| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BMX (IC50 = 6 nM); BTK (IC50 = 6.8 nM); TEC (IC50 = 48 nM); TXK (IC50 = 92 nM); BLK (IC50 = 0.3 μM); ERBB4 (IC50 = 0.77 μM); EGFR (IC50 = 3.02 μM); JAK3 (IC50 = 5.52 μM); ERBB2 (IC50 = 7.31 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
OCI-L Y10 和 SU-DHL-6 细胞生长被盐酸替拉替尼（0.1-1000 nM 或 0.001-100 nM；72 小时）抑制，IC50 值分别为 9.127 nM 和 17.10 nM [1]。盐酸替布替尼（0.5、5、50 μM；24、48 小时）导致 SU-DHL-6 细胞凋亡；这需要大剂量和长时间给药（浓度高达 50 μM 时孵育 48 小时）[1]。在 TMD8 细胞中，盐酸替拉博替尼（300 nM，72 小时）会导致 caspase-3 和 PARP 裂解 [2]。
Tirabrutinib与BTK Cys-481不可逆共价结合。测量了失活效率kinact/Ki，并用于计算所研究的四种抑制剂在不同激酶之间的选择性。Tirabrutinib对BTK的kinact/Ki值为2.4±0.6 × 104 M-1 s-1，对重要脱靶有选择性。 结论:对于本研究中测试的BTK抑制剂，失活动力学分析比传统的单时间点抑制测量更准确地测量了效力和选择性。临床测试的BTK抑制剂之间存在细微但明显的差异，这可能转化为临床疗效和安全性的差异。 一般意义:这是第一个提供四种临床相关BTK抑制剂关于BTK和相关激酶失活的详细并排比较的研究。[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
口服单剂量盐酸替普鲁尼替尼（10 mg/kg）迅速吸收到脑和血浆中，给药后两小时达到最大浓度（血Cmax = 339.53 ng/mL，脑Cmax = 28.9 ng/mL）[ 1]。在体内，盐酸替布替尼（6、20 mg/kg；口服；每天一次，持续 3 周）已显示出抑制肿瘤生长的特性 [2]。
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| 酶活实验 |
共价结合的测定[3]
蛋白标记实验采用终浓度为2 μM的BTK，在含有10 mM HEPES、pH 7.5、150 mM氯化钠、10 mM氯化镁、2 mM Tris(2-羧乙基)膦(TCEP)和1%甘油的缓冲溶液中进行。抑制剂的终浓度为10 μM，所有样品的终浓度为1% DMSO。四种条件分别为:BTK +替拉替尼、BTK + staurosporine、BTK +依鲁替尼、BTK + DMSO对照。添加化合物后，样品在旋转摇床(1200 rpm)中于4°C下孵育过夜。孵育18小时后，从每种条件中收集等分进行分析，此时间点称为t =预孵育。然后对剩余样品进行后续处理，将伊鲁替尼加入BTK +替若替尼和BTK + staurosporine样品中，最终浓度为100 μM。在BTK +依鲁替尼和BTK + DMSO对照样品中加入等量的DMSO以保持相同的体积。在4℃下孵育6小时后，在最终时间点(t = post-chase)收集剩余样品。在两个时间点采集的等分在收集时使用质谱法和酶活性测定法进行分析。 质谱分析采用Agilent 6210飞行时间质谱仪和Agilent 1200快速分辨率高效液相色谱，使用Masshunter B.05采集软件。样品在Agilent Zorbax 300 Extend C18快速分辨柱上运行，温度为70°C，采用反相色谱法，梯度从20%到90%乙腈(含0.1%甲酸)。使用Agilent MassHunter Qualitative Analysis B.06处理数据，采用BioConfirm工作流，允许蛋白质反卷积以获得中性质量值。 BTK Cys-481的共价结合[3] 样品制备方法为:25 μg (2 μM)的内部重组BTK蛋白在50 mM碳酸氢铵和10 μM替拉替尼中37℃孵育1 h。然后用5 mM DTT在55°C下还原45分钟，然后用10 mM碘乙酰胺在25°C下烷基化1小时。然后用50:1的葡聚糖内源性蛋白酶在37°C下酶切12小时，然后以50:1的比例加入胰蛋白酶，再在37°C下酶切4小时，得到序列为YMANGCLLNYLR的BTK的预期肽目标。消化后的样品冻干，再悬浮在3%乙腈、0.1%甲酸中，进行质谱分析。 质谱分析方法如下:样品使用ThermoFisher UltiMate 3000 rslnano系统进样。分离采用ThermoFisher Scientific ES800 Easy Spray LC色谱柱(150 mm × 75 μm)，流速为300 nL/min，梯度为60 min，使用1%乙腈，0.1%甲酸为溶剂a, 90%乙腈，0.1%甲酸为溶剂B [3% B - 35% B (45 min)， 35% B - 90% B (15 min)， 90% B (5 min)，再平衡(20 min)]。质谱分析在ThermoFisher Q-Exactive HF上进行，使用前20个数据依赖采集。自动增益控制设置使用50 ms填充时间和3E6离子计数的ms扫描(60 K分辨率)和100 ms文件时间和1E5离子计数的MSMS扫描(15 K分辨率)。使用Proteome Discoverer 2.2对Swissprot人类数据库进行数据检索，使用tirabrutinib进行可变化学修饰。 View More
