sPLA2/secretory phospholipase A2 (IC50 = 9 nM)

Varespladibmethyl 也称为 LY333013，是甲醇的前药 [1]。当用于对抗来自六大洲的 28 种具有医学毒性的蛇毒时，伐瑞拉迪及其侧壁生物可利用的前药甲基伐瑞拉迪（甲基伐瑞拉迪）在纳摩尔和皮摩尔浓度下表现出高水平的致命性 PLA2 (sPLA2)。抑制影响[2]。

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体外抑制sPLA2活性[2]
在研究可用于蛇咬伤的药物时，我们发现varespladib（LY315920）和甲基varespladib（LY333013）使用显色分析在体外抑制了大量蛇毒的sPLA2活性，但对用作标准阳性对照的蜂毒没有显示出很大的活性（表1和图1）。此外，令人惊讶的是，观察到varespladib和甲基varespladib对几乎所有测试的蛇毒的IC50明显低于包括人类在内的哺乳动物sPLA2的抑制值[2]。

疗效。在治疗的第1周，1000mg/天的methyl-varespladib/LY333013在达到ACR20反应的患者比例方面优于安慰剂（p=0.064），并且观察到剂量反应关系（p=0.058）（图1）。在第1周观察到CRP具有统计学意义的剂量反应关系（p=0.046）。然而，在研究第4周和第8周，所有治疗组的ACR20反应率都有所增加，与安慰剂相比没有差异。探索性分析显示，65岁以上患者的ACR20反应呈剂量依赖关系（p=0.077）。次要终点的分析，包括达到ACR20反应的时间、治疗失败的时间以及患者报告的疼痛或整体关节炎状态改善20%的时间，在治疗组之间没有差异。在56名接受安慰剂治疗的患者中，有9名（16.1%）达到了ACR50反应，而在60名接受methyl-varespladib/LY33301350、250和1000mg/天治疗的患者当中，分别有10名（16.7%）、5名（8.5%）和5名（8.2%）达到了反应。ACR反应成分的治疗组之间的变化通常很小或不一致，没有统计学意义。LY333013、250和1000mg/天组的TJC在第8周和第12周增加，SJC在第12周也增加。研究人员的总体评估反映了这些发现，但患者的总体和疼痛评估没有。探索性分析表明，在研究开始时，RF的存在、使用的DMARD数量或使用的特定DMARD方面没有出现治疗反应。值得注意的是，在研究开始时，只有18%的患者服用了非甾体抗炎药，而使用低剂量皮质类固醇的患者为48%。在LY333013 1000 mg/天组中，皮质类固醇的使用似乎降低了ACR20的实现[1]。

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治疗组的人口统计学特征相似。在第1周，ACR20反应（p=0.058）和C反应蛋白降低（p=0.558）之间存在剂量-反应关系。随后，在第4周和第8周，包括安慰剂组在内的所有研究组中，ACR20反应的患者比例都有所增加，并且失去了最初的治疗效果。不良事件的严重程度通常较轻，与治疗无关。 结论：使用methyl-varespladib/LY333013治疗12周耐受良好，但作为DMARD治疗活动性RA的辅助手段无效[1]。

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ApoE−/−标准模型[3]
对照组或A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013处理组）动物的体重在时间0时相似（赋形剂：27.2±2.6，30mg/kg A-002:26.7±2.3，90mg/kg A-002:37.3±2.5）。在西方饮食的16周内，Vehicle, 30 mg/kga-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013和90 mg/kg a-002组）的体重分别增加了约155%、150%和141%（图2）。使用重复测量的双向方差分析，以时间和治疗为变量，两组之间的体重没有统计学上的显著差异。

研究开始时，各组的血浆胆固醇水平没有显著差异。然而，与对照组相比，每天两次服用a-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013，剂量为30或90 mg/kg，治疗1个月后，总胆固醇显著降低（图3）。在整个4个月的治疗期间，这种效果保持一致。每次治疗4个月后，赋形剂、30mg/kg A-002和90mg/kg A-002组的血浆胆固醇分别变化了+15%、-10%和-12%（图3）。血浆胆固醇浓度没有明显的剂量反应效应。

