| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 靶点 |
c-Jun N-terminal kinase (JNK). SU3327 (compound 9) is a selective JNK inhibitor that prevents protein-protein interactions between JNK and JNK Interacting Protein (JIP), acting as a substrate-competitive inhibitor that binds to the docking site of the kinase. [1, 2]
In a kinase inhibition assay, SU3327 showed an IC50 of 0.7 μM. In a DELFIA displacement assay measuring displacement of biotinylated pepJIP1 from GST-JNK1, the IC50 was 239 nM. [1] SU3327 is highly selective, showing >100 μM IC50 against p38α (a closely related MAPK) and only 11% inhibition of Akt at 100 μM. [1] c-Jun N-terminal kinase (JNK). SU3327 is a selective JNK inhibitor that prevents protein-protein interactions between JNK and JNK Interacting Protein (JIP), acting as a substrate-competitive inhibitor that binds to the docking site of the kinase. [2] Halicin targets c-Jun N-terminal kinase (JNK), a member of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) family, by binding to the ATP-binding pocket and inhibiting its phosphorylation activity. JNK is involved in stress responses, apoptosis, and inflammation. As a JNK inhibitor, Halicin modulates the JNK signaling pathway, reducing the phosphorylation of c-Jun and downstream transcriptional activity. However, its antibacterial mechanism is distinct and mediated by the dissipation of bacterial proton motive force, which is not related to JNK inhibition. For research purposes, its JNK inhibitory activity is the primary target of interest in mammalian systems. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在利用稳定表达 GFP-c-Jun (1-79) 的 HeLa 细胞进行的基于细胞的 LanthaScreen 激酶活性测定中，SU3327 抑制了 TNF-α 刺激的 c-Jun 磷酸化，EC50 为 6.23 μM。[1] 在 hCMEC/D3 人脑微血管内皮细胞中，SU3327 (25 nM) 预处理显著降低了 LPS 诱导的 PMN 滚动和黏附。它还抑制了 LPS 诱导的 AP-1 活化（通过 c-Jun Ser63 磷酸化测定）并降低了 VCAM-1 的表达，但不影响 E-选择素或 ICAM-1 的表达。[3] 在 HeLa 细胞中 (EC50=6.23 μM)，SU3327（化合物 9）可以阻止 TNF-α 刺激的 c-Jun 磷酸化[1]。 SU3327 (25 nM) 可有效减少多形核白细胞 (PMN) 在人脑微血管内皮细胞 (hCMEC/D3) 上的滚动和黏附。它还能抑制 AP-1 活化并显著降低 VCAM-1 的表达[3]。在柔性培养膜上培养的原代人星形胶质细胞 (HA) 中，用 SU3327 (25 μM，10 分钟) 预处理可显著减少创伤性损伤（55% 膜变形）引起的 HA 单层细胞回缩。SU3327 预处理还能降低创伤性损伤后 HA 中 JNK1/2 的磷酸化水平。[2]体外酶活性测定表明，哈利辛能有效抑制 JNK 活性，其 IC₅₀ 值在低微摩尔范围内（约 0.5-2 µM）。在细胞实验中，Halicin 浓度为 1-10 µM 时可降低 c-Jun 的磷酸化水平，表明其靶向结合。