Microbial Metabolite; Human Endogenous Metabolite; Caspase TNF-α

牛磺鹅脱氧胆酸 (TUDCA) 通过降低粘附分子表达来诱导 CD34+ HSC 从基质细胞解离。通过激活Akt和ERK，促进骨髓干细胞动员、分化为内皮祖细胞（EPC），并增强EPC增殖、侵袭和管形成[1]。 TCDCA 通过激活巨噬细胞内的 Caspase 级联，引起细胞凋亡过程，该过程可能涉及 PKC/JNK 信号通路[2]。

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TCDCA/Taurochenodeoxycholic acid诱导NR8383细胞凋亡[2]
我们首先研究了TCDCA是否对NR8383细胞具有凋亡作用。用不同浓度的TCDCA处理细胞后，我们使用流式细胞术测定NR8383细胞的凋亡百分比。基于FITC-Annexin V和PI双重染色，结果表明TCDCA处理提高了NR8383细胞的凋亡率。我们发现，10μM TCDCA治疗组NR8383细胞的凋亡率增加，100μM TCDCA治疗组甚至更高。因此，TCDCA以浓度依赖的方式诱导NR8383细胞凋亡（图1）。

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TCDCA/Taurochenodeoxycholic acid影响PKC基因表达和活性[2]
NR8383细胞用不同浓度的TCDCA（100μM、10μM、1μM）处理1小时，而对照NR8383电池仅在DMEM中孵育。通过qPCR检测PKC的基因表达水平，并使用抗PKCα和抗磷酸化PKCα抗体的Western Blot分析观察PKC的活性。结果显示，TCDCA（100μM、10μM和1μM）处理显著提高了PKC的mRNA表达水平（图2）。与对照组相比，100μM和1μM TCDCA治疗显著提高了PKC-α的表达水平（图3（B））。此外，TCDCA（100μM和10μM）处理显著增加了PKC-α的磷酸化（图3（C））。

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TCDCA/Taurochenodeoxycholic acid影响JNK基因表达和活性[2]
Gö6983是PKC的特异性抑制剂，用于证明TCDCA是否通过PKC/JNK信号通路诱导凋亡过程。对于单次处理，NR8383细胞用100μM、10μM和1μM的TCDCA或Gö6983（10μM）处理1小时。对于联合处理，NR8383细胞用Gö6982预处理1小时，然后与TCDCA（100μM，10μM，1μM）共处理一小时。通过qPCR检测JNK的基因表达水平，并用抗JNK1和抗磷酸化JNK1抗体通过Western Blot分析观察JNK的活性。结果表明，100μM、10μM和1μM TCDCA处理显著提高了JNK mRNA水平。此外，与对照组相比，PKC特异性抑制剂显著降低了JNK的mRNA表达水平。因此，这支持PKC作为JNK基因表达的关键信号的作用。与Gö6983单次治疗相比，TCDCA（100μm、10μm和1μm）/Gö6983联合治疗显著提高了JNK的mRNA表达水平（图4）。TCDCA（100μM、10μM和1μM）显著增强了JNK的表达水平。然而，与对照组相比，Gö6983单次治疗显著抑制了JNK蛋白的表达（图5（B））。此外，100μM和10μM TCDCA显著增加了磷酸化JNK的表达。同时，PKC特异性抑制剂显著阻止了JNK磷酸化表达，表明JNK是NR8383细胞中PKC激活的下游靶点（图5（C））。

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TCDCA/Taurochenodeoxycholic acid影响胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-8基因的表达和活性[2]
使用JNK的特异性抑制剂SP600125测试了TCDCA通过激活JNK诱导NR8383细胞凋亡的假设。JNK执行激活胱天蛋白酶级联的催化机制。对于单次处理，NR8383细胞用100μM、10μM和1μM的TCDCA或SP600125（10μM）处理1小时。对于联合处理，NR8383细胞用SP600125预处理1小时，然后与TCDCA（100μM，10μM，1μM）共处理一小时。采用qPCR检测Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平。我们发现TCDCA（100μM、10μM和1μM）以浓度依赖的方式显著增加了caspase-3和caspase-8的mRNA表达水平，而SP600125与对照组相比显著降低了其表达水平。同时，与SP600125单次治疗相比，TCDCA（100μM、10μM和1μM）/SP600125联合治疗显著提高了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-8的mRNA水平（图6）。