A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013）治疗对斑块含量有显著影响，斑块含量以动脉粥样硬化斑块在主动脉管腔表面的占有率表示。载体治疗的小鼠斑块覆盖率约为12.6%±0.7%，而每天两次用30mg/kg A-002治疗的小鼠为6.3%±0.6%，每天两次服用90mg/kg A-002的小鼠为6.7%±0.8%。这表明与仅接受制剂载体的治疗组相比，A-002治疗组的斑块含量显著降低（P<0.05）（图4）。

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血管紧张素II ApoE−/−模型[3]
血管紧张素II在水中每天两次或在5%阿拉伯胶中每天两次配制，导致主动脉斑块覆盖率相似（分别为18%±3.3%和14.4%±4.8%，图5）A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013（30mg/kg）显著降低了主动脉的斑块覆盖率（8%±3%，而未经药物治疗输注血管紧张素II时为18%±3.3%，P<0.025）。在没有血管紧张素II的情况下，动脉粥样硬化的背景量（3.8%±0.6%，皮下盐水泵和每天两次水）明显低于输注血管紧张素Ⅱ的情况（18%±3.3%，P<0.025）。代表性的人脸图像如图6所示。

评估每组小鼠的主动脉瘤发生率。在未输注血管紧张素II的情况下，未观察到动脉瘤。输注水中配制的血管紧张素II导致25%的动脉瘤发生率，输注阿拉伯胶载体中配制的血管紧缩素II导致22.2%的动脉瘤发病率A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013治疗（30mg/kg，每天两次）在输注阿拉伯胶中配制的血管紧张素II的小鼠中完全预防了动脉瘤的形成（Prob>ChiSq=0.0096）（表1）。

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ApoE−/−标准模型[3]
对照组或A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013处理组）动物的体重在时间0时相似（赋形剂：27.2±2.6，30mg/kg A-002:26.7±2.3，90mg/kg A-002:37.3±2.5）。在西方饮食的16周内，Vehicle, 30 mg/kga-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013和90 mg/kg a-002组）的体重分别增加了约155%、150%和141%（图2）。使用重复测量的双向方差分析，以时间和治疗为变量，两组之间的体重没有统计学上的显著差异。

研究开始时，各组的血浆胆固醇水平没有显著差异。然而，与对照组相比，每天两次服用a-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013，剂量为30或90 mg/kg，治疗1个月后，总胆固醇显著降低（图3）。在整个4个月的治疗期间，这种效果保持一致。每次治疗4个月后，赋形剂、30mg/kg A-002和90mg/kg A-002组的血浆胆固醇分别变化了+15%、-10%和-12%（图3）。血浆胆固醇浓度没有明显的剂量反应效应。

A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013）治疗对斑块含量有显著影响，斑块含量以动脉粥样硬化斑块在主动脉管腔表面的占有率表示。载体治疗的小鼠斑块覆盖率约为12.6%±0.7%，而每天两次用30mg/kg A-002治疗的小鼠为6.3%±0.6%，每天两次服用90mg/kg A-002的小鼠为6.7%±0.8%。这表明与仅接受制剂载体的治疗组相比，A-002治疗组的斑块含量显著降低（P<0.05）（图4）。

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血管紧张素II ApoE−/−模型[3]
血管紧张素II在水中每天两次或在5%阿拉伯胶中每天两次配制，导致主动脉斑块覆盖率相似（分别为18%±3.3%和14.4%±4.8%，图5）A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013（30mg/kg）显著降低了主动脉的斑块覆盖率（8%±3%，而未经药物治疗输注血管紧张素II时为18%±3.3%，P<0.025）。在没有血管紧张素II的情况下，动脉粥样硬化的背景量（3.8%±0.6%，皮下盐水泵和每天两次水）明显低于输注血管紧张素Ⅱ的情况（18%±3.3%，P<0.025）。代表性的人脸图像如图6所示。

评估每组小鼠的主动脉瘤发生率。在未输注血管紧张素II的情况下，未观察到动脉瘤。输注水中配制的血管紧张素II导致25%的动脉瘤发生率，输注阿拉伯胶载体中配制的血管紧缩素II导致22.2%的动脉瘤发病率A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013治疗（30mg/kg，每天两次）在输注阿拉伯胶中配制的血管紧张素II的小鼠中完全预防了动脉瘤的形成（Prob>ChiSq=0.0096）（表1）。