Z'-LYTE™和LanthaScreen™试验中tirabrutinib、ibrutinib、acalabrutinib和spebrutinib对BTK和其他酪氨酸激酶的IC50测定[3] BTK酶活性与IC50评价[3] 通过使用LanthaScreen™Assay Kit测定荧光素标记底物的磷酸化来定量BTK活性。最终的反应混合物含有激酶缓冲液A [50 mM HEPES (pH 7.5)， 10 mM MgCl2, 0.01% brij-35, 1 mM EGTA和0.5 mg/mL BSA]， 200-300 pM BTK, 0.2 μM荧光素- poly GT底物和180 μM ATP (2× Km)。所有预孵育和反应均在黑色96孔非结合表面(NBS™)分析板中进行，室温下进行。为了评估质谱分析中所用样品的酶活性，将每个样品的等分液稀释至300 pM BTK和1.5 nM激酶反应抑制剂. |
| 细胞实验 |
细胞增殖测定 [1]
细胞类型： SU-DHL-6 和 OCI-LY Y10 细胞 测试浓度： 0.1-1000 nM； 0.001nM-100nM。 孵育持续时间：72 小时 实验结果：表现出良好的抗增殖活性，OCI 的 IC50 分别为 9.127 nM 和 17.10 nM分别是-L Y10和SU-DHL-6细胞。 细胞凋亡分析 [1] 细胞类型： SU-DHL-6 细胞 测试浓度： 0.5、5、50 μM 孵育时间： 24、48 h 实验结果： 当浓度达到50 μM并孵育48 h时，诱导细胞凋亡。 蛋白质印迹分析[2] 细胞类型： TMD8 细胞 测试浓度： 300 nM 孵育时间：72小时 实验结果：诱导caspase-3和PARP裂解。 细胞死亡评估[2] 本研究中使用的细胞系以前已经描述过，并且是从发起人或从Deutsche Sammlung von microorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ)获得的。通过中期细胞遗传学和短串联重复评估证实了细胞系的身份。细胞系在添加10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中生长。细胞系对Tirabrutinib的敏感性以及联合处理使用CellTiterGlo®活力测定或AnnexinV-FITC染色进行。EC50的计算使用GraphPadPrism完成。Tirabrutinib耐药TMD8 (TMD8R)是通过连续暴露在3 nM至1000 nM的Tirabrutinib浓度下超过9个月产生的，直到对Tirabrutinib建立稳定的耐药性。其中，从3、6、12、25、40、60、80、100、200、400、800、1000 nM的浓度逐渐增加。细胞传代每周2次。当细胞生长良好时，用含有相同浓度的替拉替尼的新鲜培养基重新悬浮细胞(最终细胞密度为100,000个细胞/mL)。细胞对替拉替尼的敏感性在每一步通过CellTiterGlo®检测。通过Sanger测序确定TMD8R的突变状态。根据秋-塔拉莱的多重药效方程，用CalcuSyn计算联合指数。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性SD大鼠（219.0–260.5g）[1]。
剂量：10 mg/kg 给药途径：口服；单次给药。 实验结果：1.19 替拉替尼在雄性SD大鼠体内的药代动力学/PK参数[1]。血浆Cmax（ng/mL）脑Cmax（ng/mL）渗透性（%，脑Cmax/血浆Cmax）口服（10 mg/kg）339.53 28.9 8.5 动物/疾病模型：免疫缺陷（SCID）小鼠（小鼠异种移植模型）[2]。 剂量： 6、20 mg/kg 给药途径： 口服（po，即灌胃）每日一次，持续3周。 实验结果： 抑制肿瘤生长。当剂量达到20 mg/kg时，肿瘤在第14天完全被抑制。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
