Src HuH7 (GI50 = 9 nM); Src PLC/PRF/5 (IC50 = 13 nM); Src Hep3B (IC50 = 26 nM); Src HepG2 (IC50 = 60 nM)

体外活性：KX2-391 是一种 Src 抑制剂，针对 Src 底物袋。 KX2-391 显示针对 Huh7 (GI 50 = 9 nM)、PLC/PRF/5 (GI 50 = 13 nM)、Hep3B (GI 50 = 26 nM) 和 HepG2 (GI 50 = 60 nM) 的陡峭剂量反应曲线，四种肝细胞癌（HCC）细胞系。 KX2-391被发现可以抑制某些对目前市售药物有抗药性的白血病细胞，例如那些源自具有T3151突变的慢性白血病细胞的细胞。 KX2-391 在 NIH3T3/c-Src527F 和 SYF/c-Src527F 细胞中的工程化 Src 驱动细胞生长测定中进行评估，其 GI50 分别为 23 nM 和 39 nM。激酶测定：Tirbanibulin (KX2-391) 是一种 Src 抑制剂，针对 Src 底物袋。替巴尼布林 (KX2-391) 对 Huh7 (GI50=9 nM)、PLC/PRF/5 (GI50=13 nM)、Hep3B (GI50=26 nM) 和 HepG2 (GI50=60 nM) 显示陡峭的剂量反应曲线，四种肝细胞癌（HCC）细胞系。细胞测定：包括 Huh7、PLC/PRF/5、Hep3B 和 HepG2（NutriCyte，Buffalo，NY）在内的肝细胞系常规培养并维持在含有 2% 胎牛血清 (FBS) 的基础培养基中，温度为 37 °C，浓度为 5%二氧化碳。将细胞按每孔 4.0 × 103/190 μL 和 8.0 × 103/190 μL 接种在含有 1.5% FBS 的基础培养基中的 96 孔板中。在添加浓度范围为 6,564 至 0.012 nM 的 KX2-391 之前，将它们在 37 °C 和 5% CO2 下培养过夜，一式三份。处理过的细胞孵育3天。然后在第 3 天将 10 微升 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑 (MTT) 溶液 (5 mg/mL) 添加到每个孔中，并将细胞孵育 4 小时。将甲臜产物用 10% SDS 溶解在稀 HCl 中。使用 BioTek Synergy HT 多平台酶标仪测量 570 nm 处的光密度。为了比较活性和效力，使用 KX2-391 进行平行实验。使用GraphPad Prism 5统计软件确定生长抑制曲线、50%抑制浓度(GI50)和80%抑制浓度(GI80)。数据经过标准化以表示最大响应的百分比，并以 570 nm 波长 (OD570) 信号格式的光密度报告。

在癌症的临床前动物模型中，口服 KX2-391 显示可抑制原发性肿瘤生长并抑制转移。

Src 抑制剂替巴尼布林 (KX2-391) 靶向 Src 底物袋。肝细胞癌 (HCC) 细胞系 Huh7 (GI50=9 nM)、PLC/PRF/5 (GI50=13 nM)、Hep3B (GI50=26 nM) 和 HepG2 (GI50=60 nM) 表现出陡峭的剂量反应用替巴尼布林 (KX2-391) 治疗时的曲线。

Hep3B、HepG2、PLC/PRF/5、Huh7 和其他肝细胞系经常在 37°C 和 5% CO₂ 的条件下在含有 2% 胎牛血清 (FBS) 的基础培养基中生长和保存。在 96 孔板的每个孔中，将细胞以 4.0×10³/190 μL 和 8.0×10³/190 μL 接种在含有 1.5% FBS 的基础培养基中。添加浓度范围为 6,564 至 0.012 nM 的替巴尼布林 (KX2-391)（一式三份）之前，将其在 37°C 和 5% CO₂ 下再培养一晚。孵育处理过的细胞需要三天时间。第三天，向每个孔中添加 10 μL 5 mg/mL 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑 (MTT) 溶液，并将细胞孵育 4 小时。小时。将 10% SDS 添加到稀 HCl 中以溶解甲臜产物。光密度在 570 nm 处测量。使用替巴尼布林 (KX2-391) 进行平行实验以比较其效力和活性。使用GraphPad Prism 5统计软件，计算生长抑制曲线、50%抑制浓度（GI50）、80%抑制浓度（GI80）。报告了 570 nm 波长 (OD570) 信号格式的光密度和代表最大响应百分比的归一化数据。