体外实验[2]
使用二庚酰基磷脂酰胆碱的1,2-二硫代类似物进行实验以评估sPLA2活性。sPLA2催化sn-2位磷脂的水解，产生游离脂肪酸和溶血磷脂。PLA从膜磷脂中释放花生四烯酸被认为是控制细胞内类二十烷生成的关键步骤。蜂毒PLA2对照品是一种100μg/mL的蜂毒溶液，PLA2作为阳性对照从试剂盒中提供。耶鲁分子发现中心进行了检测优化、筛选和剂量反应测量。实验在含有25 mM Tris-HCl、pH 7.5、10 mM CaCl2、100 mM KCl、0.3%Triton X-100（Fluka）和454µM DTNB的测定缓冲液中进行，并镀入透明的未处理384孔板中。毒液在1倍磷酸盐缓冲盐水中复溶至10000µg/mL的浓度。所有病例均使用购自Sigma（E.carinatus和D.russelli）或Miami Serpentarium（所有其他）的粗、普通冻干毒液。Varespladib和甲基Varespladib/LY333013购自Chemietek，溶于DMSO用于体外实验，溶于碳酸氢盐/葡萄糖用于体内实验。基于在室温下进行的动力学酶测定，选择了含有0.375 mM 1,2-双（庚酰基）甘油磷胆碱（sPLA2底物）的静脉的活性。选择毒液浓度进行筛选和效力研究，在这些研究中，相对于没有毒液对照孔的任何背景活性，观察到较高的sPLA2活性，并且在60分钟时底物消耗可以忽略不计。用于检测的毒液的最终浓度范围为0.0037–5µg/mL，表明不同毒液在该底物的比例或相对sPLA2活力方面存在很大差异。对于13种蛇毒，最终浓度范围从黄颡鱼的0.0037µg/mL到多叶石斛的100µg/mL（平均浓度7.8±28µg/mL；中位浓度0.1µg/mL），对于15种蝰蛇毒，其最终浓度范围为0.033µg/mL，例如白蛉和25µg/mL红细胞肉瘤（平均浓度2.47±6.35µg/mL；中值浓度1µg/mL）。筛选第一阶段使用的试验性集合由发明人选择，或从选定毒液实验时可用的已知化合物和天然产物库中选择，包括：美国国立卫生研究院临床收藏、GenPlus、Pharmakon、生物活性脂质、蛋白酶抑制剂、采购药物和美国食品药品监督管理局批准的药物库。MicroSource Discovery Systems的GenPlus（NINDS定制系列）含有960种化合物。Varespladib的表现优于文库中的所有化合物，这证实了（在筛选文库的范围内）其作为sPLA2抑制剂的优越效力。在这些总计4000多个不同化学实体的集合中，没有发现任何分子的效力在varespladib的两个数量级以内，因此结果不在本手稿的范围内。对于抑制剂和剂量反应测试，使用多通道移液管或多滴分配器将10µL蛇毒或蜂毒（+对照）添加到分析板中。使用针工具将来自化学文库或制备的溶解在DMSO中的连续稀释母版的化合物加入到分析板中，以转移20nL的化合物。测定中DMSO的最终浓度为0.1%。然后加入10µL底物，最终测定体积为20µL。在复制孔的每个板上都包括对照组。阴性对照孔是不含小分子化合物的载体（仅DMSO）。模拟完全毒液活性抑制的阳性对照是没有添加毒液的孔，并在其位置添加了测定缓冲液。在起始时和在室温下反应60分钟后测量测定信号。在Tecan infiniTe M1000平板读数器上量化信号，测量405nm处的吸光度。从60分钟的信号中减去启动时的信号。将这些背景校正值归一化为板内重复阴性和阳性对照孔的平均值。为了定义标准化尺度，代表完全毒液活性的阴性对照孔信号的平均值被标准化为100%效果，代表完全抑制毒液活性的阳性对照孔信号平均值被归一化为0%效果。板块内的井也相应地进行了缩放。这些计算是在MicroSoft Excel中进行的。将数据转移到GraphPad Prism（2014年第6版，美国加利福尼亚州拉霍亚）中，绘制并拟合模型，从而可以确定IC50或EC50值。显著性检验由Student的t计算，所有其他检验都是描述性的。

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sPLA2抑制[3]
根据别处描述的显色法测量A-001对sPLA2 V和X组酶抑制的内在活性。

