FKBP12; calcineurin; macrocyclic lactone

FK-506 和环孢菌素 A 阻断细胞质成分的易位，而不影响 T 淋巴细胞核亚基的合成。 [1] K-506 抑制 Ca(2+) 依赖性过程，该过程是诱导白细胞介素 2 转录所必需的，从而阻止 T 细胞增殖。 [2] 亲环蛋白和 FK 506 结合蛋白 (FKBP) 是 FK 506 结合的两个不同的细胞内蛋白（亲免蛋白）家族。在阻止激活的 T 细胞产生白细胞介素 2 的药物浓度下，FK-506 特异性抑制细胞钙调神经磷酸酶。 [3] 通过阻断涉及淋巴因子表达、细胞凋亡和脱颗粒的早期钙相关事件的相同子集，FK-506 和 CsA 对细胞具有几乎相同的生物学效应。 FK-506 结合蛋白 (FKBP) 是细胞内受体家族，是 FK-506 结合的地方。 [4]

对大鼠针对痛觉过敏和异常性疼痛刺激的行为疼痛评估显示，FK-506 会导致爪子和尾巴缩回阈值增加。此外，FK-506 还可降低血清硝酸盐和硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS) 水平。它还可以降低大鼠组织髓过氧化物酶 (MPO) 和总钙水平，同时提高组织还原型谷胱甘肽水平。在缺血再灌注 (I/R) 大鼠中，FK-506 可以减少神经元水肿和轴突变性的进展。 [5]

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本研究旨在阐明他克莫司（FK506）和C-X-C趋化因子受体4型（CXCR4）对肝细胞癌（HCC）生长和转移的影响，CXCR4是基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）的特异性受体。用不同浓度的FK506、AMD3100或生理盐水（NS）处理后，通过MTT法测量Morris大鼠肝癌3924A（MH3924A）细胞的增殖，用免疫组织化学分析CXCR4的表达，分别用transwell法和扫描电镜研究细胞的形态变化和侵袭性。此外，使用August Copenhagen Irish大鼠模型植入肿瘤，通过免疫组织化学检测肿瘤的体内病理变化和侵袭性、肿瘤组织中CXCR4的表达以及HCC邻近组织中SDF-1α的表达。在体外实验中，FK506（100‑1000µg/l）显著促进了MH3924A细胞的增殖（P<0.01），并增加了MH39224A细胞中CXCR4的表达，但没有显著意义（P>0.05）。相比之下，AMD3100对MH3924A细胞的增殖没有影响，但显著降低了CXCR4的表达（P<0.05）。FK506、SDF-1α、FK506+AMD3100、FK506+SDF-1α或FK506+AMDA3100+SDF-1β处理后，MH3924A细胞的侵袭性显著增强（P<0.01）。在体内，FK506治疗组和NS组的肿瘤重量（P=0.041）、淋巴结转移（P=0.002）、肺结节数量（P=0.012）、肿瘤组织中CXCR4的表达（P=0.048）和邻近组织中SDF-1α的表达（=0.026）存在显著差异。研究结果表明，FK506在体内促进MH3924A细胞的增殖以及CXCR4和SDF-1α的表达。因此，抑制CXCR4/SDF-1α复合物的形成可能会部分降低FK506对HCC的促进作用[4]。

他克莫司 (FK506) 抑制钙依赖性事件，例如 IL-2 基因转录、NO 合酶激活、细胞脱颗粒和细胞凋亡。他克莫司还通过与激素受体复合物中包含的 FKBP 结合，防止降解，从而增强糖皮质激素和黄体酮的作用。该药物可以以与 CsA 类似的方式增强 TGFβ-1 基因的表达。他克莫司抑制 T 细胞受体连接后的 T 细胞增殖。低浓度他克莫司(FK506,10 μg/L)处理对MH3924A细胞的增殖没有显着影响(P=0.135)。高浓度他克莫司（100-1,000 μg/L）处理后，MH3924A细胞增殖显着增强（P<0.01）。但不同浓度的AMD3100与100 μg/L他克莫司合用时，MH3924A细胞体外增殖能力增强（P<0.01）。

