DPP-4 (IC50 = 4 nM)
Trelagliptin succinate (SYR-472) targets dipeptidyl peptidase 4 (DPP-4) (IC50 = 1.3 nM; Ki = 0.6 nM) [2]
Trelagliptin succinate (SYR-472) shows high selectivity over other DPP family enzymes: DPP-8 (IC50 = 3200 nM), DPP-9 (IC50 = 4500 nM), FAP (IC50 > 10,000 nM), QPP (IC50 > 10,000 nM) [2,3]

体外活性：曲格列汀（也称为 SYR-472）是武田正在开发的一种有效、高选择性、长效的 DPP-4（二肽基肽酶-4）抑制剂，用于治疗 2 型糖尿病 (T2D)。 -每周曲格列汀治疗对 2 型糖尿病患者的血糖控制产生了临床和统计学上的显着改善。它具有良好的耐受性，可能成为这种疾病患者的一种新的治疗选择。曲格列汀在日本被批准用于治疗 2 型糖尿病 (T2DM)。

---

它通过非共价结合机制强效抑制重组人DPP-4酶活性，对DPP-8的选择性>2400倍，对DPP-9的选择性>3400倍[2]
- 在人血浆样本中，Trelagliptin succinate（0.1–10 nM）以剂量依赖性方式抑制内源性DPP-4活性（IC50 = 1.5 nM），并将GLP-1(7-36)酰胺的半衰期从2.1分钟延长至10 nM时的18.3分钟[2]
- 在大鼠胰岛细胞中，Trelagliptin succinate（1–100 nM）以葡萄糖依赖性方式增强GLP-1诱导的胰岛素分泌（16.7 mM葡萄糖条件下，10 nM时增加2.8倍），不影响基础胰岛素释放。它在胰岛培养物中抑制GLP-1降解（10 nM时减少约82%）[3]
- 浓度高达10 μM时，对人肝细胞（HepG2）、肾近端小管细胞（HK-2）或胰腺β细胞（INS-1）无显著细胞毒性（活力较对照组>90%）[3]
- 在Caco-2细胞通透性实验中，它表现出高肠道吸收（表观通透性系数>10×10⁻⁶ cm/s）[3]

曲格列汀通过抑制 DPP-4 活性来改善血糖控制。

---

在db/db小鼠（2型糖尿病模型）中：口服Trelagliptin succinate（0.3、1、3 mg/kg/周）每周一次，持续28天，以剂量依赖性方式降低空腹血糖（FBG）和糖化血红蛋白（HbA1c）。3 mg/kg/周剂量下，FBG较溶媒组降低约45%，HbA1c降低约1.9%（从9.2%降至7.3%）[2]
- 它改善db/db小鼠的葡萄糖耐量：口服葡萄糖耐量试验（OGTT）显示，3 mg/kg/周剂量下葡萄糖曲线下面积（AUC）降低约40%。OGTT期间，血浆活性GLP-1水平增加约2.5倍，胰岛素水平升高约1.8倍[3]
- 在ZDF大鼠（2型糖尿病模型）中：口服Trelagliptin succinate（1 mg/kg/周）每周一次，持续42天，FBG降低约42%，HbA1c降低约1.7%。它保护胰腺β细胞功能，胰腺胰岛素含量较对照组增加约45%[3]
- 在食蟹猴中：口服Trelagliptin succinate（0.1 mg/kg/周）可维持血浆DPP-4抑制率>80%达7天，证实每周一次给药的可行性[2]

