sPLA2/secretory phospholipase A2 (IC50 = 9 nM)

在两个时间间隔的细胞裂解物中观察到的 RA 诱导的 MUC16 蛋白升高完全被维普拉地钠（10 μM；24 和 48 小时；HCjE 细胞）治疗所抑制 [2]。 vespladib钠（10μM）给药可强烈抑制HCjE细胞中RA诱导的MUC16表达，24小时抑制率为100%，48小时抑制率为99%[2]。

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Varespladib（LY-315920）是重组人IIA组非胰腺分泌型PLA2（sPLA2）的强效选择性抑制剂。在显色分离酶测定中，Varespladib（LY-315920）抑制sPLA2活性，IC50为9+/-1 nM或7.3 x 10（-6）摩尔分数，接近该测定的刺激测量极限。Varespladib (LY-315920)的真实效力是通过脱氧胆酸盐/磷脂酰胆碱测定法确定的，摩尔分数为1.5 x 10（-6）。LY315920对人、IB组、胰腺sPLA2的活性低40倍，对细胞质PLA2和环氧化酶的组成型和诱导型没有活性。LY315920抑制了人sPLA2诱导的豚鼠肺支气管肺泡灌洗液细胞释放血栓素A2（TXA2），IC50为0.79微M。N-甲酰基-甲磺酰基-亮酰基-苯丙氨酸或花生四烯酸对这些细胞释放TXA2没有抑制作用。[1]

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在使用广谱PLA2抑制剂ArA抑制RA诱导的MUC16上调后，我们试图确定IIA组sPLA2的特异性抑制剂Varespladib (LY-315920)是否会影响RA诱导的MUC16表达。我们通过实时PCR检测了HCjE培养物中MUC16 mRNA的表达水平，这些培养物分别用载体（DMSO）、100nM RA、100nM RA+10μmVarespladib（LY-315920）或单独使用10μm Varespladib (LY-315920)处理24和48小时。如图6所示，添加10μm LY315920显著抑制了RA诱导的MUC16表达，24小时时抑制率为100%，48小时时抑制了99%。如图7所示，添加sPLA2 IIA的特异性抑制剂LY315920可完全抑制RA诱导的MUC16蛋白在24（p<0.01）和48（p<0.0001）小时时在细胞裂解物中检测到的增加[2]。

给予伐瑞拉迪巴钠后，观察到对豚鼠肺支气管灌洗细胞中人 sPLA2 诱导的血栓素 A2 (TXA2) 释放的抑制作用的 IC50 为 0.79 μM。伐瑞拉迪钠的 ED50 为 16.1 mg/kg[1]。
在采集支气管肺泡灌洗液细胞前5分钟静脉注射Varespladib（LY-315920），导致sPLA2诱导的TXA2产生受到抑制，ED50为16.1mg/kg。用sPLA2攻击豚鼠肺胸膜条产生收缩反应，这些反应被Varespladib（LY-31592 0）以浓度依赖的方式抑制，表观KB为83+/-14nM。花生四烯酸诱导的收缩反应没有改变。向表达人sPLA2蛋白的转基因小鼠静脉或口服Varespladib（LY-315920），在4小时的时间过程中以剂量相关的方式抑制血清sPLA2活性Varespladib（LY-315920）是一种强效且选择性的sPLA2抑制剂，代表了一类新的抗炎药SPI。该药物目前正在进行临床评估，应有助于确定sPLA2在各种炎症性疾病状态中的作用[1]。

磷脂酶A2抑制剂治疗[2]
为了研究RA对MUC16的调节是否与sPLA2有关，在如上所述与100 nM RA加100μM ArA（抑制剂或载体（DMSO）单独培养24和48小时的HCjE细胞中，测定了广谱PLA2抑制剂马兜铃酸（ArA）对MUC16mRNA水平的影响。在这些实验之后，测试了IIA组分泌型磷脂酶A2特异性抑制剂Varespladib (LY-315920)的效果。HCjE细胞分别用100nM RA、100nM RA加10μmVarespladib（LY-315920）、抑制剂或载体（DMSO）单独处理24和48小时。分别通过实时PCR和Western blot分析测定MUC16 mRNA和蛋白质水平。两种抑制剂都进行了两次实验，每次实验重复两次。

