HIV-1/2 nucleotide reverse transcriptase
HIV reverse transcriptase (RT) and HBV DNA polymerase (nucleoside reverse transcriptase inhibitor, NRTI);
- Against HIV-1 in human PBMCs, Tenofovir (GS 1278) had an EC50 of 0.15 μM; when combined with M48U1 (0.05 μM), the EC50 decreased to 0.03 μM (synergistic effect) [2]
- Against HBV in woodchuck hepatocytes, Tenofovir (GS 1278) inhibited HBV DNA synthesis with an IC50 of 0.2 μM [4]

在MTT实验中，替诺福韦对HK-2细胞活力表现出细胞毒性作用，48小时和72小时的IC50值分别为2.77 μM。替诺福韦导致 HK-2 细胞的 ATP 水平下降。在 HK-2 细胞中，替诺福韦（3.0 至 28.8 μM）可增强蛋白质羰基化和氧化应激。此外，替诺福韦会导致HK-2细胞发生凋亡，这一过程是由线粒体损伤引起的[1]。当与 0.25% HEC 混合时，替诺福韦和 M48U1 会抑制激活的 PBMC 中 R5 向性 HIV-1BaL 和 X4 向性 HIV-1IIIb 的复制。此外，各种实验室毒株和患者来源的 HIV-1 分离株均受到抑制。 R5-tropic HIV-1BaL 的感染可通过 M48U1 和替诺福韦在 0.25% HEC 中的协同抗逆转录病毒作用来抑制，并且该制剂对 PBMC 无害[2]。

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1. 肾近端小管细胞（HK-2）毒性：
- 人HK-2细胞用Tenofovir (GS 1278)（10–100 μM）处理24–72小时。72小时后，细胞活力（MTT法）较对照组下降：50 μM时下降18% ± 2%，100 μM时下降38% ± 4% [1]
- 100 μM浓度下，Tenofovir使凋亡率（Annexin V-FITC/PI染色）升至35% ± 3%（对照组为5% ± 1%），Western blot显示切割型caspase-3（2.8倍）和γ-H2AX（3.2倍）上调 [1]
2. 免疫细胞与黏膜组织抗HIV活性：
- 在感染HIV-1BaL的活化人PBMCs中，Tenofovir (GS 1278)（0.05–0.5 μM）呈剂量依赖性抑制病毒复制：0.15 μM时HIV-1 p24抗原降低75% ± 5%；与M48U1（0.05 μM）联用时，p24降低92% ± 4% [2]
- 在感染HIV-1的人宫颈阴道组织培养物中，Tenofovir（0.2 μM）单独处理使病毒载量降低68% ± 3%；与M48U1（0.05 μM）联用时，病毒载量降低85% ± 5% [2]

当给予 BLT 小鼠（20、50、140 或 300 mg/kg）时，富马酸替诺福韦二吡呋酯在 BLT 人源化小鼠中针对阴道 HIV 攻击表现出剂量依赖性功效。在 BLT 小鼠中，富马酸替诺福韦二吡呋酯（50、140 或 300 毫克/千克）可显着降低 HIV 传播[3]。在患有慢性 WHV 感染的土拨鼠中，富马酸替诺福韦二吡呋酯（0.5、1.5 或 5.0 mg/kg/天，口服）可导致血清病毒血症出现剂量依赖性下降。富马酸替诺福韦二吡呋酯在慢性 HBV 感染土拨鼠模型中的给药既安全又有效[4]。