251 例尽管接受一种或多种改善病情抗风湿药 (DMARD) 治疗但仍处于活动期的类风湿关节炎 (RA) 患者，每日一次口服 LY333013（50、250 和 1000 mg）或安慰剂，疗程 12 周。允许同时使用低剂量糖皮质激素（≤ 10 mg/天泼尼松当量）。采用美国风湿病学会 (ACR20) 疗效评价标准评估临床改善情况，并根据不良事件和实验室检查异常情况评估安全性。[1]

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\n\n动物体内研究[2]
\n在体内，黄腹蝰 (M. fulvius) 和欧洲蝰 (V. berus) 毒液的 sPLA2 活性最高，在成功的初步生存研究后，选择黄腹蝰用于大鼠的非 GLP 研究，而欧洲蝰用于小鼠研究。本研究使用了植入颈静脉导管的CD-1小鼠和Sprague-Dawley大鼠。研究时，18只体重在183至214克之间的Sprague-Dawley大鼠由供应商通过手术植入颈静脉导管。大鼠被随机分为六个治疗组（每组n=3），分别接受含或不含varespladib的蛇毒注射。对动物进行约24小时的毒性反应监测。在给药前和给药后约30分钟、1小时和4小时，从每只大鼠采集血样（不含抗凝剂）。根据实验方案，标称采血时间为给药前和varespladib给药后30分钟±1分钟、1小时±1分钟和4小时±5分钟。除在最后一次预定采血时间（4小时）前死亡的动物外，所有采血时间均符合上述规定。血液经处理分离成血清后，由经AILAC认证的合同研究机构进行分析，以测定sPLA2活性。该活性已预先用大鼠血清进行验证，用于质量控制。存活的动物在24小时观察后被实施安乐死。组织样本仅进行粗略检查，未收集用于进一步处理。本研究使用小鼠的理由是，动物试验是新药在人体试验中合理且符合伦理的前提，并且从非临床动物模型获得的数据与受试物质在人体中的行为具有相关性。由于体内相互作用的复杂性，体外系统无法提供足够的信息来评估化合物的体内活性。本研究预期，所用动物的数量能够提供足够大的样本量以获得具有科学意义的结果，同时尽可能减少达到该结果所需的动物数量。选择静脉注射途径是为了最大限度地提高varespladib的生物利用度。所有实验的设计均旨在确保对照动物在试验药物预期半衰期内达到100%的死亡率，以便使用最少数量的动物获得清晰的结果。

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\n\nsPLA2 IIA组转基因模型[3]
\n本研究使用C57BL/6J ApoE+/+背景下，在可诱导小鼠金属硫蛋白启动子控制下表达人sPLA2 IIA组的转基因小鼠模型，评估了Fox等人²¹描述的methyl-varespladib/LY333013/A-002给药动物血清中磷脂酶A2活性的抑制情况。动物单次口服methyl-varespladib/LY333013/A-002（1或3 mg/kg）或赋形剂（5%阿拉伯胶），并在治疗前基线和0.5、100 mg/kg剂量下测量样本中的酶活性²²。给药后 2 和 4 小时。\n

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\n\nApoE−/− 标准模型 [3]
\nApoE−/− 模型的建立方法已在其他文献中描述。23 使用 6-8 周龄的雄性 ApoE−/− 小鼠（129/Ola × C57BL/6J，多代）。小鼠自由摄食高脂饮食（21% 脂肪：0.15% 胆固醇和 19.5% 酪蛋白）2 周，以使其适应饮食。使用 GroupOptimizer V211.xls 程序，根据血浆甘油三酯和总胆固醇水平将小鼠随机分组。动物接受 30 mg/kg 每日两次或 90 mg/kg 每日两次的 methyl-varespladib/LY333013/A-002 治疗，持续 16 周。将化合物配制成 0.2 mL 5% 阿拉伯胶溶液（10 mL/kg 体重），并于上午 7 点和下午 3 点通过灌胃法每日两次给药。\n