酶抑制试验[2]
这些研究中使用的人DPP-4酶来自几个来源。如前所述，使用从ATCC（ATCC编号HTB-37；www.ATCC.org）购买的Caco-2细胞部分纯化的人DPP-4来确认trelagliptin抑制剂的效力。为了比较DPP-4抑制剂，trelagliptin、阿格列汀和西格列汀，使用市售重组人DPP-4（台湾Abnova）。为了进行详细的动力学研究，如前所述克隆、表达和纯化重组人DPP-4。此外，使用人、狗和大鼠的血浆样本测定了血浆DPP-4活性的抑制作用。根据之前报道的方法，DPP-4相关蛋白酶，二肽基肽酶-2（DPP-2）和脯氨酰内肽酶（PEP）分别从大鼠肾脏和脑中制备。通过亲和层析从表达每种FLAG标记蛋白的293-F细胞中纯化人二肽基肽酶-8（DPP-8）、二肽基多肽酶-9（DPP-9）和成纤维细胞活化蛋白α（FAPα）。[2]
为了进行详细的动力学研究，使用GP pNA作为底物，并在室温下在pH 7.4的缓冲液中进行测定，该缓冲液含有20 mmol/L HEPES、20 mmol/L MgCl2、0.1 mg/ml牛血清白蛋白和1%（v/v）DMSO。在大多数情况下，最后加入DPP-4酶（终浓度为1 nmol/L）以启动酶反应，但在测量预先形成的DPP-4抑制剂复合物中DPP-4酶活性的恢复时除外，在这种情况下，酶首先与trelagliptin预孵育70分钟，然后通过稀释50倍到含有大量过量（2 mmol/L，约17xKm）GP pNA底物的反应缓冲液中来启动反应。所有测定均以96孔格式重复进行，总测定体积为200uL，每10秒测量405nm处的吸光度，以确定反应时间过程。在大多数情况下，整个反应过程曲线如下所述进行分析。然而，对于通过trelagliptin建立GP pNA底物竞争性抑制的初始速率研究，仅使用了前40秒的吸光度测量值。

---

SD大鼠的体外生物测定、晶体结构测定和药代动力学测定[3]
体外DPP-4抑制研究（至少三个独立实验）、使用表面等离子体共振的结合动力学研究、DPP-4与化合物5的共结晶以及结构测定，以及SD大鼠的药代动力学测定，都是使用我们之前工作中报告的相同操作方法进行的。

---

DPP-4酶活性实验：重组人DPP-4蛋白（5 nM）与荧光标记底物（Ala-Pro-AMC）、反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、100 mM NaCl、1 mM EDTA）在37°C孵育30分钟。底物添加前15分钟加入浓度范围为0.01–100 nM的Trelagliptin succinate。荧光光谱法（激发光360 nm，发射光460 nm）检测释放的AMC。相对于溶媒对照组计算抑制率，通过非线性回归和Lineweaver-Burk图分析确定IC50/Ki值[2]
- DPP家族选择性实验：重组人DPP-8、DPP-9、FAP和QPP蛋白（各5 nM）分别与相应荧光底物、反应缓冲液在与DPP-4实验相同的条件下孵育。加入Trelagliptin succinate（0.1–10,000 nM），测量荧光强度以计算每种酶的IC50值[2,3]
- 结合机制实验（SPR）：表面等离子体共振技术用于分析Trelagliptin succinate与DPP-4的结合。DPP-4固定在传感器芯片上，药物（0.1–100 nM）以恒定流速注入。通过传感图计算结合亲和力（KD），证实非共价相互作用[2]

使用发色底物Gly-Pro-p-硝基苯胺（GP pNA）（终浓度为0.5 mmol/L）测定Caco-2细胞或血浆中的DPP-4活性，并在pH 7.5的缓冲液中进行，该缓冲液含有100 mmol/L Tris-HCl、1 mg/mL牛血清白蛋白和0.5 mg/mL CHAPS（3-[（3-甲酰氨基丙基）二甲基铵]-1-丙磺酸），在37°C（Caco-2电池的DPP-4组分）或30°C（血浆）下进行60分钟。测量405nm处的吸光度变化以确定反应速率。使用荧光底物Gly-Pro-7-氨基-4-甲基香豆素（GP-AMC）（终浓度90μmol/L）测定重组人DPP-4活性，并在含有25 mmol/L HEPES、140 mmol/L NaCl、1 mg/mL牛血清白蛋白的pH 7.8缓冲液中在37°C下进行15分钟。通过加入100μL 25%（v/v）乙酸停止反应，并使用Envision 2103 Multilabel Reader测量荧光（380 nm激发/460 nm发射）。表1中描述了测量DPP-2、DPP-8、DPP-9、PEP和FAPα活性的反应条件。测量405nm处的吸光度变化以确定反应速率[2]。