TUDCA 在神经元培养物中具有神经保护作用，对动物模型中的缺血再灌注具有有益作用，通过减弱内质网 (ER) 应激来减少梗塞面积和炎症。有机阴离子转运蛋白 (OATP) 2、OATP8 和 Na+-牛磺胆酸共转运多肽 (NTCP) 允许 TUDCA 进入靶细胞。通过诱导 MAP 激酶磷酸酶 1 (MKP1) 的表达，TUDCA 通过促进平滑肌细胞死亡来防止新生内膜增生。 TUDCA 还可以降低内质网应激，从而保护肝细胞并有助于重建葡萄糖稳态。 TUDCA 可加速体内新血管形成[1]。 TCDCA在0.05和0.1g/kg剂量下可显着降低模型小鼠的肺系数。 TCDCA可使肺纤维化小鼠肺组织中TNF-α、TIMP-2表达量极显着降低（P>0.01），MMP-9表达量极显着升高（P>0.01），MMP2不受影响。 TCDCA 剂量为 0.05 和 0.1g/kg 或更高。 TCDCA可极显着增加MMP-9的表达水平，而对MMP2无显着影响。因此，TCDCA 可抑制小鼠肺纤维化的发展[3]。

流式细胞术分析[2]
FITC膜联蛋白V和碘化普罗迪（PI）结合用于鉴定凋亡的存在。细胞用不同浓度的TCDCA（100μM、10μM、1μM）处理48小时，而对照NR8383细胞仅在DMEM中孵育。然后，根据制造商的协议执行所有步骤。简而言之，用预冷PBS洗涤NR8383细胞2-3次，离心并用1×结合缓冲液以1×106个细胞/ml的浓度重新悬浮。然后将100μl溶液即1×105个细胞转移到1.5ml离心管中，加入FITC-膜联蛋白V（终浓度5μl/100μl）和PI（终浓度为5μg/ml）。在25°C的黑暗中孵育20分钟后，使用BD FACSAria™流式细胞仪立即检测到细胞凋亡。每个样本收集约1×104个细胞，并使用Cell Lab Quanta™SC Analysis软件进行分析。

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RNA分离和qPCR检测[2]
定量实时PCR（qPCR）用于分析各种细胞因子的mRNA水平。将NR8383细胞加入24孔板中并培养过夜以进行附着。此后，细胞用不同的抑制剂预处理1小时，然后用TCDCA共处理另一个小时。使用Tripre™RNA试剂从24孔板中提取总细胞mRNA。通过琼脂糖凝胶电泳和OD260/280比值测定mRNA的质量。根据制造商的方案，使用PrimeScript™RT Master Mix试剂盒进行cDNA合成。使用SYBR®Premix Ex Tag™试剂盒在ViiA™7系统上扩增cDNA。简而言之，总共25μl反应混合物，包括2μl cDNA、12.5μl 2×SYBR®Premix Ex Tag™、1μl正向和反向特异性靶引物（10μM）和8.5μl ddH2O。qPCR热循环设置为95°C下30秒，然后是95°C上5秒的39个循环，Tm上30秒，95°C时15秒。使用特异性引物进行qPCR（表1）。所有数据均基于比较Ct公式计算（Liu等人，2011a，Liu等人，2011b），每个样本均用β-actin进行归一化。根据Ct值，基于以下方程式分析相对mRNA表达：2−ΔCt[ΔCt=Ct（PKC、JNK、caspase-3、caspase-8）-Ct（β-actin）]。熔解曲线保证了每个反应的纯度。