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\n\nApoE−/− 血管紧张素 II 加速模型 [3]
\n使用 6-8 周龄的雄性 ApoE−/− 小鼠（129/Ola × C57BL/6J，多代）。在该模型中，通过皮下输注 0.7 mg kg−1 d−1 血管紧张素 II 来诱导与动脉瘤形成相关的动脉粥样硬化加速发展。24 小鼠自由摄食高脂饮食（21% 脂肪：0.15% 胆固醇和 19.5% 酪蛋白）2 周，以使小鼠适应该饮食。然后，使用 GroupOptimizer V211.xls 程序，根据血浆甘油三酯和总胆固醇水平将动物随机分组，并按照标准 ApoE−/− 模型所述，每天两次，以 30 mg/kg 的剂量给予 methyl-varespladib/LY333013/A-002 治疗 4 周。\n\n

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\n流程。在初次入组访视时符合纳入和排除标准的患者，在基线访视时接受重新评估，以确保他们仍然符合活动性类风湿关节炎的入组标准。患者在每次访视时均填写斯坦福健康评估问卷 (HAQ)20，其中包括用于评估疼痛的 100 mm 水平视觉模拟量表 (VAS)（0 = 无痛；100 = 剧痛），并使用 100 mm VAS（0 = 非常好；100 = 非常差）评估其关节炎的总体活动度。研究人员接受了标准化的28关节计数技术²¹的培训，用于在每次访视时计数肿胀关节数（SJC）和压痛关节数（TJC），并使用100 mm视觉模拟评分法（VAS）（0 = 非常好；100 = 非常差）评估整体关节炎活动度。安全性评估基于每次访视（基线以及治疗1、4、8和12周后）报告的不良事件、体格检查结果和实验室检查结果。在基线和后续访视时采集样本进行群体药代动力学和/或C反应蛋白（CRP）检测。研究药物。研究药物制备成外观相同的白色片剂，每片含有0、50、125或250 mg的甲基-varespladib/LY333013。患者每日两次，每次服用两片药片，分别从泡罩包装中取出，对应每日0（安慰剂）、50、250和1000 mg的甲基-varespladib/LY333013剂量水平。50 mg/天和250 mg/天剂量组仅在早晨服用活性药物。治疗分组采用区组随机化，并按研究中心分层。治疗分配由交互式电话语音应答系统管理。治疗方案信息以密封信封的形式提供给研究者，但除紧急情况外，揭盲直至最后一次访视后才会进行。除非有充分的伦理理由，否则已揭盲的患者将被终止研究。通过清点回收的泡罩包装中的药物数量来监测治疗方案的依从性。如果泡罩包装丢失，则通过患者自述来评估用药情况。统计分析。人口统计学特征、RA基线疾病特征和用药情况以及不良事件数据（表1-4）的p值，对于连续变量，采用秩转换方差分析模型计算，该模型包含剂量和合并研究中心项；对于分类变量，采用按合并研究中心分层的Cochran-Mantel-Haenszel检验计算。主要疗效评价采用ACR改善定义²²，改善水平为20%（ACR20）。若患者在治疗4周后病情较基线恶化>20%，或治疗8周后病情改善<10%，或治疗12周后病情改善<20%，则判定治疗失败。这些患者停止研究治疗，并被归类为无应答者，无论采用何种改善定义。疗效分析纳入所有随机分组且至少接受过一次研究药物治疗，并在第 4、8 或 12 周访视时至少进行过一次疗效评估的患者[意向性治疗 (ITT) 组]。缺失数据采用末次观察结转法处理。不良事件分析纳入所有至少接受过一次研究药物治疗的患者。假设安慰剂组 30% 的患者达到 ACR20 缓解，而 LY333013（1000 mg/天）组 50% 的患者达到 ACR20 缓解，则每组 59 例患者使用以剂量为解释变量的逻辑回归模型，在单侧 α = 0.1 的显著性水平下，有 80% 的概率检测到线性剂量反应关系。药代动力学测定：采用高效液相色谱/质谱法测定 LY333013 的活性代谢物。结果根据研究药物最后4剂的给药时间和分配剂量进行评估。采用二室分布模型，并假设药物为一级消除动力学模型。既往研究表明，血浆清除率受生物利用度的影响，而生物利用度会随着剂量的增加而降低。这些因素被纳入模型，用于评估个体表观口服清除率及其个体间差异。对于所有具有可用药代动力学数据的患者，根据剂量和表观口服清除率估算全身暴露量。[1]