细胞处理和裂解。将免疫抑制剂以比细胞处理所需浓度高1000倍的浓度溶解在乙醇中。将细胞（106）悬浮在微量离心管中的1ml完全培养基中；加入1 Al乙醇或FK 506、CsA或雷帕霉素的乙醇溶液，将细胞在37°C下孵育1小时。用1 ml冰上磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞两次，并在50μl含50 mM Tris（pH 7.5）的低渗缓冲液中裂解；0.1mM EGTA；1mM EDTA；0.5mM二硫苏糖醇；以及每毫升50微克苯甲基磺酰氟、50克大豆胰蛋白酶抑制剂、5克亮肽和5微克抑肽酶。将裂解物在液氮中冷冻三个循环，然后在30°C下解冻，然后在4°C下以12000 x g的速度离心10分钟。[3]

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白细胞介素2（IL-2）检测。Jurkat细胞在96孔平底板中以每毫升106个细胞的速度在完全培养基中培养。在有或没有FK 506或CsA的情况下，用OKT3单克隆抗体（腹水1:4000稀释液）和每毫升2ng佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（PMA）刺激细胞24小时。通过测量细胞上清液的连续稀释液支持IL-2依赖性细胞系CTLL-20增殖的能力来定量IL-2的产生。一个单位定义为诱导CTLL-20细胞半最大增殖所需的重组人IL-2的量<直接添加到CTLL-20细胞中的FK 506和CsA不会抑制IL-2依赖性增殖。[3]

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免疫抑制剂环孢菌素A（CsA）和FK 506结合不同的细胞内蛋白家族（亲免疫蛋白），称为亲环蛋白和FK 506-结合蛋白（FKBPs）。最近，有研究表明，在体外，CsA-亲环素和FK 506-FKBP-12的复合物结合并抑制钙依赖性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶钙调神经磷酸酶的活性。我们研究了药物治疗对T淋巴细胞磷酸酶活性的影响。钙调神经磷酸酶在T细胞中表达，其活性可以在细胞裂解物中测量。在抑制活化T细胞中白细胞介素2产生的药物浓度下，CsA和FK 506都特异性抑制细胞钙调神经磷酸酶。雷帕霉素与FKBP结合，但表现出与FK506不同的生物活性，对钙调神经磷酸酶活性没有影响。此外，过量浓度的雷帕霉素明显通过从FKBP中置换FK506来阻止FK506的作用。这些结果表明，钙调神经磷酸酶是体内药物亲免疫素复合物的靶标，并确立了钙调神经蛋白酶在T细胞活化中的生理作用。[3]

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细胞在10nM FK 506存在下培养1小时并洗涤，测定裂解物中的磷酸酶活性。

小鼠；6周龄雄性C57BL/6J小鼠饲养于温度和湿度可控、12小时光照/12小时黑暗循环的房间内。在多剂量研究中，对结肠炎小鼠（n=10）口服给予他克莫司30 mg/kg，持续7天或14天（第10至23天）。对照组（n=10）和正常组（n=5）采用相同方案给予安慰剂。安慰剂或他克莫司的给药剂量均为10 mL/kg。末次给药后第二天，用二氧化碳吸入法处死小鼠。在单剂量研究中，对结肠炎小鼠（n=8）分别于第7、10、17或24天口服一次他克莫司或安慰剂。正常组（n=4）采用相同方案给予安慰剂。给药8小时后，小鼠被二氧化碳吸入处死。我们研究了钙调磷酸酶抑制剂他克莫司对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎的影响。在C57BL/6小鼠中，通过饮用水给予DSS溶液7天诱导结肠炎后，用他克莫司治疗小鼠。结肠炎症的严重程度根据单位长度结肠重量进行评估。同时，我们还检测了用他克莫司或载体治疗的小鼠分离的炎症结肠中释放的细胞因子（干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子（TNF）-α）的水平。与载体对照组小鼠相比，用他克莫司治疗14天可降低结肠炎小鼠结肠单位长度的重量，并抑制炎症结肠中IFN-γ和IL-1β的释放，但对其他细胞因子无影响。结肠单位长度的重量与IFN-γ或IL-1β的释放水平呈正相关。单次给予结肠炎小鼠他克莫司后，IFN-γ和IL-1β的释放也受到抑制。综上所述，这些结果表明他克莫司通过抑制炎症结肠中IFN-γ和IL-1β的释放来改善DSS诱导的结肠炎。[4]