---

胰岛细胞胰岛素分泌实验：分离的大鼠胰岛培养24小时后，用Trelagliptin succinate（1–100 nM）预处理1小时，再用GLP-1(7-36)酰胺（10 nM）+ 葡萄糖（16.7 mM）刺激2小时。ELISA量化培养上清液中的胰岛素。GLP-1降解实验中，胰岛与GLP-1 + 药物孵育，不同时间点测量剩余活性GLP-1水平[3]
- 血浆DPP-4抑制实验：人血浆与Trelagliptin succinate（0.1–10 nM）混合，37°C孵育20分钟。以Ala-Pro-AMC为底物测量DPP-4活性，检测荧光强度。GLP-1稳定性实验中，血浆中加入GLP-1(7-36)酰胺 + 药物，在0、1、2、4小时采集样本测量活性GLP-1水平[2]
- Caco-2通透性实验：Caco-2细胞在Transwell小室上培养至融合。将Trelagliptin succinate（10 μM）加入顶侧腔室，多个时间点从基底侧腔室收集样本。计算表观通透性系数（Papp）以评估肠道吸收[3]

ICR ob/ob 小鼠[3]
10 mg/kg
灌胃；10 mg/kg；每周一次；8 周

---

对 ob/ob 小鼠 DPP-4 活性的影响[3]
将 8 周龄 ob/ob 小鼠（每组 n = 10，5 只雄性，5 只雌性）随机分配到各治疗组。禁食 2 小时后，采集基线血液至含 EDTA 的试管中。然后，小鼠分别经口灌胃给予赋形剂（0.5% 羧甲基纤维素钠，10 mL/kg）、化合物 5（0.3、1、3、1 和 10 mg/kg）、奥马利格列汀（3 mg/kg）或曲格列汀（3 mg/kg）。随后，分别于1、2、4、8、12、24、48、72、96、120、144和168小时采集每只动物的血液样本。所有样本均以10000 rpm离心2分钟，并收集血浆。将血浆样本分装后储存于−80 °C直至分析。体内DPP-4活性测定方法与ICR小鼠相同。

---

对db/db小鼠口服葡萄糖耐量试验的影响[3]
为了研究化合物5对6周龄db/db小鼠（每组n=10，5只雄性，5只雌性）口服葡萄糖负荷后血糖的影响，在口服葡萄糖负荷（1.5 g/kg）前60分钟，分别给禁食6小时的db/db小鼠口服化合物5（3和10 mg/kg）、奥马格列汀（10 mg/kg）、曲格列汀（10 mg/kg）或赋形剂（0.5%羧甲基纤维素钠）。在葡萄糖负荷前60分钟以及葡萄糖负荷后0、15、30、60、90和120分钟，使用血糖仪测定血糖水平。采用梯形法计算葡萄糖耐量试验的曲线下面积（AUC）。

---

db/db小鼠的长期抗糖尿病作用[3]
根据非空腹血糖、空腹6小时血糖、血清胰岛素水平、PBW（非空腹体重）和6小时空腹体重，将6周龄db/db小鼠分为5组（每组n=10，雌雄各5只）。以瘦型同窝小鼠作为瘦型对照组。每周一次口服化合物5（3和10 mg/kg）、奥马格列汀（10 mg/kg）、曲格列汀（10 mg/kg）或赋形剂（0.5%羧甲基纤维素钠），持续8周。每隔7天测定一次非空腹血糖、空腹血糖、PBW和6小时空腹体重。治疗7周后，对禁食6小时的动物进行1.5 g/kg葡萄糖负荷试验。分别于葡萄糖负荷后0、15、30、60、90和120分钟使用血糖仪测定血糖水平。治疗8周后，对禁食6小时的动物进行1.5 g/kg葡萄糖负荷试验。分别于葡萄糖负荷后0、15、30和60分钟采集血样，检测血浆胰岛素水平。治疗8周后，于第67天采集禁食6小时后的血样，用于测定糖化血红蛋白（HbA1c）水平。详细的给药方案见补充信息（图S11）。