Mouse bearing MDA-MB-231 tumors; Oral gavage; 1, 5mg/kg dose
Xenograft procedures and KX-01 oral dosing were as described (11). Briefly, mammary fat pad tumors were established by injecting 5×106 MDA-MB-231 cells in 150μl of PBS-Matrigel mixture (1:2) orthotopically and bilaterally into the mammary fat pads of female NUDE mice (two tumors/mouse). Treatments were started when tumors reached ∼80-100mm3. The first study used MDA-MB-231 xenografts and was performed using vehicle (ultra-pure water) and two doses of KX-01 (1, 5mg/kg) administered twice/day (BID) by oral gavage (using metal 22g feeding needle) for 28 days. A similar experiment was performed with MDA-MB-157 xenografts (another ER/PR/HER2 negative model) to assess KX-01 response. A second study was performed to test combination of KX-01 with paclitaxel on tumor growth. MDA-MD-231 tumor xenograft bearing mice were treated with vehicle or KX-01 (5mg/kg) BID, paclitaxel by intraperitoneal injection (IP) once/week, or combination of KX-0+paclitaxel. Treatments were for 40 days for all groups. A third study used MDA-MB-157 xenografts with the same combination treatment. A fourth study tested the effect of KX-01 or combination with paclitaxel for 24 days on larger MDA-MB-231 tumors (∼300mm3). Tumors were allowed to reach ∼300mm3 before beginning treatments. In this experiment mice were treated with KX-01 at a higher dose of 15mg/kg, and mice were treated once/day instead of twice/day. Paclitaxel was used at a dose of 20mg/kg IP once/week. In all experiments, tumor caliper measurements were taken twice/week and tumor volume was by calculated by the formula: 0.523×LM2 (where L-large diameter, M-small diameter). At the end the experiments animals were sacrificed and tumors and mouse organs removed. Tissues were either stored in 10% neutral buffered formalin for paraffin embedding, or snap frozen for measurement of chromosome-17 by real-time PCR, and embedded for frozen sectioning for CD-31 staining. Immunohistochemistry (IHC) was performed as described on paraffin-embedded tumor tissues [3].

[1]. Expression of Src and FAK in hepatocellular carcinoma and the effect of Src inhibitors on hepatocellular carcinoma in vitro. Dig Dis Sci, 2009, 54(7), 1465-1474.

[2]. Thiazolyl N-benzyl-substituted acetamide derivatives: synthesis, Src kinase inhibitory and anticancer activities. Eur J Med Chem, 2011, 46(10), 4853-4858.

[3]. Peptidomimetic Src/pretubulin inhibitor KX-01 alone and in combination with paclitaxel suppresses growth, metastasis in human ER/PR/HER2-negative tumor xenografts. Mol Cancer Ther. 2012 Sep; 11(9): 1936–1947.

C₂₆H₃₁CL₂N₃O₃

504.45

503.1742472

C, 61.23; H, 5.96; Cl, 14.46; N, 8.57; O, 9.79

1038395-65-1

Tirbanibulin;897016-82-9;Tirbanibulin Mesylate;1080645-95-9

Solid powder

C1COCCN1CCOC2=CC=C(C=C2)C3=CN=C(C=C3)CC(=O)NCC4=CC=CC=C4.Cl.Cl

CPTPOZGQCQXHJO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H29N3O3.2ClH/c30-26(28-19-21-4-2-1-3-5-21)18-24-9-6-23(20-27-24)22-7-10-25(11-8-22)32-17-14-29-12-15-31-16-13-29;;/h1-11,20H,12-19H2,(H,28,30);2*1H

N-benzyl-2-[5-[4-(2-morpholin-4-ylethoxy)phenyl]pyridin-2-yl]acetamide;dihydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: Please store this product in a sealed and protected environment (e.g. under nitrogen), avoid exposure to moisture.

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+ddH2O: 5 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。