Soyasaponin Ab

目录号: V33681 纯度: ≥98%
Soyasaponin Ab 是一种大豆皂苷,通过下调 3T3-L1 脂肪细胞中的 PPARγ 发挥抗肥胖作用。
Soyasaponin Ab CAS号: 118194-13-1
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
Soyasaponin Ab 是一种大豆皂苷,通过下调 3T3-L1 脂肪细胞中的 PPARγ 发挥抗肥胖作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) (suppresses transcriptional activity) [1]
CCAAT-enhancer-binding protein alpha (C/EBPα) (suppresses expression) [1]
体外研究 (In Vitro)
在 3T3-L1 前脂肪细胞中,Soyasaponin Ab(浓度为 25、50 和 100 µM)在为期 8 天的脂肪细胞分化过程中,剂量依赖性地抑制脂质积累和甘油三酯含量。用 25、50 和 100 µM 的 Soyasaponin Ab 处理,分别将脂质积累减少高达 45%、50% 和 70%。[1]
定量实时 PCR 检测显示,在完全分化(第8天)的 3T3-L1 脂肪细胞中,Soyasaponin Ab(50 和 100 µM)显著抑制了关键成脂转录因子 PPARγ 和 C/EBPα 的 mRNA 表达。[1]
蛋白质印迹分析显示,在完全分化的 3T3-L1 脂肪细胞中,Soyasaponin Ab(50 和 100 µM)显著抑制了 PPARγ 和 C/EBPα 的蛋白表达。[1]
在使用转染了 PPRE-荧光素酶报告基因和 PPARγ 质粒的 HEK 293T 细胞进行的荧光素酶报告基因实验中,用 Soyasaponin Ab(25、50 和 100 µM,处理 24 小时)处理可剂量依赖性地显著抑制 PPARγ 的转录活性。[1]
在完全分化的 3T3-L1 脂肪细胞中进行定量实时 PCR 分析表明,用 Soyasaponin Ab(50 和 100 µM)处理可显著降低多种成脂标志基因的 mRNA 表达,包括脂联素、脂肪细胞决定与分化因子1/固醇调节元件结合蛋白1c (ADD1/SREBP1c)、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白2 (aP2)、脂肪酸合酶 (Fas) 和抵抗素。[1]
细胞实验
细胞毒性实验(MTT法): 将 3T3-L1 细胞以每孔 5 x 10³ 个细胞的密度接种于 100 µL 培养基中。一天后,在 37°C、5% CO₂ 的加湿气氛中,用不同浓度(12.5 至 200 µM)的 Soyasaponin Ab 处理细胞 24 小时。向每孔加入 MTT 溶液(5 mg/mL,溶于 PBS),孵育 3 小时。吸弃培养基,向每孔加入 0.1 mL 缓冲二甲基亚砜以溶解甲臜晶体。使用酶标仪在 540 nm 处测量吸光度。在浓度高达 200 µM 时未观察到显著的细胞毒性作用。[1]
脂肪细胞分化和脂质积累实验(油红O染色): 将 3T3-L1 前脂肪细胞培养至完全汇合,然后用起始培养基(含胰岛素、地塞米松和 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)诱导分化 2 天,随后使用进展培养基(含胰岛素)和维持培养基。在 8 天的分化期间,用不同浓度(25、50、100 µM)的 Soyasaponin Ab 处理细胞。第8天,洗涤细胞,用 3.7% 甲醛固定,用 0.35% 油红 O 染料(溶于异丙醇)染色 30 分钟,洗涤后,将染色的脂滴溶解在含有 4% Nonidet P-40 的异丙醇中。通过测量 510 nm 处的吸光度来定量甘油三酯含量。[1]
荧光素酶报告基因实验: 将 HEK 293T 细胞接种于 24 孔板中,培养 24 小时后进行转染。使用脂质转染试剂将细胞转染 200 ng PPRE-荧光素酶报告质粒、50 ng pcDNA3-hPPARγ 质粒和 20 ng pRLSV40 质粒。转染 24 小时后,用 Soyasaponin Ab(25、50、100 µM)处理细胞 24 小时。使用双荧光素酶报告基因检测系统测量荧光素酶活性,相对荧光素酶活性通过海肾荧光素酶活性进行归一化。[1]
定量实时 PCR: 使用 RNA 提取试剂盒从处理过的 3T3-L1 细胞中提取总 RNA。使用 1 µg RNA 通过逆转录合成 cDNA。使用基因特异性引物和 SYBR Premix Ex Taq 系统在实时 PCR 仪上扩增新合成的 cDNA。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH) 作为内参。靶基因(PPARγ、C/EBPα、脂联素、ADD1/SREBP1c、aP2、Fas、抵抗素)的 mRNA 水平相对于 GAPDH 进行定量。[1]
蛋白质印迹分析: 用 PBS 洗涤处理过的 3T3-L1 细胞,并在含有蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液中冰上裂解 30 分钟。裂解物离心后收集上清液。蛋白质样品(每份 50 µg)通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并转移至硝酸纤维素膜上。封闭后,膜与针对 PPARγ、C/EBPα 或 Actin 的一抗孵育过夜,然后与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育。使用增强化学发光检测试剂检测蛋白条带。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在采用 3T3-L1 细胞进行的 MTT 细胞毒性试验中,大豆皂苷抗体在浓度为 12.5 至 200 µM 的范围内处理 24 小时后,未显示出明显的细胞毒性作用。[1]
参考文献