蛋白质印迹分析 [2]
细胞类型： HCjE 细胞
测试浓度： 10 μM
孵育时间： 24 hrs（小时）、48 hrs（小时）
实验结果：RA 诱导的 MUC16 蛋白表达在两个时间点均受到显着抑制。

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RT-PCR[2]
细胞类型： HCjE 细胞
测试浓度： 10 μM
孵育时间：24小时、48小时
实验结果：显着抑制RA诱导的MUC16表达，24小时时达到100%（ hrs（小时））和 48 hrs（hrs（小时））时为 99%。

动物/疾病模型：雄性哈特利豚鼠（300-500 g）[1]
剂量：3 mg/kg、10 mg/kg 和 30 mg/kg
给药途径：静脉注射（药代动力学/PK/PK 研究）
实验结果：观察到支气管肺泡灌洗液中 sPLA2 活性持续受到抑制。人 sPLA2 诱导的豚鼠支气管肺泡灌洗液细胞中 TXA2 的产生减少。

[1]. Pharmacology of LY315920/S-5920, [[3-(aminooxoacetyl)-2-ethyl-1- (phenylmethyl)-1H-indol-4-yl]oxy] acetate, a potent and selective secretory phospholipase A2 inhibitor: A new class of anti-inflammatory drugs, SPI. J Pharmacol Exp Ther. 1.

[2]. Effect of retinoic acid on gene expression in human conjunctival epithelium: secretory phospholipase A2 mediates retinoic acid induction of MUC16. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005 Nov;46(11):4050-61.

瓦瑞斯普拉地钠是一种静脉注射的分泌型磷脂酶A2 (sPLA2) 抑制剂，具有孤儿药资格。瓦瑞斯普拉地钠正在进行临床试验，用于预防镰状细胞病治疗中的急性胸痛综合征。

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瓦瑞斯普拉地钠属于吲哚类化合物，其结构为1H-吲哚，分别在1、2、3和4位被苄基、乙基、草酰胺基和羧甲氧基取代。它是一种口服分泌型磷脂酶A2抑制剂，具有抗炎作用。它可作为EC 3.1.1.4（磷脂酶A2）抑制剂、抗炎药和解毒剂。它属于吲哚类、苯类、芳香醚类、二羧酸单酰胺类、单羧酸类和伯羧酰胺类化合物。它是varespladib(1-)的共轭酸。
Varespladib已被研究用于治疗和预防镰状细胞病、血管闭塞危象和急性冠脉综合征。

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LY315920是一种强效、选择性的重组人IIA组非胰腺分泌型PLA2 (sPLA2)抑制剂。在显色分离酶测定中，LY315920抑制sPLA2活性的IC50为9±1 nM或7.3×10⁻⁶摩尔分数，接近该测定的化学计量极限。LY315920的真实效力通过脱氧胆酸/磷脂酰胆碱测定确定，摩尔分数为1.5×10⁻⁶。 LY315920 对人 IB 组胰腺 sPLA2 的活性降低了 40 倍，并且对胞质 PLA2 以及组成型和诱导型环氧合酶均无活性。LY315920 可抑制人 sPLA2 诱导的豚鼠肺支气管肺泡灌洗细胞释放血栓素 A2 (TXA2)，IC50 为 0.79 μM。N-甲酰甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸或花生四烯酸诱导的这些细胞释放 TXA2 则不受抑制。在收集支气管肺泡灌洗细胞前 5 分钟静脉注射 LY315920，可抑制 sPLA2 诱导的 TXA2 生成，ED50 为 16.1 mg/kg。用 sPLA2 刺激豚鼠肺胸膜条可产生收缩反应，该反应可被 LY315920 以浓度依赖的方式抑制，其表观 KB 值为 83 ± 14 nM。花生四烯酸诱导的收缩反应未受影响。向表达人 sPLA2 蛋白的转基因小鼠静脉或口服 LY315920，可在 4 小时内以剂量依赖的方式抑制血清 sPLA2 活性。LY315920 是一种强效且选择性的 sPLA2 抑制剂，代表了一类新型抗炎药，命名为 SPI。该药物目前正在进行临床评估，有望帮助阐明 sPLA2 在各种炎症性疾病中的作用。[1]