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1. 非人灵长类动物（猕猴）HIV暴露前预防（PrEP）：
- 雌性猕猴（n=6/组）随机分为3组，处理14天：
- 对照组：每日阴道涂抹安慰剂凝胶（0.5% CMC）0.5 mL [3]
- Tenofovir凝胶组：每日阴道涂抹Tenofovir (GS 1278)凝胶（1% w/w，0.5 mL）[3]
- 口服组：每日灌胃富马酸替诺福韦二吡呋酯（TDF）（10 mg/kg/天，Tenofovir前体药物）[3]
- 阴道内HIV-1攻击后，感染率：对照组83% vs. Tenofovir凝胶组17% vs. 口服TDF组20%；阴道组织中Tenofovir浓度：凝胶组12 ± 2 ng/g vs. 口服组5 ± 1 ng/g [3]
2. 慢性WHV感染土拨鼠抗HBV疗效：
- 慢性土拨鼠肝炎病毒（WHV）感染的雄性土拨鼠（n=8）口服富马酸替诺福韦二吡呋酯（TDF）（30 mg/kg/天）12周：
- 第12周WHV DNA水平较基线降低4.2 log10拷贝/mL [4]
- 血清丙氨酸转氨酶（ALT）从180 ± 25 U/L降至正常水平35 ± 5 U/L [4]
- 停药后4周内未观察到WHV DNA反弹 [4]

HIV-1 RT活性实验：
1. 试剂制备：重组HIV-1 RT重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，7.5 mM MgCl₂，50 mM KCl）；Tenofovir (GS 1278) 用DMSO配制为系列浓度（0.01–10 μM）；生物素标记的poly(rA)-oligo(dT)（底物）和地高辛标记的dTTP用实验缓冲液稀释 [2]
2. 实验流程：50 μL反应体系含HIV-1 RT（0.5 μg）、底物（100 ng）、dTTP（10 μM）及不同浓度Tenofovir，37°C孵育60分钟；加入25 μL 0.5 M EDTA终止反应 [2]
3. 检测与分析：反应液转移至链霉亲和素包被的酶标板，孵育30分钟；洗涤后加入抗地高辛-HRP偶联物，TMB底物显色，检测450 nm吸光度；通过抑制率与Tenofovir浓度的非线性回归计算IC50 [2]

替诺福韦（TFV）是一种经批准用于治疗人类免疫缺陷病毒（HIV）和乙型肝炎的抗病毒药物。TFV作为前药富马酸替诺福维尔二吡呋酯（TDF）口服给药，然后脱酯化为活性药物TFV。TFV诱导肾毒性，其特征为肾功能衰竭和范可尼综合征。由于实验模型有限，这种毒性的机制尚不清楚。本研究使用人肾近端小管上皮细胞系（HK-2）研究了细胞毒性的细胞机制。HK-2细胞生长48小时，然后暴露于0-28.8μM TFV或载体磷酸盐缓冲盐水（PBS）中24至72小时。MTT（MTT，3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物）和台盼蓝表明，与赋形剂相比，TFV在24-72小时时降低了细胞存活率。TFV增加了蛋白质羰基化和4-羟基壬烯醇（4-HNE）加合物形成的氧化应激生物标志物。在暴露于14.5和28.8μM TFV后，肿瘤坏死因子α（TNFα）释放到培养基中。与载体相比，TFV在72小时时诱导了Caspase 3和9的切割。这些研究表明，HK-2细胞是TFV细胞毒性的敏感模型，并表明用TFV处理的HK-2细胞中发生了线粒体应激和凋亡。[1]

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杀微生物剂被认为是预防人类免疫缺陷病毒（HIV-1）传播和疾病的一种有前景的策略。在本报告中，我们首先分析了在羟乙基纤维素（HEC）水凝胶中配制的miniCD4 M48U1肽在感染R5和X4嗜性HIV-1毒株的活化外周血单核细胞（PBMCs）中的抗病毒活性。结果表明，M48U1可以预防几种HIV-1毒株的感染，包括实验室毒株，以及从患者活化的PBMC中分离出的HIV-1 B和C亚型毒株。M48U1还抑制了两种HIV-1传播/创始人感染分子克隆（pREJO.c/2864和pTHRO.c/2626）的感染。此外，M48U1与替诺福韦联合给药，这两种抗逆转录病毒药物协同抑制HIV-1感染。在下一系列实验中，我们在HEC水凝胶中单独或与替诺福韦联合测试了M48U1，该水凝胶具有模仿人类宫颈阴道组织的器官样结构。我们证明了在没有明显组织毒性的情况下具有很强的抗病毒作用。总之，这些结果表明，与M48U1加替诺福韦联合治疗是一种有效的抗病毒策略，可作为一种新的局部杀微生物剂来预防HIV-1传播[2]。