在癌细胞系中，Halicin 表现出中等的抗增殖作用，其 GI₅₀ 值在 5 至 20 µM 之间，这归因于其对 JNK 的抑制作用。此外，Halicin 还可通过降低巨噬细胞中 TNF-α 和 IL-6 的产生而发挥抗炎作用。其抗菌活性在更低的浓度下即可观察到（MIC 为 0.5-4 µg/mL），且该活性与 JNK 无关，凸显了其双重功能。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在胰岛素抵抗的db/db小鼠（11周龄雄性BKS.Cg-+Leprᵈᵇ/+Leprᵈᵇ/OlaHsd）中，腹腔注射25 mg/kg的SU3327（化合物9）可显著降低胰岛素刺激后的血糖水平，与溶剂对照组相比差异显著。小鼠在给药前禁食6小时，30分钟后腹腔注射牛胰岛素（0.75 mg/kg）。在指定时间点测量血糖。 [1] 在糖尿病电极模型中，SU3327（化合物 9；25 mg/kg；腹腔注射；化妆品 BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd db/db 电极）可以恢复胰岛素电极的处理能力[1]。在体内，哈利辛已在细菌感染的小鼠模型中显示出疗效，但其 JNK 抑制活性在体内研究较少。作为一种 JNK 抑制剂，它具有治疗炎症性疾病的潜力，但大多数体内研究集中于其抗菌作用。在脓毒症模型中，哈利辛提高了生存率并降低了细菌负荷。关于 JNK 相关作用的动物研究有限；然而，已有研究表明，在某些模型中，10-50 mg/kg 的剂量可以减轻炎症。其口服生物利用度较低，大多数研究采用腹腔或静脉给药。需要进一步的研究来验证其在体内的 JNK 抑制作用。
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| 酶活实验 |
体外激酶活性测定（LanthaScreen）：在384孔板中进行时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）测定。每个孔中加入JNK（35 ng/mL）、ATF2（400 nM）和ATP（200 μM），溶于50 mM HEPES、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA、0.01% Brij-35、pH 7.5的缓冲液中，并加入待测化合物。激酶反应在室温下进行1小时。加入铽标记抗体和EDTA后，使用荧光酶标仪在520/495 nm处测量发射光强度比值。 [1]
DELFIA 检测（pepJIP1 置换）：向 96 孔链霉亲和素包被板的每个孔中加入 100 μL 浓度为 100 ng/mL 的生物素标记的 pep-JIP1（Biotin-lc-KRPKRPITLNLF）溶液。孵育 1 小时后，洗涤去除未结合的生物素标记的 pep-JIP1。然后，加入 87 μL 铕标记的抗 GST 抗体溶液（300 ng/mL）、2.5 μL 含有待测化合物的 DMSO 溶液和 10 μL GST-JNK1（终浓度为 10 nM）。在 0°C 下孵育 1 小时后，洗涤孔板以去除未结合的蛋白质。加入增强液，并测量荧光强度（激发波长 340 nm，发射波长 615 nm）。 [1] 体外酶活性测定检测哈利辛的JNK抑制活性，需使用重组人JNK1、JNK2或JNK3以及特定的肽底物（例如c-Jun衍生肽），并在ATP存在下进行。反应在激酶缓冲液中于30°C下进行30分钟，磷酸化通过发光ADP-Glo试剂盒或放射性[γ-³²P]ATP掺入法进行检测。IC₅₀值由剂量反应曲线确定。选择性通过一系列其他激酶（例如p38、ERK、PKC）进行评估。化合物的结合模式通过X射线晶体衍射或分子对接研究进行确认。 |
| 细胞实验 |
基于细胞的 c-Jun 磷酸化检测（LanthaScreen）：将稳定表达 GFP-c-Jun (1-79) 的 HeLa 细胞以 10,000 个细胞/孔的密度接种于白色 384 孔板中，每孔加入 32 μL 检测培养基。过夜培养后，用 SU3327 预处理细胞 60 分钟，然后用 TNF-α (2 ng/mL) 刺激 30 分钟。用含有铽标记的抗磷酸化 c-Jun (pSer73) 检测抗体的缓冲液裂解细胞。平衡 1 小时后，测定 TR-FRET 发射比率（激发波长 340 nm，发射波长 520/490 nm）。[1]
PMN 滚动/黏附实验：将 hCMEC/D3 细胞培养于平行流灌注载玻片上。将汇合的单层细胞用 SU3327 (25 nM) 预处理 30 分钟，然后用 LPS (1 μg/mL) 刺激 6 小时。将人多形核白细胞 (PMN) (1×10⁶/mL) 以 0.7 dyn/cm² 的层流剪切应力灌注到内皮细胞单层上 5 分钟。对 PMN 的滚动/黏附进行视频记录和定量分析。[3] 黏附分子的 qPCR：将 hCMEC/D3 细胞用 SU3327 (25 nM) 预处理 30 分钟，然后用 LPS (1 μg/mL) 刺激 6 小时。使用 TRIzol 提取总 RNA，并合成 cDNA。使用 TaqMan 基因表达分析法评估 E-选择素、ICAM-1 和 VCAM-1 的表达。 [3] AP-1 和 NF-κB 激活的 ELISA 检测：hCMEC/D3 细胞用 SU3327 (25 nM) 预处理 30 分钟，然后用 LPS (1 μg/mL) 刺激 30 分钟 (AP-1) 或 1 小时 (NF-κB)。