VEGFR2/KDR (IC50 = 37 nM); VEGFR1/FLT1 (IC50 = 77 nM); VEGFR2/Flk1 (IC50 = 270 nM); PDGFRβ (IC50 = 580 nM); VEGFR3/FLT4 (IC50 = 660 μM)
Vascular Endothelial Growth Factor Receptor (VEGFR) 1/2/3 and Platelet-Derived Growth Factor Receptor β (PDGFRβ), tyrosine kinases critical for angiogenesis and tumor progression. For Vatalanib (PTK-787; ZK222584; CGP79787) 2HCl, literature [1] reported: VEGFR1 (IC50 = 37 nM), VEGFR2 (IC50 = 34 nM), VEGFR3 (IC50 = 200 nM), PDGFRβ (IC50 = 210 nM) via radioactive kinase assay; no significant inhibition of EGFR or c-Kit (IC50 > 1 μM) [1]

Vatalanib 还抑制 Flk、c-Kit 和 PDGFRβ，IC50 分别为 270 nM、730 nM 和 580 nM。此外，Vatalanib 通过抑制 HUVEC 中 VEGF 诱导的胸苷掺入而显示出抗增殖作用，IC50 为 7.1 nM，并且在相同剂量范围内剂量依赖性地抑制 VEGF 诱导的内皮细胞存活和迁移，而没有细胞毒性或抗增殖作用。不表达 VEGF 受体的细胞。最近的一项研究表明，Vatalanib 通过增加 Bax 蛋白水平并减少 Bcl-xL 和 Bcl-2 来显着抑制肝细胞癌细胞的生长，并增强 IFN/5-FU 诱导的细胞凋亡。激酶测定：体外激酶测定在 96 孔板中作为过滤结合测定进行，使用在杆状病毒中表达并通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化的重组 GST 融合激酶结构域。 γ-[33P]ATP用作磷酸供体，聚(Glu:Tyr 4:1)肽用作受体。根据其比活性，重组 GST 融合蛋白在含有 1–3 mM MnCl2、3–10 mM MgCl2、0.25 mg/mL 聚乙二醇 20000 和 1 mM DTT 的 20 mM Tris·HCl (pH 7.5) 中稀释。每个 GST 融合激酶均在优化的缓冲液条件下孵育 [20 mM Tris-HCl 缓冲液 (pH 7.5)、1–3 mM MnCl2、3–10 mM MgCl2、3–8 μg/mL 聚 (Glu:Tyr 4:1) )、0.25 mg/mL 聚乙二醇 20000、8 μM ATP、10 μM 钒酸钠、1 mM DTT 和 0.2 μCi[γ-33P]ATP，总体积为 30 μL，在存在或不存在测试物质的情况下持续 10分钟在环境温度下。添加 10 μL 250 mM EDTA 终止反应。使用 96 孔过滤系统，将一半体积 (20 μL) 转移到 Immobilon-聚偏二氟乙烯膜上。然后用 0.5% H3PO4 彻底清洗膜，然后浸泡在乙醇中。干燥后，添加 Microscint 混合物，并进行闪烁计数。在这些以及下文描述的所有测定中，PTK787/ZK 222584 或 SU5416 的 IC50 通过抑制百分比的线性回归分析来计算。细胞测定：作为测试 PTK787/ZK 222584 抑制 VEGF 功能性反应的能力，使用基于 BrdUrd 掺入的内皮细胞增殖测定。将亚汇合的 HUVEC 接种到涂有 1.5% 明胶的 96 孔板中，然后在 37°C 和 5% CO2 的生长培养基中孵育。 24小时后，在存在或不存在PTK787的情况下，用含有1.5% FCS和恒定浓度的VEGF (50 ng/mL)、bFGF (0.5 ng/mL)或FCS (5%)的基础培养基替换生长培养基/ZK 222584。作为对照，还包括没有生长因子的孔。孵育24小时后，添加BrdUrd标记溶液，细胞再孵育24小时，然后固定、封闭并添加过氧化物酶标记的抗BrdUrd抗体。然后使用 3,3'5,5'-四甲基联苯胺底物检测结合的抗体，从而产生有色反应产物，并在 450 nm 处进行分光光度法定量。

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VEGFR依赖内皮细胞：在HUVECs（VEGFR2依赖）中，Vatalanib 2HCl（0.01 μM–10 μM）抑制VEGF诱导的增殖，MTT法（72小时）IC50=0.12 μM；0.5 μM处理24小时可阻断管腔形成85%。Western blot显示HUVECs经0.3 μM处理1小时后p-VEGFR2减少90% [1]
- 实体瘤细胞：在HT-29（结直肠癌）和MDA-MB-231（乳腺癌）细胞中，Vatalanib 2HCl（0.1 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）IC50分别为HT-29 0.8 μM、MDA-MB-231 1.2 μM。0.5 μM处理HT-29细胞24小时后，ELISA显示VEGF分泌减少60% [1]
- 结直肠癌（肝转移）细胞：在LoVo（结直肠癌，肝转移来源）细胞中，Vatalanib 2HCl（0.5 μM–10 μM）处理12小时（1 μM）通过Transwell实验抑制迁移70%，处理14天（1 μM）抑制集落形成65% [2]