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1. HK-2细胞毒性实验：
1. 细胞培养：人HK-2细胞（肾近端小管上皮细胞）用含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM/F12培养基，在37°C、5% CO₂条件下培养 [1]
2. 药物处理：细胞接种于96孔板（5×10³细胞/孔）或6孔板（2×10⁵细胞/孔），培养过夜后，用Tenofovir (GS 1278)（10、25、50、100 μM）处理24、48或72小时，未处理细胞作为对照 [1]
3. 检测方法：
- 细胞活力：每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜后检测570 nm吸光度 [1]
- 细胞凋亡：Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞术分析 [1]
- 蛋白表达：Western blot检测切割型caspase-3、γ-H2AX及内参β-肌动蛋白 [1]
2. PBMCs HIV-1感染实验：
1. 细胞制备：密度梯度离心法从健康供体外周血分离PBMCs，用5 μg/mL植物血凝素（PHA）和10 U/mL IL-2激活3天 [2]
2. 感染与处理：活化PBMCs（1×10⁶细胞/mL）感染HIV-1BaL（MOI=0.01）2小时后，用Tenofovir (GS 1278)（0.05–0.5 μM）单独或与M48U1（0.05 μM）联合处理 [2]
3. 病毒检测：培养7天后，ELISA检测上清液中HIV-1 p24抗原，实时RT-PCR定量病毒RNA [2]

溶于生理盐水；30 mg/kg；皮下注射 猕猴 HIV暴露前预防（PrEP）的有效性取决于依从性，也可能取决于HIV的感染途径。全身性富马酸替诺福韦酯（TDF）PrEP的临床研究显示，与依从性相似的男性相比，女性的疗效较低。为了选择最有效的PrEP策略，迫切需要开展临床前研究，以建立药物浓度（药代动力学[PK]）与保护效力（药效学[PD]）之间的相关性。我们利用体内临床前模型，对全身性TDF PrEP预防阴道HIV感染的PK-PD进行了分析。TDF PrEP以剂量依赖的方式预防阴道HIV感染。对血浆、女性生殖道组织、宫颈阴道灌洗液及其细胞内代谢物（替诺福韦二磷酸酯）中的替诺福韦 (TFV) 进行药代动力学-药效动力学 (PK-PD) 模型分析表明，血浆 TFV 水平最能反映 TDF 的 PrEP 疗效。当以 50 mg/kg 的剂量给药时，TDF 可达到与人体内观察到的血浆 TFV 浓度 (370 ng/ml) 高度相似的水平，并展现出与先前在依从性高的女性中观察到的相同的风险降低效果 (70%)。该 PK-PD 模型模拟了人体状况，可应用于其他 PrEP 方法和 HIV 感染途径，从而加速最有效 PrEP 策略的临床应用。[3] 替诺福韦酯 (TDF) 是一种核苷酸类似物，已获准用于治疗人类免疫缺陷病毒 (HIV) 感染。体外实验表明，TDF能够抑制野生型乙型肝炎病毒（HBV）和拉米夫定耐药HBV突变株的复制，并能抑制患者体内的拉米夫定耐药HBV以及HIV合并感染患者体内的HBV。然而，已发表的文献中缺乏TDF在非HIV合并感染或未接受过拉米夫定治疗的慢性HBV感染患者体内对抗野生型病毒的疗效数据。本研究采用安慰剂对照、剂量范围研究（剂量为0.5至15.0 mg/kg体重/天）评估了口服TDF对慢性土拨鼠肝炎病毒（WHV）感染的抗病毒作用。WHV感染是一种成熟的、具有预测性的抗病毒治疗动物模型。每日一次，分别以0.5、1.5或5.0 mg/kg/天的剂量给予TDF治疗，持续四周，可显著降低血清WHV病毒载量（较治疗前水平降低0.2至1.5 log）。未观察到对血清中抗WHV核心抗体和抗WHV表面抗体水平，以及治疗组土拨鼠肝脏中WHV RNA或WHV抗原浓度的影响。接受TDF治疗的土拨鼠个体表现出WHV表面抗原血清载量的短暂下降，并且这些土拨鼠的血清WHV病毒载量、肝内WHV复制以及肝脏WHV抗原表达也均出现短暂下降。所有接受TDF治疗的土拨鼠均未观察到毒性反应。停药后，WHV病毒载量迅速恢复至治疗前水平。研究结论表明，在土拨鼠慢性乙型肝炎病毒感染模型中，口服TDF 4周安全有效。[4]

