Senicapoc (ICA17043)   中文名称: 塞尼卡泊

Gardos Channel (Ca²⁺-activated K⁺ channel (IC50 = 11 nM)

结果表明，ICA-17043 可阻断小鼠（C57 黑色）红细胞中的 Gardos 通道，IC50 为 50±6 nM。在人红细胞中，ICA-17043 以浓度依赖性方式抑制细胞血红蛋白浓度的升高 [1]。

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镰状细胞贫血的一个突出特征是循环中存在脱水红细胞（RBC）。红细胞中钾（K（+））、氯（Cl（-））和水的损失被认为有助于这些脱水细胞的产生。红细胞中K（+）损失的一个主要途径是Gardos通道，这是一种钙（Ca（2+））激活的K（+”通道。克霉唑（CLT）是Gardos通道的抑制剂，已被证明可以在体外和体内减少红细胞脱水。在这项研究中，研究人员开发了一种化学新型化合物ICA-17043，在抑制Gardos通道方面比CLT具有更大的效力和选择性。ICA-17043以11+/-2 nM的IC（50）值阻断了Ca（2+）诱导的人红细胞铷通量（CLT IC（50”=100+/-12 nM），并以30+/-20 nM的IC（50）抑制了红细胞脱水。[1]

ICA-17043（10 mg/kg，口服）制剂后，第 11 天和第 21 天评估的 Gardos 通道活性显着降低。这种降低伴随着红细胞 K+ 含量的增加，但 Na+ 含量没有变化。配制 11 天后，ICA-17043（10 mg/kg，每天两次）显着增加 SAD 小鼠的 Hct [1]。绵羊过敏原激发后 48 小时，Senicapoc（30 mg/kg，面部）可减少嗜酸性粒细胞计数、增殖和气道高反应性 [2]。

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在镰状细胞病（SAD）的转基因小鼠模型中，用ICA-17043（10 mg/kg口服，每天两次）治疗21天，显示出对Gardos通道活性的显著和持续抑制（平均抑制率为90%+/-27%，P<.005），红细胞K（+）含量增加（从392+/-19.9增加到479.2+/-40 mmol/kg血红蛋白[Hb]，P<-005），血细胞比容（Hct）显著增加（从0.435+/-0.007增加到0.509+/-0.022[43.5%+/-0.7%增加到50.9%+/-2.2%，P<.005），平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）降低（从340+/-9.0降至300+/-15 g/L[34.0+/-0.9至30+/-1.5 g/dL]，P<.05），红细胞密度曲线左移。这些数据表明，ICA-17043是Gardos通道的强效抑制剂，可以改善SAD小鼠的红细胞脱水。[1]

受体结合研究[1]
通过鉴定化合物在体外与哪些常见受体相互作用，可以更好地了解ICA-17043的潜在副作用。测定了ICA-17043在10μM浓度下对30种常见受体的受体结合活性：腺苷A1和A2、α1和α2肾上腺素能、β1肾上腺素能、NE摄取、血管紧张素（AT1）、苯二氮卓类、缓激肽（B2）、胆囊收缩素（CCK）、多巴胺D1和D2、多巴胺摄取、内皮素（ETA）、42γ-氨基丁酸（GABA）、N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）、组胺H1、毒蕈碱、神经激肽、神经肽Y、烟碱（N中枢）、阿片类、苯环利定（PCP）、5-羟色胺（非选择性）、5-血清素（5-HT1B）和5-羟色胺（5-HT2A），血清素摄取、西格玛阿片类、糖皮质激素和加压素-1（V1）受体。
ICA-17043（10μM）与含有上述每种受体和相应高亲和力放射配体的膜/细胞制剂一起孵育。孵育后，过滤膜/细胞片段，测量结合放射性，以确定ICA-17043对放射性配体的置换程度。

