| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
- TEAD1, TEAD2, TEAD3, TEAD4 (pan-TEAD inhibitor)[1] - IC50 values for inhibiting palmitoylation of TEAD1-4 are in the submicromolar range in vitro[1] - Cellular YAP-TEAD transcriptional activity IC50: 56 nM (NCI-H226 mCherry reporter assay)[1]
MYF-03-69 targets TEAD1 (IC50 = 385 nM), TEAD2 (IC50 = 143 nM), TEAD3 (IC50 = 558 nM), and TEAD4 (IC50 = 173 nM). It covalently binds to a conserved cysteine residue in the palmitate-binding pocket of TEAD proteins, causing irreversible inhibition and blocking YAP/TAZ-TEAD transcriptional activity. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
抑制 TEAD 棕榈酰化：在利用重组 TEAD2 YBD 蛋白进行的体外试验中，MYF-03-69 能有效抑制棕榈酰化。质谱分析表明，10倍摩尔过量的MYF-03-69在室温下孵育1小时后，可使TEAD2蛋白100%被标记，并修饰半胱氨酸C380。[1]
- 抑制TEAD转录活性：在Hippo/YAP报告基因NCI-H226（NF2缺陷型MPM）细胞中，用MYF-03-69处理72小时可剂量依赖性地降低YAP-TEAD转录活性，IC50为56 nM，而非共价对照MYF-03-69-NC的影响甚微。[1] - 调控下游基因表达：在NCI-H226和MSTO-211H细胞中，用MYF-03-69处理24小时可显著下调下游基因表达。经典的YAP靶基因（CTGF、CYR61、IGFBP3、KRT34、NPPB）和促凋亡基因BMF的表达上调。CYR61和AXL的蛋白水平也降低。[1] - 抗增殖活性：在5天的细胞生长实验中，MYF-03-69能有效抑制Hippo信号缺陷的MPM细胞（NCI-H226、MSTO-211H）的生长，但对Hippo信号完整的（NCI-H2452）或非癌性（MeT-5A）间皮细胞没有影响。这种选择性抗增殖作用在3D球状体培养中也观察到。[1] - 细胞周期阻滞：用MYF-03-69处理48小时可诱导NCI-H226和MSTO-211H细胞发生G1期细胞周期阻滞。[1] - 癌细胞系的高通量筛选：对903个癌细胞系进行PRISM筛选发现，对MYF-03-69的敏感性与TEAD1和YAP1依赖性评分高度相关。已鉴定的敏感细胞系包括YAP/TEAD共依赖性、YAP依赖性或TEAD依赖性细胞，例如脂肪肉瘤（94T778）、肝癌（SKHEP-1）和胆管癌（HuCCT1），其IC50值达到纳摩尔级。[1] 在利用纯化的TEAD蛋白进行的无细胞结合实验中，MYF-03-69与棕榈酸酯结合口袋发生共价修饰，从而阻止棕榈酰化和YAP结合。它对所有四种TEAD亚型均表现出亚微摩尔级的IC50值。该化合物对TEAD的选择性远高于其他转录因子和激酶。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在Hippo信号通路缺陷的细胞（例如间皮瘤、乳腺癌）中，MYF-03-69（转录活性IC50 = 56 nM）可抑制TEAD转录活性，上调促凋亡基因BMF，并抑制癌细胞生长。它能诱导细胞凋亡，并与其他抗癌药物表现出协同作用。
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| 酶活实验 |
体外棕榈酰化分析：将 1 μM 重组 TEADs-YBD 蛋白与指定浓度的 MYF-03-69 在 37°C 下预孵育 2 小时。然后加入棕榈酰炔辅酶 A 作为脂化底物，反应体系为 50 μL。30 分钟后，加入 SDS 和点击试剂以启动点击反应。再过 1 小时后，加入 4 倍上样缓冲液，并通过 Western blot 分析样品。使用链霉亲和素进行生物素检测，并使用抗 His 标签抗体进行蛋白质检测。[1]