治疗暴露。甲基-varespladib/LY333013（LY315920）活性代谢物的平均血浆稳态浓度估计分别为：50 mg/天剂量组222 ng/ml，250 mg/天剂量组627 ng/ml，1000 mg/天剂量组1445 ng/ml。LY315920浓度与甲氨蝶呤（MTX）、柳氮磺胺吡啶和羟氯喹联合用药之间未见明显相互作用。91%的疗效分析患者服用了处方剂量80%至119%的研究药物。[1] 甲基-varespladib/LY333013是varespladib的一种快速吸收、口服生物利用度高的前药，可以口服给药（例如，以口服液的形式），因此即使是技能有限或完全没有技能的人也可以在医院外开始治疗。甲基-varespladib/LY333013 可代谢为 varespladib，因此，尽管静脉注射制剂在实际应用中的可能性不大，但我们概念验证研究的重点仍然是母体化合物。使用 3-取代吲哚类化合物抑制蛇毒 sPLA2 可能为开发有效的蛇咬伤现场治疗方法提供契机；在项目支持和行业合作下，这两种方法都可能得到快速开发。我们的研究结果表明，有必要对维拉普拉地布和甲基维拉普拉地布在更多种类的蛇类中的疗效进行进一步研究，以确定它们是否能成为人们长期以来梦寐以求的蛇咬伤一线现场治疗药物——毒液拮抗剂的重要组成部分。[2]

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血浆浓度和剂量选择[3]
图1显示了单次口服甲基维拉普拉地布/LY333013/A-002后血清中A-001的血浆浓度。在10、30和90 mg/kg剂量下，所有给药小鼠的样本中均可检测到A-001。在整个给药期间，最高两个剂量（30和90 mg/kg A-002）下血浆中A-001的浓度分别高于sPLA2 V组和X组的IC50值。

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分泌型磷脂酶 A2 (sPLA2) 酶家族与炎症性疾病和组织损伤（包括动脉粥样硬化）有关。 A-001 是一种通过基于结构的药物设计发现的新型 sPLA2 酶抑制剂，而 A-002（varespladib methyl/LY333013/S-3013）是目前正在进行临床开发的口服生物利用度较高的前药。A-001 可抑制人和小鼠的 sPLA2 IIA、V 和 X 组酶，其 IC50 值在低纳摩尔范围内。在 C57BL/6J 背景中过表达人 sPLA2 IIA 组的转基因小鼠中，A-002（1 mg/kg）可使血清中 A-001 浓度升高，并抑制 PLA2 活性。此外，还使用表面分析法评估了 A-002 对两种 ApoE−/− 小鼠模型动脉粥样硬化的影响。(1) 在高脂饮食模型中，A-002（30 和 90 mg/kg，每日两次，持续 16 周）可降低主动脉粥样硬化程度。动脉粥样硬化程度降低了 50% (P < 0.05)。血浆总胆固醇在 1 个月内显著降低 (P < 0.05)，并在整个研究期间保持较低水平。(2) 在血管紧张素 II 诱导主动脉病变和动脉瘤的加速动脉粥样硬化模型中，A-002（30 mg/kg，每日两次）使主动脉粥样硬化程度降低了约 40% (P < 0.05)，并减轻了动脉瘤的形成 (P = 0.0096)。因此，A-002 能有效显著降低这两种 ApoE−/− 小鼠模型中的总胆固醇、动脉粥样硬化和动脉瘤形成。[3]