吸收、分布和排泄
口服他克莫司后，其在胃肠道的吸收不完全且个体差异较大。成人肾移植患者的绝对生物利用度为17±10%；成人肝移植患者为22±6%；健康受试者为18±5%。儿童肝移植患者的绝对生物利用度为31±24%。在18名空腹健康志愿者中，单次口服3、7和10 mg他克莫司后，其血药峰浓度（Cmax）和药时曲线下面积（AUC）均呈剂量比例增加。空腹服用时，吸收速率和程度最高。进餐时间也会影响生物利用度。与空腹状态相比，餐后立即服用时，平均Cmax降低了71%，平均AUC降低了39%。餐后1.5小时给药时，平均Cmax较空腹状态降低了63%，平均AUC降低了39%。
在人体内，给药剂量中只有不到1%以原形经尿液排出。静脉给药时，粪便排泄占 92.6±30.7%，尿液排泄占 2.3±1.1%。
2.6 ± 2.1 L/kg [儿童肝移植患者]
1.07 ± 0.20 L/kg [肾功能不全患者，0.02 mg/kg/4 小时，静脉给药]
3.1 ± 1.6 L/kg [轻度肝功能不全，0.02 mg/kg/4 小时，静脉给药]
3.7 ± 4.7 L/kg [轻度肝功能不全，7.7 mg，口服]
3.9 ± 1.0 L/kg [重度肝功能不全，0.02 mg/kg/4 小时，静脉给药]
3.1 ± 3.4 L/kg [重度肝功能不全，8 mg，口服]口服]
0.040 L/hr/kg [健康受试者，静脉注射]
0.172 ± 0.088 L/hr/kg [健康受试者，口服]
0.083 L/hr/kg [成人肾移植患者，静脉注射]
0.053 L/hr/kg [成人肝移植患者，静脉注射]
0.051 L/hr/kg [成人心脏移植患者，静脉注射]
0.138 ± 0.071 L/hr/kg [儿童肝移植患者]
0.12 ± 0.04 (范围 0.06-0.17) L/hr/kg [儿童肾移植患者]
0.038 ± 0.014 L/hr/kg [肾功能不全患者，0.02 mg/kg/4 小时剂量，静脉注射]
0.042 ± 0.02 L/hr/kg [轻度肝功能损害，0.02 mg/kg/4 小时，静脉注射]
0.034 ± 0.019 L/hr/kg [轻度肝功能损害，7.7 mg，口服]
0.017 ± 0.013 L/hr/kg [重度肝功能损害，0.02 mg/kg/4 小时，静脉注射]
0.016 ± 0.011 L/hr/kg [重度肝功能损害，8 mg，口服]
本研究旨在评估母乳中他克莫司的浓度以及母乳喂养期间新生儿的暴露情况。本研究在两家三级转诊高危产科诊所开展了一项观察性队列研究。研究对象为 14 名在孕期和哺乳期服用他克莫司的妇女及其 15 名婴儿，其中 11 名婴儿为纯母乳喂养。采用液相色谱-串联质谱法分析他克莫司水平。在分娩时采集母亲和脐带血样本，并在条件允许的情况下，于产后采集母亲、婴儿和母乳样本。所有接受连续采样的婴儿他克莫司水平均有所下降，每日下降约15%（几何平均浓度比为0.85；95%置信区间为0.82-0.88；P<0.001）。与奶瓶喂养的婴儿相比，母乳喂养的婴儿他克莫司水平并未升高（中位数分别为1.3 μg/L [范围0.0-4.0] 和1.0 μg/L (范围0.0-2.3)；P=0.91）。估计母乳中他克莫司的最大吸收量为母亲剂量的0.23%（已根据体重调整）。婴儿通过母乳摄入的他克莫司量可忽略不计。母乳喂养似乎并不能减缓婴儿出生时较高水平的他克莫司血药浓度下降。