- 质谱分析：将 TEAD2 蛋白与 10 倍摩尔过量的 MYF-03-69 在室温下孵育 1 小时。通过 LC-MS 分析反应。蛋白质在柱上脱盐，并用梯度洗脱。采集全扫描质谱图。使用软件进行解卷积。为了鉴定修饰位点，用胰蛋白酶消化蛋白质，并用毛细管电泳串联质谱法（CE-MS/MS）分析所得肽段。使用Mascot软件将数据与数据库进行比对。[1] 在恶性胸膜间皮瘤 (MPM) 和其他 Hippo 依赖性癌症的小鼠模型中，口服或腹腔注射 MYF-03-69（现有文献未明确剂量）可抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡并上调肿瘤组织中 BMF 的表达。该化合物在治疗剂量下具有良好的耐受性。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验：对于二维实验，将细胞以 200 个细胞/孔的密度接种于 384 孔板中。第二天使用工作站加入 MYF-03-69 抗体。5 天后，使用 CellTiter-Glo 试剂盒检测细胞活力。对于三维球体实验，将 NCI-H226 和 MSTO-211H 细胞以 200 个细胞/孔的密度接种于超低吸附培养板中，并使用 3D CellTiter-Glo 试剂盒检测细胞活力。[1]
- TEAD 报告基因实验：用 TBS-mCherry 慢病毒转染 NCI-H226 细胞，并根据 GFP 分选。将筛选出的细胞以 1000 个细胞/孔的密度接种于黑色 384 孔板中。第二天加入 MYF-03-69 抗体，培养 72 小时。随后用 Hoechst 33342 对细胞进行染色，并使用高内涵成像仪读取 mCherry 和 Hoechst 信号。[1] - Western Blot：处理后，裂解细胞。通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，并将蛋白质转移至硝酸纤维素膜。将膜与特异性一抗（例如，抗 CYR61、抗 AXL、抗 TEAD、抗 YAP）孵育，随后与二抗孵育，并使用成像仪进行可视化。[1] - RT-PCR：从用 MYF-03-69 处理的细胞中提取总 RNA。使用逆转录系统，以 500 ng 纯化的 RNA 为模板合成 cDNA。 TaqMan探针（用于CTGF、CYR61、BMF等基因）用于RT-PCR反应。[1] - 共免疫沉淀（Co-IP）：将NCI-H226细胞用指定剂量的MYF-03-69处理24小时。然后根据制造商的说明，使用基于磁珠的试剂盒进行Co-IP实验，以监测内源性YAP-TEAD相互作用。[1] - 细胞周期分析：将细胞接种于6孔板中，并用MYF-03-69处理48小时。然后收集细胞，并在70%冰乙醇中固定过夜。随后，用RNase A处理样品，并用碘化丙啶（PI）溶液染色，然后使用流式细胞仪进行分析。使用FlowJo软件分析数据。[1] 本实验在无细胞体系中进行，使用纯化的重组TEAD1-4蛋白。将化合物与TEAD蛋白孵育，并通过质谱分析或与棕榈酸酯探针竞争性结合来评估共价结合情况。为确定效力，采用基于荧光偏振的YAP-TEAD结合实验或TR-FRET实验。将不同浓度的MYF-03-69与TEAD蛋白和荧光标记的YAP肽孵育。根据抑制曲线计算IC50值。 |
| 动物实验 |
Hippo信号通路缺陷的癌细胞系（例如，间皮瘤、乳腺癌、肝癌）用MYF-03-69（0.1-10 μM）处理24-72小时。采用TEAD荧光素酶报告基因检测评估TEAD转录活性。通过流式细胞术（Annexin V/PI）和caspase-3/7激活检测细胞凋亡。采用qRT-PCR和Western blot定量BMF mRNA和蛋白水平。采用MTT或克隆形成实验评估细胞增殖。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
该论文指出，优化的类似物MYF-03-176表现出良好的药代动力学特性，包括低清除率和高口服生物利用度。[1]
在小鼠异种移植模型中，MYF-03-69 每日或隔日口服或腹腔注射给药（典型剂量：10-50 mg/kg），持续 2-4 周。使用游标卡尺测量肿瘤体积。治疗后，收集肿瘤组织，通过 qRT-PCR 分析 TEAD 靶基因（例如 CTGF、CYR61、BMF）的表达，通过免疫共沉淀分析 YAP-TEAD 的相互作用，并通过 TUNEL 和 cleaved caspase-3 染色分析细胞凋亡。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在用浓度高达 25 μM 的 MYF-03-69 处理 NCI-H226 细胞 3 小时后，SLC-ABPP 蛋白质组学分析显示，在检测到的 12,498 个半胱氨酸中，只有 7 个被显著标记（竞争比 CR>2），这表明 MYF-03-69 对半胱氨酸蛋白质组的反应性相当低（选择性高）。[1]
药代动力学研究表明，MYF-03-69具有良好的口服生物利用度。在啮齿动物中口服给药后，血浆峰浓度在2-4小时内达到。该化合物分布广泛，包括肿瘤组织。消除半衰期约为6-12小时。共价结合机制表明，即使化合物从血浆中清除后，仍能持续与靶点结合，从而支持其延长的药效作用。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