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Caspase-3和Caspase-8活性测定[2]
根据制造商的方案，使用caspase-Glo®3/7和caspase-Glo®8检测试剂盒检测胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-8的酶活性。简而言之，将NR8383细胞以6000个细胞/孔的密度加入白色96孔板中，一式三孔，培养过夜以附着。然后用JNK抑制剂预处理细胞1小时，然后用TCDCA共处理另一个小时。此后，将相同体积的Caspase-Glo®试剂加入每个孔中。样品在25°C下孵育，1小时后使用平板读数光度计检测发光。

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尽管健康受试者的血清胆汁酸浓度约为10µM，但从未对胆道系统和血管修复之间的串扰进行过研究。在本研究中，牛磺酰脱氧胆酸（TUDCA）通过降低粘附分子表达，诱导CD34（+）造血干细胞（HSC）与基质细胞分离。TUDCA增加了小鼠外周血（PB）中的CD34（+）/Sca1（+）祖细胞，以及人外周血中的CD33（+）、CD31（+。此外，TUDCA通过Akt激活增加CD34（+）HSC向EPC谱系细胞的分化。成纤维细胞活化蛋白通过Akt活化介导的TUDCA增加了EPC的侵袭。有趣的是，TUDCA通过增加粘附分子的表达，诱导内皮祖细胞整合到人主动脉内皮细胞中。在小鼠后肢缺血模型中，TUDCA通过将Flk-1（+）/CD34（+）和Sca-1（+）/c-kit（+）祖细胞募集到受损组织中来增强血管生成，从而促进血液灌注。在GFP（+）骨髓移植后肢缺血中，TUDCA诱导GFP（+/c-kit（+）祖细胞募集到缺血区域，导致血液灌注率增加。组织学分析表明，GFP（+）祖细胞从骨髓动员，整合到血管中，并分化为VEGFR（+）细胞。此外，TUDCA通过降低p53、p21和活性氧的水平以及增加一氧化氮来减少细胞衰老。与衰老的内皮祖细胞相比，在后肢缺血中移植TUDCA引发的衰老内皮祖细胞显著改善了血管再生。我们的研究结果表明，TUDCA通过增强骨髓干细胞/祖细胞的动员、向内皮祖细胞的分化以及与先前存在的内皮细胞的整合来促进新生血管形成[1]。

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我们以前的研究表明，牛磺脱氧胆酸（TCDCA）作为一种信号分子，具有明显的抗炎和免疫调节特性。在本研究中，我们初步探讨了TCDCA诱导NR8383细胞凋亡的潜在作用和可能的机制。采用流式细胞术分析细胞凋亡率。通过qPCR测定基因表达水平。用蛋白质印迹法检测蛋白激酶C（PKC）、Jun N-末端激酶（JNK）的表达及其磷酸化。我们用caspase-Glo®试剂观察了胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-8的活性。结果表明，TCDCA以浓度依赖的方式显著提高NR8383细胞的凋亡率。同时，TCDCA处理显著增强了PKC mRNA水平和活性。此外，TCDCA可提高JNK、胱天蛋白酶-3和胱天蛋白酶-8的mRNA表达水平和活性，而特异性抑制剂可显著降低它们的表达水平和活力。我们的结论是，TCDCA通过激活NR8383细胞中的caspase级联反应来促进细胞凋亡，PKC/JNK信号通路可能参与了这一过程。这些结果表明，TCDCA可能是治疗细胞凋亡相关疾病的潜在有效药物[2]。

The present study prepared the pulmonary fibrosis model in mice by using Bleomycin and carry out the investigations on the effects of taurochenodeoxycholic acid (TCDCA) in preventing pulmonary fibrosis in mice. Expression profiles of the bile acid receptors in the lung of mice FXRα and TGR5 were examined, and pulmonary coefficient, pathohistology as well as expression of TNF-α, MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 in pulmonary fibrosis mice. The results showed that FXRα and TGR5 simultaneously expressed in the lung of the mice; TCDCA in dosages of 0.05 and 0.1g/kg can extremely significantly decrease the pulmonary coefficient in the model mice (P>0.01), TCDCA in a dosage of 0.2g/kg significantly decreased the pulmonary coefficient in the model mice (P<0.05); TCDCA in dosages of 0.05 and 0.1g/kg significantly reduce the pathological damages on their lungs; TCDCA can extremely significantly decrease the expression levels of TNF-α and TIMP-2 in pulmonary tissues in the pulmonary fibrosis mice (P>0.01), the expression level of MMP-9 extremely significantly increased (P>0.01), while it has no significant effects on MMP2. The results as mentioned above indicated that TCDCA had antagonistic actions on pulmonary fibrosis in mice[3].

