D4 Receptor; 5-HT1A Receptor (pIC50 = 8.87); 5-HT1A Receptor (pA2 = 9.71)
WAY 100635 targets the 5-hydroxytryptamine 1A (5-HT1A) receptor, a serotonin receptor that is involved in mood, anxiety, and cognition. It is a potent and selective antagonist at this receptor. The compound also exhibits high affinity and efficacy at the dopamine D4 receptor, acting as an agonist.

在持续表达多巴胺D2L或D4.4受体的HEK 293细胞中，评估了WAY-100635的功能特性和结合亲和力[1]。WAY-100635对D2L、D3和D4.2受体的结合亲和力分别为940 nM、370 nM和16 nM。饱和分析表明，[3H]WAY-100635在D4.2受体上的解离常数（Kd）为2.4 nM。WAY-100635的EC50为9.7 nM，使其成为HEK-D4.4细胞中的强效激动剂。 WAY-100635 对 D4.4 受体具有很强的亲和力，Ki 值为 3.3 nM [1]。WAY-100635 是一种强效的 5-HT1A 受体拮抗剂，IC50 值为 0.91 nM，Ki 值为 0.39 nM。它对多巴胺 D4 受体也表现出高亲和力（Ki = 3.3 nM）。该化合物可消除条件反射过程中海马 CA1 锥体神经元放电频率的降低，证实了其作为 5-HT1A 受体拮抗剂的功能活性。

在雄性Sprague-Dawley大鼠中，使用WAY-100635（1 mg/kg；皮下注射）治疗可消除红景天在尼古丁依赖性大鼠中引起的戒断症状严重程度的减轻[2]。

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[3H]研究表明，静脉注射WAY-100635后，可特异性地与小鼠脑内的5-HT1A受体结合。此外，WAY-100635呈剂量依赖性地抑制8-OH-DPAT引起“5-HT综合征”（体温过低、食欲亢进和血浆ACTH水平升高）的能力。这是通过抑制背侧缝核5-HT神经元的放电实现的。WAY-100635在小鼠明暗箱焦虑模型中产生类似抗焦虑的作用。在延迟匹配位置大鼠短期记忆模型中，WAY 100635 可逆转 8-OH-DPAT 对运动动机表现的破坏性影响，但对认知本身无影响。[2] 在麻醉大鼠中，WAY 100635 可抑制 8-OH-DPAT 对背缝核神经元放电的抑制作用，而该剂量本身并不具有抑制作用。在行为模型中，WAY 100635 不会直接引起大鼠或豚鼠的任何明显行为改变，但能有效对抗 8-OH-DPAT 引起的行为综合征（最小有效剂量为 0.003 mg/kg 皮下注射，ID50 为 0.01 mg/kg 皮下注射）。 WAY 100635 的 ID50 值为 0.01 mg/kg 皮下注射，可预防 8-OH-DPAT 在大鼠和小鼠中引起的体温过低。WAY 100635 已被广泛用于体内研究 5-HT1A 受体在各种行为和生理过程中的作用。在动物模型中，该化合物可阻断 5-HT1A 受体介导的效应，例如体温过低、行为反应和神经内分泌效应。它还能消除条件反射过程中海马 CA1 锥体神经元放电频率的降低。

筛选实验[1]
NIMH-PDSP 对大量克隆受体和转运蛋白进行初步筛选时（详情参见 Roth 等 (2002) 和 Shapiro 等 (2003)），使用 10 μM WAY-100635。当检测到显著抑制（四次重复测定抑制率 >50%）时，使用 6-10 个浓度的未标记配体进行 Ki 测定，并使用 GraphPad Prism 分析数据。

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饱和结合实验[1]
通过刮取培养基中的细胞，然后在 1,000×g 下离心 10 分钟，并吸出培养基，收集全细胞沉淀。将沉淀物重悬于冰冷的标准结合缓冲液（SBB：50 mM Tris-HCl，pH 7.4，10 mM MgCl2 和 0.1 mM EDTA）中，分装，在 4°C 下以 14,000×g 离心 20 分钟以沉淀膜级分，吸出上清液，并储存于 -80°C 以备后用。[1]
5-HT1A 沉淀物用冰冷的 SBB 重悬洗涤，并在 4°C 下以 14,000×g 离心 15 分钟，吸出缓冲液。hD4.2 沉淀物以类似方式洗涤，但使用冰冷的多巴胺激动剂结合缓冲液（DABB：50 mM Tris-HCl，pH 7.4，5 mM KCl，2 mM MgCl2，2 mM CaCl2）。将洗涤后的 5-HT1A 膜在室温下用 Dounce 均质器匀浆于 SSB 缓冲液中，并与 12 种浓度的 [3H]WAY-100635（浓度范围为 0.004 至 2.3 nM）在有无 10 μM 5-HT 存在下孵育，分别测定总结合和非特异性结合。同样，将洗涤后的 hD4.2 膜在室温下用 Dounce 均质器匀浆于 DABB 缓冲液中，并与 12 种浓度的 [3H]WAY-100635（浓度范围为 0.004 至 13.4 nM）在有无 10 μM 氯丙嗪存在下孵育，分别测定总结合和非特异性结合。室温孵育 2 小时后，通过快速过滤到预先浸泡过 0.3% PEI 的冷滤膜上终止反应。然后将滤膜在 4°C 的 50 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 6.9）中洗涤三次。过滤后的物质转移至闪烁瓶中，加入 4 ml Ecoscint-A 闪烁液（National Diagnostic；美国佐治亚州亚特兰大），并在 Beckman LS6500 闪烁计数器上进行计数。[1]