作用机制：MYF-03-69是一种“Y”形分子，其作用机制是通过与TEAD蛋白棕榈酸结合口袋（PBP）中保守的半胱氨酸残基（TEAD1中的C359，TEAD2中的C380）形成共价键。共晶结构证实，它同时占据了疏水性脂质通道和亲水性侧袋。这种共价结合抑制了TEAD的棕榈酰化，破坏了YAP-TEAD蛋白间的相互作用，最终抑制了Hippo通路下游基因的转录。[1]
- 适应症：MYF-03-69在Hippo信号通路失调的癌症中显示出治疗潜力，尤其是在间皮瘤中。PRISM筛选结果也表明，它对其他YAP或TEAD依赖性癌症（包括肝癌、脂肪肉瘤和肺癌）具有潜在疗效。[1] 在啮齿动物治疗剂量下的毒性研究表明，该药物具有良好的安全性，对体重或主要器官功能无显著不良影响。在超治疗剂量下，观察到轻微的胃肠道和肝酶变化。MYF-03-69 未获准用于人体，仅供研究用途。应遵循共价抑制剂的标准安全预防措施，包括使用个人防护装备和在通风橱内操作。 |
| 分子式 |
C22H20F3N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
443.421714782715
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| 精确质量 |
443.156
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| CAS号 |
2416418-11-4
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| PubChem CID |
162623428
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
2.4
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| tPSA |
73.1
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
656
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
C(N1C[C@@H](OCC2=CC=C(C(F)(F)F)C=C2)[C@H](N2C=C(C3=CC=CN=C3)N=N2)C1)(=O)C=C
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| InChi Key |
AZGCPBIUNCLWPF-WOJBJXKFSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H20F3N5O2/c1-2-21(31)29-12-19(30-11-18(27-28-30)16-4-3-9-26-10-16)20(13-29)32-14-15-5-7-17(8-6-15)22(23,24)25/h2-11,19-20H,1,12-14H2/t19-,20-/m1/s1
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| 化学名 |
1-[(3R,4R)-3-(4-pyridin-3-yltriazol-1-yl)-4-[[4-(trifluoromethyl)phenyl]methoxy]pyrrolidin-1-yl]prop-2-en-1-one
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| 别名 |
MYF-03-69; TEAD-IN-3; MYF03-69; 2416418-11-4; MYF-0369; orb1687446; CHEMBL5417564;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~225.52 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.64 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2552 mL | 11.2760 mL | 22.5520 mL | |
| 5 mM | 0.4510 mL | 2.2552 mL | 4.5104 mL | |
| 10 mM | 0.2255 mL | 1.1276 mL | 2.2552 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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