伊布替尼和替拉布替尼可能比泽布替尼更适合治疗局限于脑内的疾病[1]。抑制和凋亡实验表明，需要较长时间维持较高的药物浓度才能完全抑制肿瘤细胞。因此，为了确定BTK抑制剂治疗原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）的可行性，我们测试了它们是否能够在脑内维持有效抑制肿瘤的药物浓度。SD大鼠单次口服BTK抑制剂。在指定时间点采集血浆和脑组织样本以检测药物浓度（图4）。如图4所示，所有三种BTK抑制剂均能迅速被血浆和脑组织吸收。游离的伊布替尼和替拉替尼在给药后2小时均达到血药浓度峰值（Cmax），并在血液和脑组织中维持在相对稳定的水平（伊布替尼：血药浓度Cmax = 412.7 ng/mL，脑组织浓度Cmax = 40.4 ng/mL，n=3；替拉替尼：血药浓度Cmax = 339.53 ng/mL，脑组织浓度Cmax = 28.9 ng/mL，n=3）。而游离的泽布替尼在给药后0.5小时迅速达到血药和脑组织中的最大浓度，其血药浓度下降速度略快于其他BTK抑制剂。另一方面，在脑组织中，游离的泽布替尼浓度急剧下降，并在给药后4小时低于检测限。
由于每种BTK抑制剂在血液和脑组织中的Cmax均同时达到（伊布替尼和替拉替尼：口服给药后2小时；泽布替尼：口服给药后0.5小时），因此在达到Cmax时计算了游离脑组织与血浆的浓度比。泽布替尼、替拉替尼和伊布替尼的游离脑组织与血浆的浓度比分别为3.5%、8.5%和9.8%（表2）。伊布替尼的该比值略高于替拉替尼。然而，zanubrutinib 的这一比例远低于 ibrutinib 和 Tirabrutinib，表明其穿过血脑屏障的能力不如 ibrutinib 和 Tirabrutinib。 综上所述，这些数据表明，口服 ibrutinib、Tirabrutinib 和 zanubrutinib 后均可迅速被血液吸收并分布至脑部。与 zanubrutinib 相比，ibrutinib 和 Tirabrutinib 具有更强的穿过血脑屏障的能力，并能在脑内维持较高且稳定的浓度，从而使这些抑制剂能够在脑内发挥抗肿瘤作用，使其成为治疗原发性中枢神经系统淋巴瘤 (PCNSL) 的更有希望的候选药物。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
ONO-4059耐受性良好，未观察到剂量限制性毒性（DLT）。14例患者中有6例报告了18例与ONO-4059相关的不良事件；其中CTCAE-V4.0 G1级10例（1例患者共6例），G2级5例。2例患者报告了3例与ONO-4059相关的G3级血液学毒性：血小板减少症（2例）和贫血。未报告与ONO-4059相关的G4级不良事件、严重不良事件（SAE）或感染。ONO-4059的药代动力学特征为吸收和消除迅速，半衰期约为6小时，暴露量随剂量增加而增加，无ONO-4059蓄积，且患者间和患者内变异性较低。在所有剂量水平下，外周血中 Btk 的占有率（以磷酸化 Btk 衡量）至少维持 24 小时。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
盐酸替拉替尼是替拉替尼的盐酸盐形式，是一种口服制剂，含有布鲁顿无丙种球蛋白血症酪氨酸激酶 (BTK) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，替拉替尼与 B 细胞内的 BTK 共价结合，从而阻断 B 细胞受体信号传导并抑制 B 细胞发育。因此，该药物可能抑制 B 细胞恶性肿瘤的增殖。BTK 是一种胞质酪氨酸激酶，属于 Tec 激酶家族，在 B 淋巴细胞的发育、活化、信号传导、增殖和存活中发挥重要作用。
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| 分子式 |
C25H23CLN6O3
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|---|---|
| 分子量 |
490.948
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| 精确质量 |
490.152
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| 元素分析 |
C, 61.16; H, 4.72; Cl, 7.22; N, 17.12; O, 9.78
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| CAS号 |
1439901-97-9
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| 相关CAS号 |
Tirabrutinib;1351636-18-4;ONO-4059 analog;1351635-67-0
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| PubChem CID |
71571562
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
2.31
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| tPSA |
105Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
825