从8名实体器官移植受者分娩时采集母体和脐带（静脉和动脉）血样，以测量血液和血浆中他克莫司及其代谢物的结合态和游离态浓度。对其中一名受试者进行了母乳中他克莫司药代动力学评估。分娩时脐静脉血中他克莫司的平均浓度（±标准差）为6.6±1.8 ng/ml，相当于母体浓度（9.0±3.4 ng/ml）的71±18%（范围45-99%）。脐静脉血浆中他克莫司的平均浓度（0.09 ± 0.04 ng/ml）和游离药物浓度（0.003 ± 0.001 ng/ml）约为母体相应浓度的五分之一。脐动脉血中他克莫司的浓度为脐静脉血浓度的100 ± 12%。此外，婴儿通过母乳接触到的他克莫司剂量低于母亲体重调整剂量的0.3%。母体和脐带血中他克莫司浓度的差异可能部分归因于胎盘P-gp功能、更高的红细胞分布以及脐静脉血中更高的血细胞比容。
从6名产后早期（0-3天）的妇女中采集了10份初乳样本，平均药物浓度为0.79 ng/mL（范围0.3-1.9 ng/mL）。乳汁与母体血浆的中位比值为0.5。
他克莫司的血浆蛋白结合率约为99%，且在5-50 ng/mL的浓度范围内与浓度无关。他克莫司主要与白蛋白和α-1-酸性糖蛋白结合，并与红细胞高度结合。他克莫司在全血和血浆中的分布取决于多种因素，例如血细胞比容、血浆分离时的温度、药物浓度和血浆蛋白浓度。在美国的一项研究中，全血浓度与血浆浓度的比值平均为35（范围12至67）。基于血药浓度，没有证据表明间歇性局部应用他克莫司长达1年会在体内蓄积。与其他局部钙调磷酸酶抑制剂一样，目前尚不清楚他克莫司是否会分布到淋巴系统中。
有关他克莫司（共9项）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
他克莫司的代谢主要由CYP3A4介导，其次由CYP3A5介导。他克莫司代谢生成8种代谢物：13-去甲基他克莫司、31-去甲基他克莫司、15-去甲基他克莫司、12-羟基他克莫司、15,31-二去甲基他克莫司、13,31-二去甲基他克莫司、13,15-二去甲基他克莫司，以及一种涉及O-去甲基化和稠环形成的最终代谢物。在人肝微粒体孵育实验中，鉴定出的主要代谢物是13-去甲基他克莫司。体外研究表明，31-去甲基代谢物与他克莫司具有相同的活性。他克莫司主要通过混合功能氧化酶系统代谢，尤其是细胞色素P-450系统（CYP3A）。已提出一条可生成 8 种可能代谢物的代谢途径。体外实验表明，去甲基化和羟基化是主要的生物转化机制。在人肝微粒体孵育实验中鉴定出的主要代谢物是 13-去甲基他克莫司。体外研究表明，31-去甲基代谢物与他克莫司具有相同的活性。
Fk_506 已知的人体代谢物包括 13-O-去甲基他克莫司和 15-O-去甲基他克莫司。