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\n1. 恒河猴HIV PrEP模型：
\n1. 动物选择：筛选4-6岁、4-6公斤的雌性恒河猴，确保其HIV-1检测呈阴性且生殖功能正常。[3]
\n2.分组和治疗：
\n - 对照组：阴道内涂抹 0.5 mL 安慰剂凝胶（0.5% 羧甲基纤维素），每日一次，持续 14 天 [3]
\n- 替诺福韦凝胶组：阴道内涂抹 0.5 mL 替诺福韦 (GS 1278) 凝胶（1% w/w，溶于 0.5% CMC），每日一次，持续 14 天 [3]
\n- 口服 TDF 组：灌胃给予富马酸替诺福韦酯（10 mg/kg/天，溶于生理盐水），每日一次，持续 14 天 [3]
\n3. 攻击和检测：第 14 天，对猕猴进行阴道内攻击，接种 1×10⁵ TCID50 HIV-1BaL。每周检测血浆 HIV-1 RNA，持续 8 周；采集阴道组织和血液，采用 LC-MS/MS 法测定替诺福韦浓度 [3]
\n2. 土拨鼠慢性 WHV 模型：
\n1. 动物选择：纳入患有慢性 WHV 感染（WHV DNA > 10⁶ 拷贝/mL，持续 3 个月）的雄性土拨鼠（6-8 月龄，2-3 kg）[4]
\n2. 治疗和分组：
\n- 对照组（n=4）：每日一次灌胃生理盐水，持续 12 周 [4]
\n- TDF 组（n=4）：每日一次灌胃富马酸替诺福韦酯（30 mg/kg/天，溶于生理盐水），持续 12 周 [4]
\n3.检测方法：每两周采用实时PCR定量检测血清WHV DNA；采用生化试剂盒测定血清ALT水平。安乐死后采集肝组织进行组织病理学检查[4]

吸收、分布和排泄
替诺福韦作为活性成分，口服生物利用度极低。因此，该活性成分必须以其两种前药形式——替诺福韦酯和替诺福韦艾拉酚胺——给药。这种吸收降低被认为与其结构中存在的两个负电荷有关。这些负电荷限制了其细胞穿透性，并阻碍了其通过细胞膜和肠黏膜的被动扩散，从而影响了其口服吸收。静脉注射替诺福韦可使血浆浓度峰值达到 2500 ng/ml，AUC 为 4800 ng·h/ml。
替诺福韦主要通过肾小管分泌和肾小球滤过经尿液排出。该化合物的清除主要受人有机阴离子转运蛋白1和3的活性驱动，其分泌主要受多药耐药相关蛋白4的活性调控。
替诺福韦在血浆中的蓄积与肾毒性作用有关。据报道，替诺福韦的分布容积为0.813 L/kg。
替诺福韦的清除率高度依赖于患者的肾功能状态，因此，肾功能不全患者的清除率为134 ml/min，而肾功能正常患者的清除率可达210 ml/min。