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放射性配体结合试验[1]
将细胞培养至 20 cm 培养皿中汇合。弃去培养基，加入 10 ml 冰冷的裂解缓冲液（1 mM HEPES，pH 7.4，2 mM EDTA）。10 分钟后，将细胞从培养皿中刮下，并在 4°C 下以 30,000×g 离心 20 分钟。将所得沉淀物用Kinematica匀浆器以6档匀浆5秒，重悬于4 ml受体结合缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.4，4 mM MgCl₂）中。取1.0 ml匀浆液再次以13,000×g离心10分钟。沉淀物保存于-80°C直至使用。[1]
然后将沉淀物用受体结合缓冲液研磨重悬（50 μg蛋白/100 μl），一式两份加入含有0.1–0.2 nM [³H]螺哌隆和相应药物的测定管中。使用(+)-丁酰氯胺酮（5 μM）测定非特异性结合。测定管在37°C孵育30分钟后进行过滤，方法与cAMP结合测定相同。将滤板干燥后，向每个孔中加入30 μl Packard Microscint-O闪烁液。使用Packard TopCount闪烁计数器测定每个孔的放射性。[1]
还进行了放射性配体结合实验，以研究100 μM鸟苷酰-5′-亚氨基二磷酸（Gpp-[NH]p）对激动剂结合的影响。这些实验在改良的受体结合缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.4，4 mM MgCl₂和120 mM NaCl）中使用HEK-hD4.4细胞膜进行。

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使用表达人5-HT1A受体的细胞膜制备物，通过放射性配体结合实验评估5-HT1A受体的结合亲和力。竞争性结合实验使用[³H]-8-OH-DPAT或[³H]-WAY-100635作为放射性配体。将 WAY 100635 以不同浓度进行孵育，并根据置换曲线计算 Ki 值。评估其对其他血清素和多巴胺受体的选择性。

环磷酸腺苷（cAMP）积累测定[1]
将细胞培养至48孔透明组织培养板中形成融合单层。测定前，弃去培养基，并将培养板置于冰上。将药物用Earle平衡盐溶液（EBSS）测定缓冲液（含2%小牛血清、0.025%抗坏血酸和15 mM HEPES，pH 7.4）稀释后，置于冰上加入孔板。用5 μM福斯克林刺激cAMP积累，并在500 μM异丁基甲基黄嘌呤存在下进行测定。在37°C水浴中孵育15分钟。为终止刺激，弃去培养基，并在冰上加入100 μl 3%三氯乙酸裂解细胞。在进行 cAMP 定量分析前，将培养板置于 4°C 至少 1 小时。[1]

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环磷酸腺苷 (cAMP) 的定量分析[1]
使用先前描述的竞争性结合分析法 (Watts 和 Neve，1996) 评估 cAMP 的积累。简而言之，将细胞裂解液 (12 μl) 一式两份加入含有 [3H]cAMP（终浓度 1 nM）和 cAMP 结合蛋白（100–150 μg，溶于 500 μl 缓冲液）的 cAMP 结合缓冲液（100 mM Tris-HCl，pH 7.4，100 mM NaCl，5 mM EDTA）的反应管中。将反应管置于冰上，4°C 孵育 2–3 小时，然后使用 96 孔 Packard FilterMate 细胞收集器通过过滤（GF/C 滤板）收集细胞。将滤板干燥后，向每个孔中加入30 μl Packard Microscint-O闪烁液。使用Packard TopCount闪烁计数器测定每个孔的放射性。根据0.01至300 pmol cAMP的标准曲线估算每个样品中cAMP的浓度。

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5-HT1A受体拮抗作用通过功能性检测进行评估，例如[³⁵S]GTPγS结合或cAMP积累检测。用5-HT1A激动剂（例如8-OH-DPAT）处理表达人5-HT1A受体的细胞，并分别在有或无WAY 100635的情况下进行。测量该化合物阻断激动剂诱导的[³⁵S]GTPγS结合或抑制cAMP积累的能力。