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生物半衰期
在健康成年志愿者、肾移植患者、肝移植患者和心脏移植患者中，消除半衰期分别约为 35、19、12 和 24 小时。儿童肝移植患者的消除半衰期为 11.5±3.8 小时，儿童肾移植患者的消除半衰期为 10.2±5.0 小时（范围 3.4-25 小时）。
在一项对 6 名健康志愿者静脉注射放射性标记他克莫司的质量平衡研究中，……基于放射性计算的消除半衰期为 48.1±15.9 小时，而基于他克莫司浓度计算的消除半衰期为 43.5±11.6 小时。……口服给药时，基于放射性计算的消除半衰期为 31.9±10.5 小时，而基于他克莫司浓度计算的消除半衰期为 48.4±12.3 小时……。
……本文报告了一例非移植患者发生他克莫司中毒的病例。该患者的他克莫司剂量为2.1 mg/kg/天，连续服用4天（治疗剂量为0.03至0.05 mg/kg/天）。她的他克莫司消除半衰期为16.5小时，而健康志愿者的平均半衰期为34.2±7.7小时。

毒性概述
识别和用途：他克莫司为白色至类白色结晶性粉末。它是一种钙调磷酸酶抑制剂类免疫抑制剂，有多种制剂。他克莫司口服胶囊和静脉注射液均用于预防接受肝脏、肾脏或心脏移植患者的器官排斥反应。他克莫司外用软膏可作为二线疗法，用于非免疫功能低下成人和儿童中度至重度特应性皮炎的短期和非连续性慢性治疗。人体暴露和毒性：虽然大多数急性他克莫司过量（剂量高达预期剂量的30倍）无症状，所有患者均康复且无后遗症，但部分急性过量服用后出现不良反应，包括震颤、肾功能异常、高血压和外周水肿。接受他克莫司治疗的患者，在治疗剂量下，罹患淋巴瘤和其他恶性肿瘤（尤其是皮肤恶性肿瘤）的风险增加，罹患细菌、病毒、真菌和原虫感染（包括机会性感染）的风险也增加。这些感染可能导致严重的后果，甚至危及生命。虽然目前尚无针对孕妇的充分且对照良好的研究，但人类在妊娠期间使用他克莫司与新生儿高钾血症和肾功能障碍有关。动物研究：大鼠和狒狒在口服或静脉注射他克莫司后均表现出相似的毒理学特征。对于大鼠和狒狒，静脉注射后出现毒性的剂量均低于口服给药。大鼠出现毒性的剂量低于狒狒。主要靶器官为肾脏、胰岛和外分泌胰腺、脾脏、胸腺、胃肠道和淋巴结。此外，还观察到红细胞参数下降。他克莫司对大鼠和兔均有生殖和发育毒性。在大鼠中，长期口服高剂量他克莫司会导致性器官改变和青光眼/眼部病变。每日口服1和3.2 mg/kg他克莫司可引起明显的亲代毒性症状，并导致大鼠生育力和整体生殖功能改变。对生殖的影响包括部分胚胎死亡、着床数减少、着床后丢失率增加以及胚胎和后代存活率降低。在一项兔致畸性研究中，所有口服他克莫司剂量（0.1、0.32 或 1 mg/kg/天）均导致母体毒性，包括体重下降。0.32 和 1 mg/kg/天的剂量还导致发育毒性，例如着床后胚胎丢失率增加、存活胎儿数量减少以及形态变异发生率增加。在一项大鼠致畸性研究中，3.2 mg/kg/天的剂量观察到着床后胚胎丢失率增加。1 mg/kg/天的母体剂量导致 F1 代体重下降。3.2 mg/kg/天的母体剂量导致 F1 代体重下降、存活数量减少以及一些骨骼畸形。他克莫司在体外沙门氏菌和大肠杆菌细菌试验以及中国仓鼠肺细胞哺乳动物试验中均未表现出遗传毒性。在CHO/HGPRT试验（中国仓鼠卵巢细胞试验(CHO)，用于检测HGPRT基因座的正向突变）中未观察到体外致突变性，在小鼠体内致染色体断裂试验中也未观察到致突变性。他克莫司也不会在啮齿动物肝细胞中引起非计划性DNA合成。

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相互作用
在给定剂量的霉酚酸(MPA)产品中，与环孢素合用相比，普乐可复(Prograf)合用时MPA的暴露量更高，因为环孢素会阻断MPA的肠肝循环，而他克莫司不会。临床医生应注意，对于同时服用含霉酚酸酯（MPA）药物的患者，从环孢素换用普乐可复后，MPA暴露量可能增加。
葡萄柚汁会抑制CYP3A酶，导致他克莫司全血谷浓度升高，因此患者服用他克莫司期间应避免食用葡萄柚或饮用葡萄柚汁。
由于他克莫司主要由CYP3A酶代谢，已知抑制这些酶的药物或物质可能会升高他克莫司全血浓度。已知诱导CYP3A酶的药物可能会降低他克莫司全血浓度。当普乐可复与CYP3A抑制剂或诱导剂合用时，可能需要调整剂量并频繁监测他克莫司全血谷浓度。此外，应监测患者的不良反应，包括肾功能改变和QT间期延长。
维拉帕米、地尔硫卓、硝苯地平和尼卡地平抑制他克莫司的CYP3A代谢，可能增加他克莫司的全血浓度。当这些钙通道阻滞剂与他克莫司合用时，建议监测全血浓度并适当调整他克莫司的剂量。
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非人类毒性值
大鼠静脉注射LD50：23,600 μg/kg /他克莫司水合物/
大鼠口服LD50：134 mg/kg /他克莫司水合物/

[1]. Nature. 1991 Aug 29;352(6338):803-7.

[2]. Nature. 1992 Jun 25;357(6380):692-4.

[3]. Proc Natl Acad Sci U S A. 1992 May 1;89(9):3686-90.

[4]. Tacrolimus promotes hepatocellular carcinoma and enhances CXCR4/SDF 1α expression in vivo. Mol Med Rep. 2014 Aug;10(2):585-92.

