘啶衍生物。

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本研究着重探讨了食欲素-1受体拮抗剂SB-334867在小鼠吗啡诱导的运动活性敏化过程中的作用。行为敏化是指对相同剂量成瘾物质的全身反应增强，这被认为会增加对药物的渴求和复发的风险。通过间歇性注射吗啡（10 mg/kg，腹腔注射，每3天注射一次，共注射5次）诱导小鼠产生吗啡敏化，并在7天后注射一次激发剂量的吗啡（10 mg/kg）。为了评估食欲素系统阻断对致敏作用获得的影响，除吗啡激发剂量外，每次吗啡注射前均给予SB-334867。在每次吗啡给药当天均进行运动活性测试。行为学测试后，收集脑组织（纹状体、海马和前额叶皮层）进行分子实验，采用qRT-PCR技术检测食欲素、多巴胺和腺苷受体的mRNA表达。此外，还采用相同技术分析了GFAP和Iba-1等标记物的mRNA表达。SB-334867抑制了小鼠吗啡诱导的运动活性致敏作用的获得。在行为敏感化过程中，食欲素、多巴胺和腺苷受体的mRNA表达以及GFAP和Iba-1的表达均发生了显著改变，表明中脑边缘系统中食欲素、多巴胺、腺苷和神经胶质细胞之间存在广泛的相互作用。综上所述，食欲素系统可能是抑制吗啡诱导的行为敏感化的有效手段。[1]

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为了研究食欲素-1和食欲素-2受体活性在乙醇自我给药中的作用，我们使用高饮酒啮齿动物模型，在各种自我给药范式中评估了差异性靶向食欲素（OX）受体亚型的化合物。本研究采用双瓶选择法，在嗜酒（P）大鼠中测试了OX1拮抗剂SB334867、OX2拮抗剂LSN2424100和混合型OX1/2拮抗剂almorexant（ACT-078573）对笼内乙醇摄入量的影响。在另一组实验中，评估了SB334867、LSN2424100和almorexant对接受渐进比率操作性强化程序训练的P大鼠进行操作性乙醇自我给药的影响。在第三组实验中，向嗜酒的C57BL/6J小鼠施用SB334867、LSN2424100和almorexant，以研究OX受体阻断对暴饮（暗饮）模型中乙醇摄入量的影响。在长期自由选择饮用乙醇的P大鼠中，SB334867和almorexant均显著降低了乙醇摄入量，但almorexant也降低了饮水量，提示其对摄食行为存在非特异性影响。在渐进比率操作性条件反射实验中，LSN2424100和almorexant降低了P大鼠的断点和乙醇消耗量，而almorexant的非活性对映体和SB334867对乙醇摄入动机没有显著影响。正如预期，在黑暗饮酒模型中，注射载体的小鼠表现出类似暴饮的模式。与注射载体的对照组相比，所有三种OX拮抗剂均降低了乙醇摄入量和血液乙醇浓度，但SB334867和LSN2424100在另一组小鼠中也降低了蔗糖消耗量，提示其存在非特异性影响。总的来说，这些结果为越来越多的证据表明 OX1 和 OX2 受体活性影响乙醇的自我给药，尽管这种影响可能并非选择性地针对乙醇的摄入。[2]

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通过使用 Fluo-3AM 测量细胞内钙 ([Ca(2+)](i))，研究了各种肽类和非肽类配体在稳定表达人食欲素-1 (OX(1)) 或食欲素-2 (OX(2)) 受体的中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中的药理学。食欲素A和食欲素B可增加CHO-OX(1)细胞（pEC(50)分别为8.38±0.04和7.26±0.05，n=12）和CHO-OX(2)细胞（pEC(50)分别为8.20±0.03和8.26±0.04，n=8）的细胞内钙离子浓度[Ca(2+)](i)。然而，神经肽Y和促胰液素（10 pM - 10 μM）在两种细胞系中均未表现出激动剂或拮抗剂特性。 SB-334867-A（1-(2-甲基苯并恶唑-6-基)-3-[1,5]萘啶-4-基脲盐酸盐）抑制了食欲素A (10 nM) 和食欲素B (100 nM) 诱导的钙反应（pK(B) 分别为 7.27±0.04 和 7.23±0.03，n=8），但对 CHO-OX(1) 细胞中 UTP (3 μM) 诱导的钙反应无影响。SB-334867-A (10 μM) 也抑制了 OX(2) 介导的钙反应（与食欲素A 相比抑制率为 32.7±1.9%）。SB-334867-A 在两种细胞系中均不具有激动剂特性。总之，SB-334867-A 是一种非肽类 OX(1) 选择性受体拮抗剂。[3]

C17H14NCLN5O2

319.32

319.11

C, 57.39; H, 3.97; Cl, 9.96; N, 19.68; O, 8.99

249889-64-3

SB-334867 free base; 792173-99-0

6604926

White to off-white solid powder

1.472g/cm3

450.5ºC at 760 mmHg

226.2ºC

2.63E-08mmHg at 25°C

1.793

3.869

92.94

2

5

2

24

462

0

O=C(NC1=CC(OC(C)=N2)=C2C=C1)NC3=CC=NC4=CC=CN=C43.Cl

AKMNUCBQGHFICM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H13N5O2.ClH/c1-10-20-12-5-4-11(9-15(12)24-10)21-17(23)22-14-6-8-18-13-3-2-7-19-16(13)14;/h2-9H,1H3,(H2,18,21,22,23);1H

1-(2-methylbenzo[d]oxazol-6-yl)-3-(1,5-naphthyridin-4-yl)urea hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

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