ICA-17043对红细胞的体外作用[1]
人和小鼠红细胞中Ca2+激活的Rb外排抑制的测量。[1]
肝素化人血取自Biological Specialty。血液样本在提取后48小时内进行了处理。全血最初用改良通量缓冲液（MFB）1:1稀释，MFB由140 mM NaCl、5 mM KCl、10 mM Tris（三羟甲基氨基甲烷）、0.1 mM EGTA（乙二醇四乙酸）（pH=7.4）组成。以1000rpm离心血液，用MFB洗涤主要由红细胞组成的颗粒3次。然后，在37°C下，将洗涤过的细胞与终浓度为0.185 MBq/mL（5μCi/mL）的86Rb+在MFB中孵育至少3小时，使细胞负载86Rb+。在加载86Rb+后，用冷却的MFB洗涤红细胞3次。然后将细胞与浓度在1nM至10000nM范围内的测试化合物（ICA-17043）一起孵育10分钟。通过分别添加CaCl2和A23187（一种钙离子载体）至终浓度为2 mM和5μM，提高红细胞内钙水平，启动86Rb+的流出。在室温下孵育10分钟后，将红细胞在微量离心机中沉淀，取出上清液，在Wallac MicroBeta液体闪烁计数器中计数。所述方案是对Brugnara等人先前发表的红细胞Gardos通道抑制测量方案的修改。 使用Origin软件逻辑函数计算抑制百分比和IC50值。

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人红细胞Ca2+激活脱水抑制作用的测定。[1]
肝素化的人血以2000rpm离心，所得颗粒用MFB洗涤3次，如前所述。将RBC沉淀重新悬浮在MFB中，其中加入CaCl2至最终钙浓度为2 mM。在室温下，将浓度逐渐增加的试验化合物与等分细胞一起孵育10分钟。然后加入A23187（钙离子载体）至终浓度为50μM，然后在室温下孵育15分钟。然后使用微量离心器使细胞沉淀，立即将淬灭缓冲液（140 mM NaCl、5 mM KCl、10 mM Tris、5 mM EGTA和0.1%牛血清白蛋白[BSA]，pH=7.4）加入到每个细胞沉淀中，然后涡旋以重新悬浮细胞。然后用淬灭缓冲液洗涤重新悬浮的红细胞3次。使用血液分析仪（H2 Technicon）测量细胞血红蛋白浓度的分布，并计算血红蛋白浓度高于410 g/L（41 g/dL）的细胞百分比。

ICA-17043 对 SAD 小鼠的影响。[1]
本研究采用 3 至 6 月龄、体重 25 至 30 g 的转基因 Hbbsingle/single SAD1 (SAD) 雌雄小鼠。将 SAD 小鼠分为两组，分别灌胃给予载体（n = 6）或 ICA 17043（10 mg/kg）（n = 6），每日两次。以 C57B6/2J 小鼠（野生型小鼠）作为对照。分别在基线、治疗 11 天和 21 天后评估血液学参数。既往研究表明，采血和载体给药不会影响本研究中测量的血液学参数。

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\n\nICA-17043 对慢性缺氧条件下 SAD 小鼠的影响。[1]
\n在另一项研究中，SAD 小鼠在连续给药 15 天（10 mg/kg，灌胃给药，每日两次）后，被置于 8% 氧气浓度下维持 48 小时。使用氧电极监测封闭笼内的氧气压力。在缺氧暴露 48 小时前后，检测血液学参数、红细胞密度模式、Gardos 通道活性和红细胞阳离子含量。对照组小鼠（C57B6/2J 和载体处理的 SAD 小鼠）也暴露于 8% 氧气环境中 48 小时。\n

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\n血液学数据和红细胞阳离子含量测定。[1]
\n在特定时间间隔，通过眼眶后静脉穿刺从每只乙醚麻醉的小鼠中抽取 200 μL 血液，注入肝素化微量血细胞比容管中。对样本进行 Rb+ 通量测定（如“SAD 小鼠红细胞中 Ca2+ 激活的 Rb+ 内流的测定”中所述）、红细胞邻苯二甲酸酯密度分布曲线测定、细胞形态学研究、红细胞阳离子含量测定和其他血液学参数的评估。血红蛋白浓度通过氰甲酯衍生物的光谱测定法测定。血细胞比容 (Hct) 通过微量血细胞比容离心机离心测定。细胞用磷酸盐缓冲液（PBS；330 mOsm）在 25°C 下洗涤 3 次。根据 Danon 和 Marikovsky 的方法，使用邻苯二甲酸酯在微量血细胞比容管中获得密度分布曲线和红细胞密度中值 (D50)。