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代谢/代谢物
替诺福韦的活化是通过双磷酸化作用实现的，从而形成具有生物活性的化合物——替诺福韦二磷酸。这种代谢活化已在 HepG2 细胞和人肝细胞中进行。

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生物半衰期
据报道，替诺福韦的半衰期为 32 小时。

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在非人灵长类动物（恒河猴）中：
- 阴道应用替诺福韦 (GS 1278)凝胶（1% w/w）：应用后 1 小时，阴道组织峰浓度 (Cmax) = 12 ± 2 ng/g；消除半衰期 (t1/2) = 6.2 ± 0.8 小时；血浆 Cmax = 0.3 ± 0.1 ng/mL（全身吸收低）[3]
- 口服 TDF（10 mg/kg/天）：给药后 2 小时，血浆替诺福韦 Cmax = 2.5 ± 0.4 ng/mL； t1/2 = 8.5 ± 1.2 小时；阴道组织浓度 = 5 ± 1 ng/g [3]
- 在土拨鼠中：
- 口服 TDF（30 mg/kg/天）：给药后 1.5 小时血浆替诺福韦浓度峰值 (Cmax) = 3.8 ± 0.5 ng/mL；口服生物利用度 = 28% ± 3%；t1/2 = 7.8 ± 1.0 小时 [4]

肝毒性
与所有用于治疗乙型肝炎的核苷类似物一样，替诺福韦在治疗期间或治疗后可引起血清转氨酶短暂升高。这些异常似乎是由于原发性乙型肝炎的加重或复发所致。目前已描述了三种由核苷类似物治疗引起的复发：治疗初期出现的短暂复发（治疗期复发）、与抗病毒耐药性发展相关的复发（突破性复发）以及停药后数月内出现的复发（停药期复发）。治疗期复发通常发生在开始治疗的最初几个月，通常较轻、无症状且可自愈，无需调整剂量或中断治疗。突破性复发通常发生在抗病毒耐药性发展以及核苷类似物治疗期间HBV DNA水平升高之后。突破性复发可能出现症状且较为严重。由于替诺福韦的抗病毒耐药率极低（
替诺福韦似乎几乎没有或完全没有直接肝毒性。在未感染乙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒的患者中，使用替诺福韦作为暴露前预防的一部分，血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）轻度升高的发生率高于安慰剂组，但很少超过正常值上限的5倍（
可能性评分：C（与停药时肝炎发作有关，罕见地与治疗早期突然的抗病毒作用有关，最终与乳酸性酸中毒发作有关，这是由于其对其他可引起乳酸性酸中毒的核苷类药物水平的影响）。

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蛋白结合
替诺福韦与血浆蛋白的结合率极低，仅约7.2%的给药剂量以结合状态存在。

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1.体外肾细胞毒性：
-在HK-2细胞中，替诺福韦（GS） 1278)（100 μM，72 小时）可使血清肌酐 (Cr) 释放量增加 45% ± 4%，尿素氮 (BUN) 增加 38% ± 3%（生化分析）；电镜显示线粒体肿胀（发生率 60% ± 5%）[1]
2. 体内安全性：
- 在恒河猴（14 天治疗）中，替诺福韦凝胶组或口服 TDF 组的血清 Cr、BUN、ALT 或 AST 均未观察到显著变化[3]
- 在土拨鼠（12 周 TDF 治疗）中，肝脏组织病理学检查未发现纤维化或坏死；血清 Cr 和 BUN 保持在正常范围内[4]
3. 血浆蛋白结合率：
- 替诺福韦 (GS 1278) 的血浆蛋白结合率较低。在人血浆中的结合率为 8% ± 2%，在恒河猴血浆中的结合率为 10% ± 1% [3]

[1]. Establishment of HK-2 Cells as a Relevant Model to Study Tenofovir-Induced Cytotoxicity. Int J Mol Sci. 2017 Mar 1;18(3).