治疗用途
免疫抑制剂
普乐可复适用于接受同种异体肾移植患者的器官排斥反应预防。建议普乐可复与硫唑嘌呤或吗替麦考酚酯 (MMF) 和肾上腺皮质激素联合使用。/美国产品标签/
普乐可复适用于接受同种异体肝移植患者的器官排斥反应预防。建议普乐可复与肾上腺皮质激素联合使用。建议所有接受普乐可复治疗的患者进行治疗药物监测。/美国产品标签/
普乐可复适用于接受同种异体心脏移植患者的器官排斥反应预防。建议普乐可复与硫唑嘌呤或吗替麦考酚酯 (MMF) 和肾上腺皮质激素联合使用。 /包含于美国产品标签/
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药物警告
/黑框警告/ 恶性肿瘤和严重感染。由于免疫抑制，淋巴瘤和其他恶性肿瘤（尤其是皮肤恶性肿瘤）的发生风险增加。对细菌、病毒、真菌和原虫感染（包括机会性感染）的易感性增加。只有具有免疫抑制治疗和器官移植患者管理经验的医生才能处方普乐可复。接受该药物治疗的患者应在配备充足实验室和辅助医疗资源的医疗机构接受治疗。负责维持治疗的医生应掌握患者随访所需的所有信息。
/黑框警告/ 警告：局部钙调神经磷酸酶抑制剂的长期安全性尚未确定。虽然尚未确定因果关系，但已有报道称，接受局部钙调神经磷酸酶抑制剂（包括普特彼软膏）治疗的患者中出现罕见的恶性肿瘤（例如皮肤癌和淋巴瘤）。因此：应避免任何年龄组长期连续使用局部钙调神经磷酸酶抑制剂（包括普特彼软膏），且仅应用于特应性皮炎患处；普特彼软膏不适用于2岁以下儿童；仅0.03%普特皮软膏适用于2-15岁儿童。
对于恶性或癌前皮肤病（例如皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）），应避免使用局部他克莫司治疗，因为这些疾病的临床表现可能与皮炎相似。
由于可能增加皮肤癌风险，建议使用局部他克莫司的患者通过穿着防护服和使用高倍防晒系数的广谱防晒霜来限制阳光或其他紫外线照射。
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药效学
他克莫司通过与免疫亲和素FKBP-12（FK506结合蛋白）结合形成新的复合物，从而降低肽基脯氨酰异构酶的活性。他克莫司可抑制T淋巴细胞信号转导和IL-2转录。他克莫司的活性与环孢素相似，但其排异反应发生率更低。他克莫司也被证实可有效局部治疗湿疹，尤其是特应性湿疹。它抑制炎症的方式与类固醇类似，但效力不如类固醇。他克莫司在皮肤科方面的一个重要优势是可直接用于面部；而外用类固醇不能用于面部，因为它们会显著变薄面部皮肤。在身体其他部位，外用类固醇通常是更好的治疗方法。环孢素A和FK506可抑制T细胞和B细胞活化以及其他对有效免疫反应至关重要的过程。在T淋巴细胞中，这些药物会干扰从T细胞抗原受体到协调免疫反应的细胞因子基因的信号传递过程中一个未知的步骤。 FK506 和环孢素的假定细胞内受体是顺反式脯氨酰异构酶。药物结合可抑制异构酶活性，但对其他脯氨酰异构酶抑制剂的研究以及对酵母中环孢素耐药突变体的分析表明，药物的作用并非源于异构酶活性的抑制，而是源于药物与异构酶之间抑制性复合物的形成。转录因子 NF-AT 对早期 T 细胞基因激活至关重要，它似乎是环孢素 A 和 FK506 的特异性靶点，因为在用这些药物处理的 T 细胞中，由该蛋白介导的转录被阻断，而对其他转录因子（如 AP-1 和 NF-κB）几乎没有影响。本文证明，当抗原受体发出信号诱导预先存在的胞质亚基转位至细胞核并与新合成的核亚基结合时，NF-AT 便会形成。 FK506 和环孢素 A 可阻断胞质组分的转位，而不影响核亚基的合成。[1]