动物/疾病模型：雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠（220-240 g）[2]
剂量：1 mg/kg
给药途径：皮下注射（药代动力学/PK研究）
实验结果：总戒断评分降低，不动时间增加，埋藏行为增加。

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[123I]6b和[123I]7b在大鼠体内的生物分布研究：一般程序[3]
动物实验采用体重约230 g的雄性Wistar大鼠。所采用的动物实验方案已获得荷兰国家动物护理委员会和内部伦理委员会的批准，符合荷兰动物实验法的相关规定。放射性标记化合物的溶液在实验前一天配制。大鼠用2%异氟烷麻醉后，经尾静脉注射200 μL放射性标记化合物。在不同时间间隔后，在麻醉状态下，通过颈椎脱臼处死大鼠，并从断头尸体上采集血液。取出目标组织，称重，并使用LKB Wallac 1282 CompuGamma CS测定其放射性。为了计算注射剂量，称取五份注射液，并计数其放射性。结果经衰变校正后，以每克组织注射剂量的百分比±标准差（% ID/g ± SD）表示。[3]
[123I]6b[3]
实验使用了两组大鼠，每组四只。第一组大鼠静脉注射200 μL（7 MBq，<20 ng）放射性标记化合物，并在注射后45分钟处死。在第二组中，大鼠在静脉注射[123I]6b（7 MBq）前5分钟，先静脉注射非标记化合物1（2 mg/kg）。注射后45分钟处死大鼠并进行解剖。[3]
[123I]7b[3]
本研究使用了三组大鼠，每组四只。每只大鼠静脉注射200 μL（7 MBq，<20 ng）放射性标记化合物。分别在注射后15、45和120分钟处死大鼠，并按上述方法进行处理。

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WAY 100635用于各种行为学和生理学研究中的动物实验。在电生理学研究中，该化合物用于阻断5-HT1A受体介导的神经元放电效应。在行为学研究中，WAY 100635用于研究5-HT1A受体在焦虑、抑郁和认知功能中的作用。典型的给药途径包括腹腔注射、皮下注射或脑室内注射。

WAY 100635 的分子量为 422.56，分子式为 C25H34N4O2。其 IUPAC 名称为 N-[2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]乙基]-N-吡啶-2-基环己烷甲酰胺。纯度通常 ≥99%。该化合物可溶于 DMSO。WAY 100635 是一种强效且选择性的 5-HT1A 受体拮抗剂和多巴胺 D4 受体激动剂。它是神经科学和精神药理学领域广泛应用的研究工具。

WAY 100635 的临床前毒性研究尚未得到广泛报道。该化合物已在多种剂量下广泛用于动物研究，未见明显不良反应报道。作为一种 5-HT1A 受体拮抗剂和 D4 受体激动剂，其机制性毒性可能包括对情绪、认知和运动功能的影响。处理该化合物时应遵循标准安全预防措施。

[1]. WAY-100635 is a potent dopamine D4 receptor agonist. Psychopharmacology (Berl). 2006 Oct;188(2):244-51.

[2]. Serotonin involvement in Rhodiola rosea attenuation of nicotine withdrawal signs in rats. Phytomedicine. 2012 Sep 15;19(12):1117-24.

[3]. Design, synthesis, radiolabeling, and in vitro and in vivo evaluation of bridgehead iodinatedanalogues of N-{2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]ethyl}-N-(pyridin-2-yl)cyclohexanecarboxamide (WAY-100635) as potential SPECT ligands for the 5-HT1A receptor. J Med Chem. 2011 May 26;54(10):3480-91.

N-[2-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]乙基]-N-(2-吡啶基)环己烷甲酰胺属于哌嗪类化合物。