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目的：维生素 A 如何维持眼表湿润表型尚不清楚。本研究旨在利用基因芯片分析，鉴定眼表上皮细胞中对维生素A有反应的基因。研究对象为用全反式维甲酸（RA）培养的人结膜上皮（HCjE）细胞系。分析结果显示，分泌型磷脂酶A2 IIA组（sPLA2-IIA）是RA上调最显著的基因，其次是膜相关黏蛋白MUC16，但上调时间较晚。由于PLA2家族产生的花生四烯酸产物——类花生酸已被证实能够增加黏蛋白的生成，因此本研究旨在探究sPLA2是否介导RA诱导MUC16的表达。
方法：将HCjE细胞在有或无RA的培养基中培养3、6、24和48小时。从HCjE细胞RNA制备的互补RNA与人基因芯片杂交，并使用商业软件进行分析。通过实时PCR验证了粘蛋白表达的微阵列数据。为了研究sPLA(2)是否与RA诱导的MUC16上调相关，将HCjE细胞与RA和广谱PLA(2)抑制剂马兜铃酸(ArA)或特异性sPLA(2)-IIA抑制剂LY315920孵育，然后通过实时PCR和Western blot分析MUC16 mRNA和蛋白的表达。
结果：加入RA后，在3小时和6小时（早期），有28个转录本上调，6个转录本下调超过2倍（P < 0.01）。在24小时和48小时（晚期），有80个基因转录本上调，45个基因转录本下调。 IIA组sPLA(2)在24小时显著上调，而MUC16是RA处理48小时后上调最显著的RNA。Western blot分析证实了RA对sPLA(2)的上调作用。当HCjE细胞与RA联合ArA或sPLA(2)-IIA特异性抑制剂LY315920孵育时，RA诱导的MUC16 mRNA显著降低（P < 0.01）。
结论：RA在后期诱导的膜相关黏蛋白MUC16的上调似乎是通过sPLA(2)-IIA介导的。这种亲水性膜相关黏蛋白的上调可能是维生素A促进眼表湿润表型维持的重要机制之一。[2]

C21H19N2NAO5

402.375736474991

402.119

C, 62.68; H, 4.76; N, 6.96; Na, 5.71; O, 19.88

172733-42-5

Varespladib;172732-68-2

23674730

Off-white to light yellow solid powder

1.749

114.45

1

5

8

29

596

0

CCC1=C(C2=C(N1CC3=CC=CC=C3)C=CC=C2OCC(=O)[O-])C(=O)C(=O)N.[Na+]

XZZUHXILQXLTGV-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C21H20N2O5.Na/c1-2-14-19(20(26)21(22)27)18-15(9-6-10-16(18)28-12-17(24)25)23(14)11-13-7-4-3-5-8-13;/h3-10H,2,11-12H2,1H3,(H2,22,27)(H,24,25);/q;+1/p-1

sodium;2-(1-benzyl-2-ethyl-3-oxamoylindol-4-yl)oxyacetate

Varespladib sodium; 172733-42-5; UNII-F6M52CDT0W; LY315920-Na; Varespladib Sodium [USAN]; LY315920-Sodium salt; F6M52CDT0W; Varespladib (sodium);

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。