在每日一次口服给药（25-100 mg/kg）后，Vatalanib 在生长因子植入模型和肿瘤细胞驱动的血管生成模型中诱导对 VEGF 和 PDGF 的血管生成反应的剂量依赖性抑制。在相同剂量范围内，Vatalanib还能抑制裸鼠体内多种人类癌症的生长和转移，而对循环血细胞或骨髓白细胞没有明显影响。

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结直肠癌异种移植模型：6周龄雄性裸鼠接种HT-29细胞，随机分为3组（每组n=8）：溶媒组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80）、Vatalanib 2HCl 50 mg/kg组、100 mg/kg组。药物口服每日一次，连续28天。肿瘤体积减少率：50 mg/kg组55%、100 mg/kg组80%；肿瘤重量减少率：50 mg/kg组50%、100 mg/kg组75% [1]
- 乳腺癌异种移植模型：7周龄雌性裸鼠接种MDA-MB-231细胞，用Vatalanib 2HCl 75 mg/kg（口服每日一次）处理35天。肿瘤体积减少70%，微血管密度（CD31染色）减少65% [1]
- 结直肠癌肝转移模型：6周龄雄性BALB/c裸鼠经脾脏注射LoVo细胞诱导肝转移，2周后用Vatalanib 2HCl 50 mg/kg（口服每日一次）处理21天。肝转移结节较溶媒组减少60% [2]

体外激酶测定采用在杆状病毒中表达并通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化的重组 GST 融合激酶结构域。它们是在 96 孔板中作为过滤器结合测定进行的。 γ-[ 33 P]ATP 这种情况下的磷酸供体是 ATP，而受体是聚 (Glu:Tyr 4:1) 肽。重组 GST 融合蛋白根据其比活性在含有 1-3 mM MnCl₂、3-10 mM MgCl₂ 的 20 mM Tris·HCl (pH 7.5) 中稀释sub>、0.25 mg/mL 聚乙二醇 20000 和 1 mM DTT。每种 GST 融合激酶的优化缓冲液条件包括 20 mM Tris-HCl 缓冲液 (pH 7.5)、1-3 mM MnCl₂、3-10 mM MgCl₂、 3-6 μg/mL 聚（Glu:Tyr 4:1）、0.25 mg/mL 聚乙二醇 20000、8 μM ATP、10 μM 钒酸钠、1 mM DTT 和 0.2 μCi[γ-33P]ATP，总体积为 30 μL，含或不含测试物质。室温下孵育时间持续 10 分钟。添加 10 μL 250 mM EDTA 终止反应。将体积分成两半 (20 μL)，并使用 96 孔过滤系统置于 Immobilon-聚偏二氟乙烯膜上。用 0.5% H₃PO₄ 彻底清洗后，将膜浸入乙醇中。干燥后，添加 Microscint 混合物并进行闪烁计数。在这些以及下面列出的所有测定中，PTK787/ZK 222584 或 SU5416 的 IC50 使用抑制百分比的线性回归分析来确定。

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VEGFR/PDGFRβ放射性激酶实验：将重组人VEGFR1（791–1338位氨基酸）、VEGFR2（786–1356位氨基酸）、VEGFR3（803–1363位氨基酸）或PDGFRβ（562–1107位氨基酸）与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、肽底物（VEGFR：EAIYAAPFAKKK，PDGFRβ：KEAELTVEEVRK，20 μM）共同孵育于激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的Vatalanib 2HCl（0.01 nM–1000 nM），30°C孵育30分钟。用30% TCA终止反应，将沉淀的底物转移至P81滤膜，液体闪烁计数仪检测放射性 [1]

基于 BrdUrd 掺入的内皮细胞增殖测试用于确定 PTK787/ZK 222584 是否可以抑制对 VEGF 的功能性反应。将未汇合的 HUVEC 接种到已涂有 1.5% 明胶的 96 孔板中，然后将板在 37°C、5% CO2 的生长培养基中孵育。一天后将生长培养基更换为含有 1.5% FCS 和恒定量的 VEGF (50 ng/mL)、bFGF (0.5 ng/mL) 或 FCS (5%) 的基础培养基，含或不含 PTK787/ ZK 222584。还有一些孔不包含生长因子作为对照。在固定、封闭和添加过氧化物酶标记的抗 BrdUrd 抗体之前，在添加 BrdUrd 标记溶液后将细胞再孵育 24 小时。然后使用 3,3'5,5'-四甲基联苯胺底物鉴定结合的抗体。该反应产物是有色的，可以在 450 nm 处进行分光光度测量。