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背景与目的：WAY-100635 是一种典型的 5-HT1A 受体拮抗剂，已被广泛用作研究 5-HT1A 受体分布和功能的药理学探针。我们的研究结果表明，WAY-100635 具有强大的诱导活性，且该活性与其对 5-HT1A 受体的亲和力无关。在本研究中，我们评估了该化合物对两种 D2 样受体亚型的体外药理学特性。方法：在稳定表达多巴胺 D2L 或 D4.4 受体的 HEK 293 细胞中评估了 WAY-100635 的功能特性和结合亲和力。结果：美国国立精神卫生研究所（NIMH）精神活性药物筛选项目的初步筛选结果显示，WAY-100635 对 D2L、D3 和 D4.2 受体的结合亲和力分别为 940 nM、370 nM 和 16 nM。随后的饱和分析表明，[3H]WAY-100635 与 D4.2 受体的解离常数 (Kd) 为 2.4 nM，仅比其与 5-HT1A 受体的解离常数高十倍。WAY-100635 及其主要代谢物 WAY-100634 均为 HEK-D4.4 细胞的强效激动剂（EC50 值分别为 9.7 ± 2.2 nM 和 0.65 ± 0.2 nM）。 WAY-100635 表现出完全激动作用，而 WAY-100634 表现出近乎完全激动作用。在 HEK-D2L 细胞中，WAY-100635 对 300 nM 喹吡咯具有较弱的拮抗作用。后续的放射性配体结合实验证实，WAY-100635 对 D4.4 受体具有高亲和力，但与 D2L 受体的结合较弱（分别为 3.3±0.6 nM 和 420±11 nM）。结论：本研究表明，WAY-100635 并非如先前报道的“选择性”5-HT1A 受体拮抗剂。因此，先前研究中将 WAY-100635 视为选择性 5-HT1A 受体拮抗剂的结论可能需要重新评估。 [1] 红景天在传统医学中已有数百年的应用历史，用于刺激神经系统、增强身心功能和治疗疲劳。已知服用红景天提取物具有抗抑郁活性，但其作用机制尚不明确。动物模型和人体研究的证据表明，尼古丁可以缓解抑郁症状，而尼古丁戒断则会诱发类似抑郁的症状。我们研究了红景天对尼古丁戒断症状的影响。通过皮下注射尼古丁（2 mg/kg，每日四次），连续14天，在动物中诱导尼古丁依赖。另一组动物在接受14天尼古丁治疗后，接受红景天提取物治疗，并同时给予选择性5-HT受体拮抗剂WAY 100635（1 mg/kg）。尼古丁戒断后，评估了行为参数（运动活性、戒断症状、弹珠-泡泡试验）、间脑5-羟色胺代谢和5-羟色胺受体1A表达。结果显示，红景天治疗组的5-羟色胺水平和5-羟色胺受体1A表达均显著升高，表明5-羟色胺参与了红景天缓解尼古丁戒断症状的有益作用。[2]

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本文描述了化合物1（WAY-100635）相关5-HT(1A)受体配体的设计、合成和药理学性质。化合物 1 及其 O-去甲基化类似物 3 中的环己基部分被一个带有碘化桥头基团的桥环稠合环所取代：金刚烷基、立方烷基、双环[2.2.2]辛基或双环[2.2.1]庚基。所有类似物在体外均表现出对 5-HT(1A) 受体的（亚）纳摩尔级亲和力。化合物 6b 和 7b 对该受体的选择性高于其他相关受体，并且易于被放射性碘-123 碘化。在人肝细胞中，[(123)I]6b 酰胺表现出较低的水解倾向和稳定的碳-碘键。[(123)I]6b 和 [(123)I]7b 在大鼠体内的生物分布表明，碳-碘键在体内也稳定。然而，这两种放射性配体的脑摄取率和特异性均显著低于母体分子 1。综上所述，所设计的示踪剂不适用于 SPECT 成像。[3] WAY 100635（CAS 编号：162760-96-5）是一种强效且选择性的 5-HT1A 受体拮抗剂，IC50 为 0.91 nM，Ki 为 0.39 nM。它对多巴胺 D4 受体也表现出高亲和力和效力（Ki = 3.3 nM）。WAY 100635 可消除条件反射过程中海马 CA1 锥体神经元放电频率的降低。它是神经科学和精神药理学中研究 5-HT1A 受体功能的常用研究工具。该化合物仅供研究使用。

C25H34N4O2

422.573

422.268

C, 71.06; H, 8.11; N, 13.26; O, 7.57

162760-96-5

WAY-100635 maleate;1092679-51-0

5684

Off-white to light yellow ointment

3.828

48.91

0

5

7

31

546

0

O=C(N(C1=NC=CC=C1)CCN2CCN(CC2)C3=CC=CC=C3OC)C4CCCCC4

SBPRIAGPYFYCRT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H34N4O2/c1-31-23-12-6-5-11-22(23)28-18-15-27(16-19-28)17-20-29(24-13-7-8-14-26-24)25(30)21-9-3-2-4-10-21/h5-8,11-14,21H,2-4,9-10,15-20H2,1H3

N-[2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]ethyl]-N-pyridin-2-ylcyclohexanecarboxamide

WAY 100635; WAY-100635; 162760-96-5; Way 100635; cyclohexanecarboxamide, n-[2-[4-(2-methoxyphenyl)-1-piperazinyl]ethyl]-n-2-pyridinyl-; CHEMBL31354; N-(2-(4-(2-Methoxyphenyl)piperazin-1-yl)ethyl)-N-(pyridin-2-yl)cyclohexanecarboxamide; N-[2-[4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]ethyl]-N-pyridin-2-ylcyclohexanecarboxamide; 71IH826FEG; WAY-100635

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~66.67 mg/mL (~157.78 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。