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC#CC(=O)N1CC[C@H](C1)N2C3=NC=NC(=C3N(C2=O)C4=CC=C(C=C4)OC5=CC=CC=C5)N.Cl
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| InChi Key |
UQYDCIJFACDXSG-GMUIIQOCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H22N6O3.ClH/c1-2-6-21(32)29-14-13-18(15-29)31-24-22(23(26)27-16-28-24)30(25(31)33)17-9-11-20(12-10-17)34-19-7-4-3-5-8-19/h3-5,7-12,16,18H,13-15H2,1H3,(H2,26,27,28)1H/t18-/m1./s1
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| 化学名 |
(R)-6-amino-9-(1-(but-2-ynoyl)pyrrolidin-3-yl)-7-(4-phenoxyphenyl)-7,9-dihydro-8H-purin-8-one hydrochloride
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| 别名 |
GS4059; ONO-WG-307; ONO-4059 HCl; GS 4059; ONO4059; Tirabrutinib hydrochloride; ONO-4059 Hydrochloride; Tirabrutinib HCl; Tirabrutinib (hydrochloride); ONO-4059 (hydrochloride); GS-4059 hydrochloride; Ono-4059(HCl salt); ONO 4059; ONO-4059; GS-4059; Tirabrutinib HCl
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~203.69 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.09 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.79 mg/mL (3.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0369 mL | 10.1843 mL | 20.3687 mL | |
| 5 mM | 0.4074 mL | 2.0369 mL | 4.0737 mL | |
| 10 mM | 0.2037 mL | 1.0184 mL | 2.0369 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT02457598 | Active Recruiting |
Drug: Tirabrutinib Drug: Idelalisib |
B-cell Malignancies | Gilead Sciences | June 16, 2015 | Phase 1 |
| NCT04947319 | Recruiting | Drug: Tirabrutinib | Refractory Primary Central Nervous System Lymphoma Primary CNS Lymphoma |
Ono Pharmaceutical Co. Ltd | December 29, 2021 | Phase 2 |
| NCT02983617 | Completed | Drug: Tirabrutinib Drug: Entospletinib |
Chronic Lymphocytic Leukemia | Gilead Sciences | April 6, 2017 | Phase 2 |
| NCT02968563 | Completed | Drug: Tirabrutinib Drug: Idelalisib |
Chronic Lymphocytic Leukemia | Gilead Sciences | December 13, 2016 | Phase 2 |
| NCT02626026 | Completed | Drug: Tirabrutinib Drug: Placebo |
Rheumatoid Arthritis | Gilead Sciences | January 26, 2016 | Phase 1 |
TQ-3959
(Rac)-Ibrutinib alkyne
BTK ligand 16
BTK C481R Recombinant Human Active Protein Kinase
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