---

db/db小鼠2型糖尿病模型：将8周龄雄性db/db小鼠随机分为对照组（溶剂）和琥珀酸曲格列汀治疗组（0.3、1、3 mg/kg/周，口服，每组n = 8）。溶剂为0.5%羧甲基纤维素（CMC）+ 0.1%吐温80。每周给药一次，持续28天。每周测量空腹血糖；在基线和第 28 天测量 HbA1c。在第 21 天进行口服葡萄糖耐量试验 (OGTT)（口服葡萄糖负荷：2 g/kg），并采集血样以测量葡萄糖、胰岛素和活性 GLP-1 [2,3]
- ZDF 大鼠 2 型糖尿病模型：将 10 周龄雄性 ZDF 大鼠分为对照组和治疗组（每周口服 1 mg/kg 琥珀酸曲格列汀，每组 n = 6）。每周给药一次，持续 42 天。每周测量两次空腹血糖；在基线和终点测量 HbA1c。处死后取出胰腺组织以定量胰岛素含量 [3]
- 食蟹猴药代动力学/药效学模型：每周一次口服琥珀酸曲格列汀（0.1 mg/kg），持续 4 周。分别于给药后0、1、2、3、7和14天采集血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆药物浓度，并采用酶法测定DPP-4抑制率[2]。
- 药代动力学研究：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）和比格犬（8-10 kg）分别经口灌胃（10 mg/kg）或静脉注射（2 mg/kg）给予琥珀酸曲格列汀。在多个时间点采集血样，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆药物浓度。采用非房室模型分析计算药代动力学参数（Cmax、AUC、t1/2、F）[3]。

口服生物利用度：大鼠为 85%，犬为 88% [3]
- 血浆半衰期 (t1/2)：大鼠为 120 小时（5 天），犬为 168 小时（7 天），食蟹猴为 196 小时（8.2 天）[2,3]
- 血浆蛋白结合率：人血浆为 86%，大鼠血浆为 83%，犬血浆为 85%（平衡透析法）[3]
- 组织分布：大鼠肾脏（浓度是血浆的 2.4 倍）、肝脏（浓度是血浆的 2.1 倍）和小肠（浓度是血浆的 1.8 倍）浓度最高；中枢神经系统渗透性极低（血浆浓度的 <0.8%）[3]
- 代谢：代谢极少（仅约 8% 的剂量在肝脏中代谢）；主要代谢物无活性[2]
- 排泄：大鼠给药后7天内，75%以原形经尿液排出，18%经粪便排出[3]

体外毒性：浓度高达 10 μM 的琥珀酸曲格列汀对人 HepG2、HK-2 或 INS-1 细胞未显示出明显的细胞毒性（细胞存活率 >85% vs. 对照组）[3]
- 急性毒性：大鼠和小鼠的 LD50 > 2000 mg/kg（口服给药）；剂量高达 2000 mg/kg 时未观察到死亡或严重毒性症状（嗜睡、胃肠道不适）[2]
- 重复给药毒性：在一项为期 90 天的大鼠研究中（每周口服 10、30 和 100 mg/kg），该药物耐受性良好。未检测到体重、血液学参数或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化。肝脏、肾脏、胰腺和心脏的组织学检查未发现异常病变[3]
- 药物相互作用潜力：在治疗浓度下不抑制或诱导主要CYP450酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）[2]

[1]. Recent approaches to medicinal chemistry and therapeutic potential of dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4) inhibitors. Eur J Med Chem. 2014 Mar 3;74:574-605.

[2]. Trelagliptin (SYR-472, Zafatek), Novel Once-Weekly Treatment for Type 2 Diabetes, Inhibits Dipeptidyl Peptidase-4 (DPP-4) via a Non-Covalent Mechanism. PLoS One. 2016 Jun 21;11(6):e0157509.

[3]. Discovery of a Natural-Product-Derived Preclinical Candidate for Once-Weekly Treatment of Type 2 Diabetes. J Med Chem. 2019 Mar 14;62(5):2348-2361.

曲格列汀属于苯类和腈类化合物。
曲格列汀目前正在进行临床试验NCT03555591（曲格列汀片剂特定药物使用调查——“2型糖尿病患者长期用药调查”）的研究。

---

二肽基肽酶-4 (DPP-4) 是目前广泛研究的2型糖尿病 (T2DM) 新型靶点之一。研究重点在于通过抑制DPP-4活性来维持内源性胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 的活性。与现有常规疗法相比，DPP-4抑制剂不会引起体重增加，耐受性良好，并且能够更持久地控制血糖。 DPP-4抑制剂的市场历程始于2006年西格列汀的上市，直至2012年最新药物替格列汀的问世。本综述主要关注DPP-4抑制剂的最新药理学进展和设计进展，以DPP-4为靶点，旨在阐明分散的数据。[1]