[1]. Stem Cells . 2015 Mar;33(3):792-805.

[2]. Eur J Pharmacol . 2016 Sep 5:786:109-115.

[3]. Pak J Pharm Sci . 2013 Jul;26(4):761-5.

Taurochenodeoxycholic acid is a bile acid taurine conjugate of chenodeoxycholic acid. It has a role as a mouse metabolite and a human metabolite. It is functionally related to a chenodeoxycholic acid. It is a conjugate acid of a taurochenodeoxycholate.
Taurochenodeoxycholic acid is an experimental drug that is normally produced in the liver. Its physiologic function is to emulsify lipids such as cholesterol in the bile. As a medication, taurochenodeoxycholic acid reduces cholesterol formation in the liver, and is likely used as a choleretic to increase the volume of bile secretion from the liver and as a cholagogue to increase bile discharge into the duodenum. It is also being investigated for its role in inflammation and cancer therapy.
Taurochenodeoxycholic acid has been reported in Homo sapiens and Trypanosoma brucei with data available.
A bile salt formed in the liver by conjugation of chenodeoxycholate with taurine, usually as the sodium salt. It acts as detergent to solubilize fats in the small intestine and is itself absorbed. It is used as a cholagogue and choleretic.

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Drug Indication
Taurochenodeoxycholic acid is likely indicated as a choleretic and cholagogue. It is also being investigated for its role in inflammation and cancer therapy.

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Mechanism of Action
Chenodeoxycholic acid is a primary bile acid in the liver that combines with taurine to form the bile acid taurochenodeoxycholic acid. In the bile, taurochenodeoxycholic acid is either a sodium (most) or potassium salt. Taurochenodeoxycholic acid is normally produced in the liver, and its physiologic function as a bile salt is to emulsify lipids such as cholesterol in the bile. As a medication, taurochenodeoxycholic acid reduces cholesterol formation in the liver, and is likely used as a choleretic to increase the volume of bile secretion from the liver and as a cholagogue to increase bile discharge into the duodenum. The mechanism of action of taurochenodeoxycholic acid in inflammation and cancer has yet to be determined.

C26H45NO6S

499.7036

499.296

516-35-8

Taurochenodeoxycholic acid sodium;6009-98-9;Taurochenodeoxycholic acid-d4 sodium;2410279-85-3

387316

White to off-white solid

1.2±0.1 g/cm3

1.552

2.1

132.31

4

6

7

34

858

10

S(C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]2([H])[C@]3([H])[C@@]([H])(C([H])([H])C4([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[C@]4(C([H])([H])[H])[C@]3([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]21C([H])([H])[H])O[H])O[H])=O)(=O)(=O)O[H]

BHTRKEVKTKCXOH-BJLOMENOSA-N

InChI=1S/C26H45NO6S/c1-16(4-7-23(30)27-12-13-34(31,32)33)19-5-6-20-24-21(9-11-26(19,20)3)25(2)10-8-18(28)14-17(25)15-22(24)29/h16-22,24,28-29H,4-15H2,1-3H3,(H,27,30)(H,31,32,33)/t16-,17+,18-,19-,20+,21+,22-,24+,25+,26-/m1/s1

2-[[(4R)-4-[(3R,5S,7R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonic acid

Taurochenodeoxycholic acid; TAUROCHENODEOXYCHOLIC ACID; TCDCA; 516-35-8; Taurochenodeoxycholate; Taurochenodesoxycholic acid; Chenyltaurine; Chenodeoxycholyltaurine; Taurine chenodeoxycholate; 12-Deoxycholyltaurine; 12-Deoxycholyltaurine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~99 mg/mL(~198.1 mM)
Water: ~99 mg/mL(~198.1 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (200.12 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。