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T 细胞受体 (TCR) 识别抗原后，会启动一系列事件，包括淋巴因子基因转录，尤其是白细胞介素-2 (IL-2) 的转录，最终导致 T 细胞活化。免疫抑制剂环孢素 A (CsA) 和 FK-506 通过抑制诱导 IL-2 转录所需的 Ca(2+) 依赖性事件来阻止 T 细胞增殖。FK-506 或 CsA 与其各自的细胞内结合蛋白形成的复合物可在体外抑制钙调蛋白依赖性蛋白磷酸酶钙调磷酸酶。这一观察结果与免疫抑制或药物毒性的药理学意义尚不明确。钙调磷酸酶虽然存在于淋巴细胞中，但尚未被认为参与 TCR 介导的淋巴因子基因活化或一般的转录调控。本文报道，转染钙调磷酸酶催化亚基可提高免疫抑制剂FK-506和CsA的半数抑制浓度（IC50），并且突变亚基可与佛波酯协同作用，以药物敏感的方式激活白细胞介素-2启动子。这些结果表明，钙调磷酸酶是T细胞受体（TCR）信号转导通路的一个组成部分，因为它在药物敏感的白细胞介素-2启动子激活中发挥作用。[2]

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免疫抑制剂环孢素A（CsA）和FK-506分别与不同的细胞内蛋白（免疫亲和素）家族结合，这些蛋白分别称为亲环蛋白和FK-506结合蛋白（FKBP）。最近的体外研究表明，CsA-环孢亲和素复合物和FK 506-FKBP-12复合物能够结合并抑制钙调磷酸酶（一种钙依赖性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶）的活性。我们研究了药物处理对T淋巴细胞中磷酸酶活性的影响。钙调磷酸酶在T细胞中表达，其活性可在细胞裂解液中测定。CsA和FK 506均能特异性抑制细胞内钙调磷酸酶的活性，且其药物浓度与抑制活化T细胞中白细胞介素2（IL-2）产生的浓度相当。雷帕霉素虽然也能与FKBP结合，但其生物活性与FK 506不同，对钙调磷酸酶的活性没有影响。此外，过量的雷帕霉素会抑制FK 506的作用，这可能是由于雷帕霉素将FK 506从FKBP上置换下来所致。这些结果表明，钙调磷酸酶是体内药物-免疫亲和素复合物的靶点，并确立了钙调磷酸酶在 T 细胞活化中的生理作用。[3]

C44H69NO12

804.0182

803.481

C, 57.92; H, 5.69; Cl, 3.64; F, 5.85; N, 7.19; O, 9.85; S, 9.87

104987-11-3

Tacrolimus monohydrate;109581-93-3;Tacrolimus-13C,d2;1356841-89-8

445643

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

871.7±75.0 °C at 760 mmHg

113-115°C

481.0±37.1 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.549

fungus Streptomyces tsukubaensis.

3.96

178.36

3

12

7

57

1480

14

O1[C@]2(C(C(N3C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]3([H])C(=O)O[C@]([H])(/C(/C([H])([H])[H])=C(\[H])/[C@]3([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]([H])([C@@]([H])(C3([H])[H])OC([H])([H])[H])O[H])[C@]([H])(C([H])([H])[H])[C@]([H])(C([H])([H])C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])=C([H])[H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[C@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[C@@]([H])([C@]1([H])[C@]([H])(C([H])([H])[C@@]2([H])C([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])=O)O[H])=O)=O)O[H] |c:78|

QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N

InChI=1S/C44H69NO12/c1-10-13-31-19-25(2)18-26(3)20-37(54-8)40-38(55-9)22-28(5)44(52,57-40)41(49)42(50)45-17-12-11-14-32(45)43(51)56-39(29(6)34(47)24-35(31)48)27(4)21-30-15-16-33(46)36(23-30)53-7/h10,19,21,26,28-34,36-40,46-47,52H,1,11-18,20,22-24H2,2-9H3/b25-19+,27-21+/t26-,28+,29+,30-,31+,32-,33+,34-,36+,37-,38-,39+,40+,44+/m0/s1

(1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-1,14-dihydroxy-12-[(E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy-3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-23,25-dimethoxy-13,19,21,27-tetramethyl-17-prop-2-enyl-11,28-dioxa-4-azatricyclo[22.3.1.04,9]octacos-18-ene-2,3,10,16-tetrone

FR900506;FR 900506; FR-900506; FK 506; FK-506; FK506; fujimycin; Prograf; Protopic; Advagraf; Astagraf XL; Fujimycin; 104987-11-3; Prograf; Tsukubaenolide; Tacrolimus anhydrous; Protopic; Anhydrous Tacrolimus;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~94 mg/mL (~116.9 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~83 mg/mL (~103.2 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.75 mg/mL (3.42 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.11 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，你可以将100 μL 25.0 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900 μL玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度： 5% DMSO+玉米油： 15mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。