---

新型二肽基肽酶-4抑制剂曲格列汀（SYR-472）每周一次给药即可在2型糖尿病患者中显示出持续疗效。本研究对曲格列汀的体外特性进行了表征，结果表明其对人二肽基肽酶-4的抑制效力分别比阿格列汀和西格列汀高约4倍和12倍，并且对包括二肽基肽酶-8和二肽基肽酶-9在内的相关蛋白酶的选择性超过10,000倍。动力学分析表明，曲格列汀对二肽基肽酶-4具有可逆的、竞争性的、缓慢结合的抑制作用（解离半衰期约为30分钟）。X射线衍射数据表明，二肽基肽酶与曲格列汀之间存在非共价相互作用。综上所述，强效的二肽基肽酶抑制作用可能是曲格列汀持续疗效的部分原因。[2]

---

药物依从性差是导致约一半2型糖尿病（T2DM）患者血糖控制不佳的主要原因之一。临床上需要长效降糖药来提高患者的依从性。二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制剂因其体重中性和避免低血糖等优良特性，在T2DM治疗中发挥着越来越重要的作用。本文报道了化合物 5 的成功发现和规模化合成。化合物 5 是一种结构新颖、高效且长效的 DPP-4 抑制剂，可用于每周一次治疗 2 型糖尿病。抑制剂 5 具有快速结合和缓慢解离的动力学特征，以及缓慢的清除率和较长的末端半衰期。在糖尿病小鼠模型中，单次口服 5（3 mg/kg）可抑制 80% 以上的 DPP-4 活性，且抑制作用持续 7 天以上。 5（10 mg/kg，每周一次）的长期抗糖尿病疗效优于每周一次的曲格列汀和奥马格列汀，尤其是在降低糖化血红蛋白A1c水平方面。[3]

---

琥珀酸曲格列汀（SYR-472，Zafatek）是一种强效、口服生物利用度高且高度选择性的DPP-4抑制剂，每周一次给药。[2,3]
- 其作用机制包括非共价、可逆性抑制DPP-4，延长肠促胰岛素（GLP-1和GIP）的半衰期，增强葡萄糖依赖性胰岛素分泌，并抑制胰高血糖素释放以降低血糖。[2]
- 它适用于治疗2型糖尿病，每周一次的给药方案方便患者依从性。[2,3]
- 具有良好的药代动力学特征（血浆半衰期长、口服生物利用度高、代谢极少）支持每剂药物持续抑制 DPP-4 长达 7 天 [3]
- 血浆蛋白结合率低、药物相互作用可能性小、毒性低，使其适合与其他抗糖尿病药物（例如二甲双胍、SGLT2 抑制剂）联合使用 [2,3]
- 它是一种天然产物衍生的临床前候选药物，其临床前数据支持其用于 2 型糖尿病治疗的临床开发和审批 [3]

C22H26FN5O6

475.47

475.186

C, 55.57; H, 5.51; F, 4.00; N, 14.73; O, 20.19

1029877-94-8

Trelagliptin;865759-25-7

44183569

White to off-white solid powder

1.234

171.65

3

10

6

34

750

1

FC1C([H])=C([H])C(C#N)=C(C=1[H])C([H])([H])N1C(N(C([H])([H])[H])C(C([H])=C1N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]([H])(C1([H])[H])N([H])[H])=O)=O.O([H])C(C([H])([H])C([H])([H])C(=O)O[H])=O

OGCNTTUPLQTBJI-XFULWGLBSA-N

InChI=1S/C18H20FN5O2.C4H6O4/c1-22-17(25)8-16(23-6-2-3-15(21)11-23)24(18(22)26)10-13-7-14(19)5-4-12(13)9-20;5-3(6)1-2-4(7)8/h4-5,7-8,15H,2-3,6,10-11,21H2,1H3;1-2H2,(H,5,6)(H,7,8)/t15-;/m1./s1

2-[[6-[(3R)-3-aminopiperidin-1-yl]-3-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl]methyl]-4-fluorobenzonitrile;butanedioic acid

SYR-472; SYR 472; SYR472; TRELAGLIPTIN SUCCINATE; 1029877-94-8; Trelagliptin (succinate); Trelagliptin; Trelagliptin succinate; brand name: Zafatek

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 50 mg/mL (105.16 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。