安全性。在至少接受过一次研究药物治疗的251例患者中，182例报告了至少一次不良事件（AE）。最常见的不良事件包括：鼻炎（21.9%）、头痛（19.5%）、咳嗽（13.5%）、腹泻（9.2%）、恶心（8.8%）、发热（8.4%）、头晕（6.4%）、腹痛（6.0%）、鼻窦炎（6.0%）和咽炎（5.6%），各治疗组间这些不良事件的发生率均无统计学差异（表4）。总体而言，各治疗组的不良事件类型、严重程度和分布情况相似。安慰剂组发生不良事件（AE）的总体比例（60.3%）略低于甲基-varespladib/LY333013 50 mg/天组（69.4%）、250 mg/天组（79.0%）和1000 mg/天组（81.3%，总体p = 0.043），但按器官系统分析AE发现，仅心血管系统在各治疗组间存在统计学差异（p = 0.033）。心血管AE似乎与剂量无关；甲基-varespladib/LY333013 50 mg/天组和1000 mg/天组的发生率（分别为16.1%和15.6%）高于甲基-varespladib/LY333013 250 mg/天组（3.2%）和安慰剂组（4.3%）。 LY333013治疗组患者上呼吸道感染发生率较高，而安慰剂组患者尿路感染发生率较高。这些差异被认为不具有临床意义。6例出现非严重不良事件的患者停止了研究治疗：所有患者均接受LY333013治疗（表5）。这些不良事件包括：眩晕（50 mg组）；消化不良、恶心、皮疹（250 mg组）；乏力和嗜睡（1000 mg组）。安慰剂组和LY333013组分别有3例和4例患者出现严重不良事件；安慰剂组包括化脓性关节炎、肺炎和卒中，LY333013组包括胸痛（50 mg、250 mg和1000 mg组）和结肠憩室穿孔（50 mg组）。后一位患者有憩室炎病史，所有3例胸痛患者均有既往心血管疾病史。1例患者（250 mg组）接受了冠状动脉成形术。出现严重不良事件（如肺炎和结肠穿孔）的患者停止了研究治疗。研究者评估认为，仅后一种严重不良事件可能与研究治疗相关。研究期间无患者死亡。实验室指标、生命体征或心电图记录均未出现具有临床意义的变化。根据美国国家癌症研究所通用毒性标准（CTC）分级，安慰剂组和LY333013组之间仅血清AST和钙水平存在差异（p = 0.049）。所有患者均未出现任何分析物的CTC 4级异常；血清钙的最高CTC分级为2级。LY333013 1000 mg/天组的血清AST升高更为常见；该组最高值为122 IU。 [1]

[1]. A randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial of LY333013, a selective inhibitor of group II secretory phospholipase A2, in the treatment of rheumatoid arthritis. J Rheumatol. 2005 Mar;32(3):417-23.

[2]. Varespladib (LY315920) Appears to Be a Potent, Broad-Spectrum, Inhibitor of Snake Venom Phospholipase A2 and a Possible Pre-Referral Treatment for Envenomation. Toxins (Basel). 2016 Aug 25;8(9). pii: E248.

[3]. Varespladib (A-002), a Secretory Phospholipase A2 Inhibitor, Reduces Atherosclerosis and Aneurysm Formation in ApoE−/− Mice J Cardiovasc Pharmacol. 2009 Jan;53(1):60-5.

瓦瑞普拉地布甲酯（Varespladib methyl）或甲基-瓦瑞普拉地布/LY333013是瓦瑞普拉地布羧基与甲醇缩合的甲酯。它是一种潜在的治疗蛇咬伤中毒的药物，尤其适用于毒性依赖于磷脂酶A2（PLA2）作用的蛇咬伤。它具有前药、抗炎药、解毒剂和EC 3.1.1.4（磷脂酶A2）抑制剂的双重作用。它是一种甲酯、芳香醚、苯类化合物、吲哚类化合物和伯酰胺类化合物。其功能与瓦瑞普拉地布相关。
瓦瑞普拉地布甲酯曾被用于治疗急性冠脉综合征的研究。研究表明，Varespladib methyl 治疗可显著改善脂蛋白和炎症水平。

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药物适应症
已研究用于治疗动脉粥样硬化和冠状动脉疾病。

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作用机制
A-002 是一种口服的强效分泌型磷脂酶 SPL2 (SPL2) 抑制剂，包括 IIA、V 和 X 组。动脉粥样硬化是一种动脉疾病，由血管内壁炎症和斑块积聚引起。这种积聚可导致血管肿胀，最终破裂。研究表明，稳定型和不稳定型冠状动脉疾病患者的 SPL2 水平均升高。研究表明，该酶水平升高预示着未来发生心血管事件（例如心脏病发作和中风）的风险增加。

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Varespladib methyl 是 varespladib 的羧基与甲醇缩合而成的甲酯。它是一种潜在的治疗蛇咬伤中毒的药物，其毒性取决于 PLA2 的作用。它可用作前药、抗炎药、解毒剂和 EC 3.1.1.4（磷脂酶 A2）抑制剂。它是一种甲酯、芳香醚、苯类化合物、吲哚类化合物和伯酰胺。其功能与 varespladib 相关。
Varespladib methyl 已被研究用于治疗急性冠脉综合征。研究表明，Varespladib methyl 治疗可显著改善脂蛋白和炎症水平。
VARESPLADIB METHYL 是一种小分子药物，目前已完成 III 期临床试验（涵盖所有适应症），并有 3 个在研适应症。