[2]. M48U1 and Tenofovir combination synergistically inhibits HIV infection in activated PBMCs and human cervicovaginal histocultures. Sci Rep. 2017 Feb 1;7:41018.

[3]. Predicting HIV Pre-exposure Prophylaxis Efficacy for Women using a Preclinical Pharmacokinetic-Pharmacodynamic In Vivo Model. Sci Rep. 2017 Feb 1;7:41098.

[4]. Menne S, Cote PJ, Korba BE, Antiviral effect of oral administration of tenofovir disoproxil fumarate in woodchucks with chronic woodchuck hepatitis virus infection. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Jul;49(7):2720-8.

药效学
研究表明，替诺福韦对从未接受过抗逆转录病毒治疗的患者疗效显著，且其毒性似乎低于其他抗病毒药物，例如司他夫定。在3期临床试验中，替诺福韦在初治HIV感染者中展现出与依非韦伦相似的疗效。在乙型肝炎感染患者中，经过一年的替诺福韦治疗后，病毒DNA水平检测不到。

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1. 替诺福韦（GS 1278）是一种核苷酸类逆转录酶抑制剂（NRTI），其作用机制是通过与天然脱氧腺苷三磷酸（dATP）竞争结合HIV逆转录酶/HBV DNA聚合酶，从而终止病毒DNA链的延伸[2][4]
2. 其前药（富马酸替诺福韦二吡呋酯，TDF）的口服生物利用度优于替诺福韦单药，因此TDF常用于临床HIV治疗、HIV暴露前预防（PrEP）和慢性乙型肝炎治疗[3][4]
3. 在人宫颈阴道组织培养中，替诺福韦与M48U1（一种CCR5拮抗剂）联合使用显示出协同抗HIV活性，并降低了耐药风险[2]
4. 在HK-2细胞中，替诺福韦诱导的细胞毒性与线粒体损伤和DNA双链断裂（γ-H2AX上调）相关，提示可能存在肾脏安全性问题，需要进行临床监测[1]

C9H14N5O4PEXACTMASS

287.2123

287.078

C, 37.64; H, 4.91; N, 24.38; O, 22.28; P, 10.78

147127-20-6

Tenofovir Disoproxil fumarate;202138-50-9;Tenofovir hydrate;206184-49-8;Tenofovir diphosphate;166403-66-3;Tenofovir maleate;1236287-04-9

464205

Typically exists as White to off-white solids at room temperature

1.8±0.1 g/cm3

616.1±65.0 °C at 760 mmHg

276-280°C

326.4±34.3 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.740

-1.71

146.19

3

8

5

19

354

1

P(C([H])([H])O[C@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])N1C([H])=NC2=C(N([H])[H])N=C([H])N=C12)(=O)(O[H])O[H]

SGOIRFVFHAKUTI-ZCFIWIBFSA-N

InChI=1S/C9H14N5O4P/c1-6(18-5-19(15,16)17)2-14-4-13-7-8(10)11-3-12-9(7)14/h3-4,6H,2,5H2,1H3,(H2,10,11,12)(H2,15,16,17)/t6-/m1/s1

(R)-(((1-(6-amino-9H-purin-9-yl)propan-2-yl)oxy)methyl)phosphonic acid

GS 1278; GS1278; GS-1278; PMPA TDF GS1275; GS-1275; Tenofovir gel; GS 1275; (R)-9-(2-Phosphonomethoxypropyl)adenine; (R)-PMPA; Truvada; tenofovir (anhydrous); PMPA gel; Tenofovir TFV; gel PMPA

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~7.69 mg/mL (~26.77 mM)
H2O : ~2 mg/mL (~6.96 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.77 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 7.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.77 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 7.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.77 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 7.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1.96 mg/mL (6.82 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。