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\nSAD 小鼠红细胞中 Ca2+ 激活的 Rb+ 内流的测量。[1]
\n将全血在室温下与 1 mM 乌本苷、10 μM 布美他尼和 20 mM Tris-MOPS（pH 7.4）孵育 30 分钟。在搅拌下，加入离子载体 A23187 至终浓度为 80 μM。在 22°C 下孵育 6 分钟后，向细胞悬液（时间 = 0）中加入 Rb+（以 RbCl 的形式），使其最终浓度为 10 mM，并在 37°C 下孵育。分别在 0、2、3 和 5 分钟时取样，并转移至含有 150 mM NaCl 和 15 mM EGTA 的 2 mL 培养基中，pH 7.4，置于 4°C。用相同的溶液在 4°C 下洗涤样品 3 次，然后用 1.5 mL 0.02% Acationox 裂解。将裂解液以 3000g 离心 10 分钟后，采用原子吸收分光光度法测定上清液中的 Rb+ 含量。\n

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\n特应性绵羊分别每日两次口服 30 mg/kg Senicapoc (ICA-17073)（一种选择性 K(Ca)3.1 通道抑制剂）或仅给予赋形剂（0.5% 甲基纤维素）。两组绵羊均每两周接受一次屋尘螨过敏原气溶胶激发，持续 14 周。另设一组绵羊未接受过敏原激发或药物治疗。在赋形剂对照组中，12 周的过敏原激发导致静息气道阻力增加 60±19%，而 Senicapoc 治疗完全消除了这种增加（0.25±12%；n = 10，P = 0.0147）。对照组（载体组）肺阻力在早期峰值阶段升高了 82±21%，而塞尼卡泊治疗组肺阻力降低了 58%（24±14%；n = 10，P = 0.0288）。塞尼卡泊治疗组绵羊的气道高反应性也降低，与过敏原激发的载体对照组绵羊相比，需要显著更高剂量的卡巴胆碱才能使阻力增加 100%（20±5 vs. 52±18 呼吸单位卡巴胆碱；n = 10，P = 0.0340）。塞尼卡泊还显著降低了过敏原激发后 48 小时采集的支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞数量，并减少了血管重塑。[2]

[1]. ICA-17043, a novel Gardos channel blocker, prevents sickled red blood cell dehydration in vitro and in vivo in SAD mice. Blood. 2003 Mar 15;101(6):2412-8.

[2]. K(Ca)3.1 channel-blockade attenuates airway pathophysiology in a sheep model of chronic asthma. PLoS One. 2013 Jun 24;8(6):e66886.

Senicapoc (ICA-17043) 是一种新型的 Gardos 通道阻滞剂，目前正在研究其治疗镰状细胞病的潜力。
Senicapoc 是一种口服生物利用度高的钙激活钾通道 KCa3.1（Gardos 通道；KCNN4；IK-1；SK4）抑制剂，具有潜在的抗炎和免疫调节活性。口服后，Senicapoc 可靶向、结合并抑制 KCa3.1。KCa3.1 调节多种细胞的膜电位和钙信号传导，这些细胞包括红细胞、活化的 T 细胞和 B 细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、血管内皮细胞、上皮细胞以及增殖的血管平滑肌细胞和成纤维细胞。抑制KCa3.1可能预防镰状细胞病中的红细胞脱水，减少急性呼吸窘迫综合征（ARDS）中的液体分泌、液体潴留和肺部炎症，并减轻其他多种疾病（例如阿尔茨海默病中的神经炎症）中的炎症和免疫反应。塞尼卡泊具有良好的脑渗透性。

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药物适应症
已研究用于治疗贫血（镰状细胞）和哮喘。

C20H15F2NO

323.3360

323.112

C, 74.29; H, 4.68; F, 11.75; N, 4.33; O, 4.95

289656-45-7

216327

White to yellow solid powder

1.25g/cm3

460.7ºC at 760mmHg

232.4ºC

1.14E-08mmHg at 25°C

1.594

4.484

43.09

1

3

4

24

397

0

SCTZUZTYRMOMKT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H15F2NO/c21-17-10-6-15(7-11-17)20(19(23)24,14-4-2-1-3-5-14)16-8-12-18(22)13-9-16/h1-13H,(H2,23,24)

2,2-bis(4-fluorophenyl)-2-phenylacetamide

ICA-17043; ICA 17043; Senicapoc; 289656-45-7; 2,2-bis(4-fluorophenyl)-2-phenylacetamide; ICA-17043; MFCD09027349; Senicapoc (USAN); Senicapoc [USAN]; TS6G201A6Q; ICA17043

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~154.64 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.73 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。