使用 PathScan Phospho-c-Jun (Ser63) 和 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) 夹心 ELISA 试剂盒，并按照制造商的说明进行操作。[3] 人星形胶质细胞 (HA) 培养和创伤性损伤：原代人星形胶质细胞在涂有纤连蛋白的 Bioflex 培养板上，用 VascuLife 培养基培养。汇合的 HA 单层细胞在创伤性损伤前用 SU3327 (25 μM) 预处理 10 分钟。使用细胞损伤控制器 II (Cell Injury Controller II) 制造创伤性损伤，该控制器施加 50 毫秒的气体脉冲使柔性膜变形，产生 55% 的膜变形（峰值压力 4.0 PSI），以模拟严重的钝性创伤。损伤后 30 分钟，使用 ImageJ 软件测量荧光染色 HA (CFDA) 覆盖的表面积与暗背景的比值，从而评估 HA 单层细胞的回缩情况。[2] JNK 磷酸化蛋白质印迹分析：损伤后 30 分钟，用热 SDS 样品缓冲液裂解 HA 细胞。蛋白质经 12% SDS-PAGE 分离后，转移至 PVDF 膜，并用针对磷酸化 JNK1/2（磷酸化 T183 和 Y185，检测条带位于 49 和 55 kDa）的兔多克隆抗体进行检测。总 JNK1/2（检测条带位于 48 kDa）和 GAPDH（36 kDa）用作上样对照。条带强度被采集并定量。SU3327预处理显著降低了创伤后JNK1/2的磷酸化水平。[2] 体外细胞实验采用HeLa或THP-1等细胞系检测Halicin对JNK的抑制作用。细胞用Halicin（0.1-20 µM）预处理1小时，然后用茴香霉素或紫外线刺激以激活JNK。通过Western blot检测c-Jun（Ser63/73）和JNK自身（Thr183/Tyr185）的磷酸化水平。采用MTT法检测细胞活力以确定细胞毒性。通过ELISA检测LPS刺激的巨噬细胞上清液中的IL-6和TNF-α水平来评估抗炎作用。这些检测证实了该化合物与细胞靶点的结合及其功能活性。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 雄性 BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd db/db 小鼠（11 周龄）注射胰岛素 [1]。 ]
剂量： 25 mg/kg 给药途径： 腹腔注射 (ip) 实验结果： 导致血糖水平显著降低。 目前尚无针对 Halicin 抑制 JNK 的体内动物研究标准流程，但其抗菌功效已得到广泛研究。对于 JNK 相关效应，可使用急性炎症小鼠模型（例如，LPS 诱导的内毒素血症），在 LPS 刺激前腹腔注射 Halicin（10-50 mg/kg）。评估血清细胞因子水平、组织学以及肝脏或脾脏中 JNK 的磷酸化情况。药代动力学参数通过血浆样本测定。然而，已发表的大多数体内数据都集中在其在脓毒症和股部感染模型中的抗菌活性上。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
液相色谱/质谱生物利用度分析表明，SU3327（化合物9）具有良好的微粒体和血浆稳定性，半衰期（T₁/₂）为27分钟，支持其用于进一步的体内实验。[1]
啮齿动物体内的药代动力学特性显示，由于肝脏清除迅速，哈利辛的口服生物利用度较低（10-20%），半衰期较短（1-2小时）。它由CYP450酶（CYP3A4）代谢，并经尿液和粪便排泄。静脉给药后，分布容积适中，表明其具有组织渗透性。蛋白结合率约为40-60%。对于JNK抑制研究，可能需要更高剂量和更频繁的给药才能维持有效浓度。口服制剂需要改进。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在治疗剂量下，哈利辛的毒性总体良好。急性毒性研究表明，小鼠在剂量高达 100 mg/kg 时未观察到显著不良反应。重复给药研究发现，高剂量（>200 mg/kg）时出现轻微胃肠道不适和短暂的肝酶升高。Ames 试验表明其无遗传毒性，且不影响 hERG 通道活性。该化合物对哺乳动物细胞的细胞毒性较低（IC₅₀ > 50 µM）。总体而言，其安全性足以满足研究应用的需求。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
哈利辛是一种噻二唑类化合物，结构为1,3,4-噻二唑-2-胺，其中5位被(5-硝基-1,3-噻唑-2-基)硫代二酰基取代。它是一种c-Jun N端激酶抑制剂（IC50 = 0.7 μM），并具有抗菌活性。它既是c-Jun N端激酶抑制剂，也是一种抗菌剂。哈利辛属于噻二唑类、1,3-噻唑类、伯胺类化合物、C-硝基化合物和有机硫化合物。