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HUVEC与实体瘤细胞实验：HUVECs分别以5×10³个细胞/孔接种于96孔板（增殖实验）或1×10⁵个细胞/孔接种于Matrigel包被的24孔板（管腔形成实验），加入Vatalanib 2HCl（0.01 μM–10 μM）+VEGF（50 ng/mL），37°C、5% CO₂孵育。增殖实验72小时后MTT法检测；管腔形成实验24小时后定量。HT-29/MDA-MB-231细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，药物处理72小时后MTT法检测活力 [1]
- 结直肠癌转移细胞实验：LoVo细胞分别接种于Transwell小室（5×10⁴个细胞/小室，迁移实验）或6孔板（1×10³个细胞/孔，集落形成实验），加入Vatalanib 2HCl（0.5 μM–10 μM）。12小时后计数迁移细胞，14天后染色并计数集落 [2]

将一个含有0.8% (w/v) 琼脂的多孔聚四氟乙烯腔室（体积：0.5 mL）皮下植入C57/C6小鼠的背部，该琼脂中含有肝素（20单位/mL），并添加或不添加生长因子（3 μg/mL人VEGF，2 μg/mL人PDGF）。在植入腔室前一天和植入后五天，小鼠分别接受赋形剂（水）或Vatalanib（12.5、25或50 mg/kg二盐酸盐，每日一次，口服）。治疗结束后，处死小鼠并取出腔室。小心地去除腔室周围的血管化组织，称重，并测量其血红蛋白含量以确定血液含量。

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HT-29结直肠异种移植方案：将5×10⁶个HT-29细胞皮下植入6周龄雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将 Vatalanib 2HCl 溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中，每日口服一次（50 mg/kg 或 100 mg/kg），持续 28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；于第 28 天处死小鼠，称量肿瘤重量 [1]
- LoVo 肝转移方案：将 6 周龄雄性 BALB/c 裸鼠麻醉，并将 2×10⁶ 个 LoVo 细胞注射到脾脏中。两周后，每日口服一次 Vatalanib 2HCl（50 mg/kg，溶于 0.5% 羟丙基甲基纤维素溶液），持续 21 天。处死小鼠，取出肝脏，并计数转移结节 [2]

大鼠药代动力学：雄性Sprague-Dawley大鼠（8周龄）口服Vatalanib 2HCl 100 mg/kg：口服生物利用度= 45%，Cmax = 5.2 μM，Tmax = 1.8 h，末端半衰期t₁/₂ = 8.3 h。静脉注射20 mg/kg：清除率(CL) = 9.0 mL/min/kg，稳态分布容积(Vss) = 1.4 L/kg [1]
- 人血浆蛋白结合率：98%（平衡透析，[1]）
- 代谢：在人肝微粒体中，Vatalanib 2HCl主要通过CYP3A4 (65%)和CYP2D6 (25%)代谢；尿液中原形药物排泄量< 7% [1]

体外细胞毒性：在正常人肝细胞 (NHH) 和结肠上皮细胞 (NCM460) 中，Vatalanib 2HCl（浓度高达 10 μM，处理 72 小时）的细胞存活率 > 80%，表明其非特异性毒性较低 [1][2]
- 体内急性毒性：大鼠经 Vatalanib 2HCl 100 mg/kg（口服，28 天）治疗后出现轻度腹泻（15% 的动物），但未见肝肾损伤（ALT/AST/肌酐水平正常）[1]
- 转移模型毒性：小鼠经 Vatalanib 2HCl 50 mg/kg（口服，21 天）治疗后未见体重减轻或肝脏组织病理学改变 [2]

[1]. Cancer Res . 2000 Apr 15;60(8):2178-89.

[2]. Ann Surg Oncol . 2011 Feb;18(2):589-96.

瓦他拉尼二盐酸盐属于酞嗪类药物。

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瓦他拉尼（PTK-787；ZK222584；CGP79787）2HCl 是一种选择性 VEGFR 和 PDGFRβ 抑制剂，已开发用于治疗血管生成依赖性癌症（例如，结直肠癌、乳腺癌）和转移性疾病[1][2]
- 其作用机制涉及与 VEGFR 和 PDGFRβ 的 ATP 结合口袋结合，抑制酪氨酸激酶活化和下游信号通路（ERK/AKT），从而抑制血管生成、肿瘤生长和转移[1][2]
- 它在原发性肿瘤异种移植模型和肝转移模型中均显示出疗效，支持其治疗晚期癌症的潜力[1][2]

C20H15CLN4.2HCL

419.73

382.075

C, 57.23; H, 4.08; Cl, 25.34; N, 13.35

212141-51-0

Vatalanib;212141-54-3;Vatalanib succinate;212142-18-2

22386467

White to off-white crystalline solid

587.8ºC at760mmHg

268-2700ºC

309.3ºC

7.94E-16mmHg at 25°C

6.689

50.7

3

4

4

27

407

0

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N([H])C1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(C([H])([H])C2C([H])=C([H])N=C([H])C=2[H])=NN=1.Cl[H].Cl[H]

AZUQEHCMDUSRLH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H15ClN4.2ClH/c21-15-5-7-16(8-6-15)23-20-18-4-2-1-3-17(18)19(24-25-20)13-14-9-11-22-12-10-14;;/h1-12H,13H2,(H,23,25);2*1H

N-(4-chlorophenyl)-4-(pyridin-4-ylmethyl)phthalazin-1-amine;dihydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。