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尽管一个多世纪以来人们一直呼吁改善蛇咬伤的预防和治疗，但蛇咬伤仍然是发展中国家一个被忽视的医学难题，每年仍有高达 125,000 人因此丧生。据估计，75% 的蛇咬伤死亡病例发生在医院外。由于磷脂酶 A2 (PLA2) 活性是蛇毒毒性的重要组成部分，我们通过直接测试药物来寻找候选 PLA2 抑制剂。令人惊讶的是，varespladib及其口服生物利用度高的前药methyl-varespladib/LY333013在纳摩尔和皮摩尔浓度下，对来自六大洲的28种具有重要医学价值的蛇毒均表现出高水平的分泌型磷脂酶A2 (sPLA2)抑制作用。varespladib的体内概念验证研究表明，其能显著提高小鼠对致死剂量黄腹蝰蛇(Micrurus fulvius)和欧洲蝰蛇(Vipera berus)毒液的存活率，并能抑制经100%致死剂量黄腹蝰蛇毒液攻击的大鼠体内毒液诱导的sPLA2活性。快速开发和应用广谱PLA2抑制剂，无论是单独使用还是与其他小分子蛇毒抑制剂（例如金属蛋白酶抑制剂）联合使用，都有望填补从就诊前到住院治疗的关键空白。降低已进行安全性测试并重新利用的小分子疗法的临床试验门槛，是填补蛇咬伤转诊前治疗空白的一种潜在经济有效的途径。[2] 分泌型磷脂酶A2 (sPLA2) 酶家族与炎症性疾病和组织损伤（包括动脉粥样硬化）相关。A-001 是一种通过基于结构的药物设计发现的新型 sPLA2 酶抑制剂，而甲基-varespladib/LY333013/A-002 是目前正在进行临床开发的口服生物利用度较高的前药。A-001 对人和小鼠的 sPLA2 IIA、V 和 X 组酶均有抑制作用，IC50 值在低纳摩尔范围内。在C57BL/6J背景下过表达人sPLA2 IIA组的转基因小鼠中，A-002（1 mg/kg）可导致血清中A-001水平升高，并抑制PLA2活性。此外，还采用表面分析法评估了A-002对两种ApoE−/−小鼠模型动脉粥样硬化的影响。(1) 在高脂饮食模型中，A-002/甲基-varespladib/LY333013（30和90 mg/kg，每日两次，持续16周）可使主动脉粥样硬化程度降低50%（P < 0.05）。血浆总胆固醇在1个月时即显著降低（P < 0.05），并在整个研究期间保持较低水平。 (2) 在血管紧张素 II 诱导主动脉病变和动脉瘤的加速动脉粥样硬化模型中，A-002（30 mg/kg，每日两次）使主动脉粥样硬化减少约 40% (P < 0.05)，并减轻动脉瘤形成 (P = 0.0096)。因此，A-002 能有效显著降低这两种 ApoE−/− 小鼠模型中的总胆固醇、动脉粥样硬化和动脉瘤形成。[3]

C22H22N2O5

394.427

394.153

C, 66.99; H, 5.62; N, 7.10; O, 20.28

172733-08-3

Varespladib;172732-68-2; 172733-42-5 (Varespladib sodium)

9886917

White to off-white solid powder

3.172

100.62

1

5

9

29

604

0

CCC1=C(C2=C(N1CC3=CC=CC=C3)C=CC=C2OCC(=O)OC)C(=O)C(=O)N

VJYDOJXJUCJUHL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H22N2O5/c1-3-15-20(21(26)22(23)27)19-16(24(15)12-14-8-5-4-6-9-14)10-7-11-17(19)29-13-18(25)28-2/h4-11H,3,12-13H2,1-2H3,(H2,23,27)

methyl 2-(1-benzyl-2-ethyl-3-oxamoylindol-4-yl)oxyacetate

A002; LY-333013; S-3013; A002; A-002; LY333013; Varespladib methyl; 172733-08-3; LY-333,013; Varespladib methyl [USAN]; LY333,013; Varespladib methyl ester; S3013

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~253.54 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。