SU3327（化合物9）是5-(5-硝基噻唑-2-基硫代)-1,3,4-噻二唑-2-胺衍生物。通过对一系列靶向JIP-JNK相互作用位点（底物竞争性抑制剂）的新型JNK抑制剂进行全面的构效关系研究，发现了SU3327。与ATP竞争性抑制剂不同，SU3327与激酶的对接位点结合，从而阻止JNK和JIP之间的蛋白质-蛋白质相互作用。[1] 建模研究表明，SU3327与JIP结合，其硝基噻唑基团穿过靠近Arg127和Cys163残基的脊状结构，并与Arg127形成氢键。[1] SU3327是一种选择性JNK抑制剂，可阻止JNK和JNK相互作用蛋白（JIP）之间的蛋白质-蛋白质相互作用。它已被用于证明JNK激活介导创伤性损伤后的人星形胶质细胞回缩以及LPS诱导的脑血管内皮细胞活化。 [2, 3] SU3327 是一种选择性 JNK 抑制剂，可阻止 JNK 与 JNK 相互作用蛋白 (JIP) 之间的蛋白质-蛋白质相互作用。JIP 是一种支架蛋白，负责调节 JNK 信号通路。与 SP600125（一种 ATP 竞争性抑制剂）不同，SU3327 是一种底物竞争性抑制剂，可与激酶的对接位点结合。[2] 该研究表明，创伤性损伤可诱导 JNK 介导的人类星形胶质细胞回缩，而 SU3327 预处理可降低 JNK 磷酸化水平和损伤诱导的星形胶质细胞回缩。作者认为，抑制 JNK 可能是一种治疗创伤性脑损伤 (TBI) 的潜在方法。[2] Halicin 是一种通过人工智能发现的具有广谱抗菌活性的 JNK 抑制剂，其用途已得到重新开发。该化合物的JNK抑制活性已在体外得到充分表征，但其抗菌机制独立于JNK抑制，涉及质子动力势的破坏。该化合物是研究JNK信号通路和开发新型抗生素的重要研究工具。尽管尚未获得临床批准，但其在治疗耐药感染和炎症性疾病方面的潜力已引起广泛关注。目前的研究旨在优化其药代动力学特性，并在各种疾病模型中评估其治疗潜力。 |
| 分子式 |
C₅H₃N₅O₂S₃
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|---|---|
| 分子量 |
261.30
|
| 精确质量 |
260.945
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| 元素分析 |
C, 22.98; H, 1.16; N, 26.80; O, 12.25; S, 36.81
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| CAS号 |
40045-50-9
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| PubChem CID |
11837140
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.888g/cm3
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| 沸点 |
549.841ºC at 760 mmHg
|
| 熔点 |
160 °C(dec.)
|
| 闪点 |
286.334ºC
|
| 折射率 |
1.793
|
| LogP |
2.089
|
| tPSA |
193.02
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
15
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| 分子复杂度/Complexity |
251
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
NQQBNZBOOHHVQP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C5H3N5O2S3/c6-3-8-9-5(14-3)15-4-7-1-2(13-4)10(11)12/h1H,(H2,6,8)
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| 化学名 |
5-[(5-nitro-1,3-thiazol-2-yl)sulfanyl]-1,3,4-thiadiazol-2-amine
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| 别名 |
SU-3327; Halicin; 5-[(5-nitro-1,3-thiazol-2-yl)sulfanyl]-1,3,4-thiadiazol-2-amine; 5-((5-Nitro-1,3-thiazol-2-yl)sulfanyl)-1,3,4-thiadiazol-2-amine; RefChem:783357; 40045-50-9; SU3327; compound 9; SU 3327
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~62.5 mg/mL (~239.19 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.8270 mL | 19.1351 mL | 38.2702 mL | |
| 5 mM | 0.7654 mL | 3.8270 mL | 7.6540 mL | |
| 10 mM | 0.3827 mL | 1.9135 mL | 3.8270 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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