[1]. Soyasaponins Aa and Ab exert an anti-obesity effect in 3T3-L1 adipocytes through downregulation of PPARγ. Phytother Res. 2015 Feb;29(2):281-7.

其他信息
大豆中已报道存在大豆皂苷Ab,并有相关数据。
大豆皂苷Ab是一种A组大豆皂苷,是一种双糖苷,其两个糖链分别连接在大豆皂苷元A的C-3和C-22羟基上。其化学结构与大豆皂苷Aa的区别在于C-22位末端糖基的不同:大豆皂苷Ab具有2,3,4,6-四乙酰葡萄糖基。[1]
大豆皂苷Ab是从大豆品种大元光的种子下胚轴中纯化得到的。经液相色谱-光电二极管阵列-串联质谱分析,分离得到的化合物纯度大于95%。 [1]
该研究表明,大豆皂苷Ab在体外通过下调关键的脂肪生成转录因子PPARγ和C/EBPα以及几个下游脂肪生成标志基因,抑制脂肪细胞分化和脂质积累,从而发挥抗肥胖作用。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C67H104O33
分子量
1437.5229
精确质量
1436.645
CAS号
118194-13-1
PubChem CID
102004833
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.5±0.1 g/cm3
折射率
1.620
LogP
6.61
tPSA
497.79
氢键供体(HBD)数目
14
氢键受体(HBA)数目
33
可旋转键数目(RBC)
23
重原子数目
100
分子复杂度/Complexity
2960
定义原子立体中心数目
35
SMILES
CC(=O)OC[C@@H]1[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H](O1)O[C@H]2[C@H](CO[C@H]([C@@H]2O)O[C@@H]3[C@@H](C(C[C@@H]4[C@]3(CC[C@@]5(C4=CC[C@H]6[C@]5(CC[C@@H]7[C@@]6(CC[C@@H]([C@]7(C)CO)O[C@H]8[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O8)C(=O)O)O)O)O[C@H]9[C@@H]([C@H]([C@H]([C@H](O9)CO)O)O)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O1)CO)O)O)O)C)C)C)C)(C)C)O)O)OC(=O)C)OC(=O)C)OC(=O)C
InChi Key
YZNCIXVBVQRGQN-YUTHWCJWSA-N
InChi Code
InChI=1S/C67H104O33/c1-26(71)87-24-35-48(89-27(2)72)52(90-28(3)73)53(91-29(4)74)61(94-35)96-47-32(75)23-88-57(46(47)83)100-55-54(84)62(5,6)20-31-30-12-13-37-64(8)16-15-38(65(9,25-70)36(64)14-17-67(37,11)66(30,10)19-18-63(31,55)7)95-60-51(44(81)43(80)49(97-60)56(85)86)99-59-50(42(79)40(77)34(22-69)93-59)98-58-45(82)41(78)39(76)33(21-68)92-58/h12,31-55,57-61,68-70,75-84H,13-25H2,1-11H3,(H,85,86)/t31-,32-,33+,34+,35+,36+,37+,38-,39+,40-,41-,42-,43-,44-,45+,46+,47-,48+,49-,50+,51+,52-,53+,54-,55+,57-,58-,59-,60+,61-,63+,64-,65+,66+,67+/m0/s1
化学名
(2S,3S,4S,5R,6R)-6-[[(3S,4S,4aR,6aR,6bS,8aR,9S,10R,12aS,14aR,14bR)-9-[(2S,3R,4S,5S)-3,5-dihydroxy-4-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-10-hydroxy-4-(hydroxymethyl)-4,6a,6b,8a,11,11,14b-heptamethyl-1,2,3,4a,5,6,7,8,9,10,12,12a,14,14a-tetradecahydropicen-3-yl]oxy]-5-[(2S,3R,4S,5R,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxyoxane-2-carboxylic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~69.56 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (1.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (1.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (1.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.6956 mL 3.4782 mL 6.9564 mL
5 mM 0.1391 mL 0.6956 mL 1.3913 mL
10 mM 0.0696 mL 0.3478 mL 0.6956 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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