| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ROCK (IC50 = 3.6 nM); PKC (IC50 = 420 nM); CaMKII (IC50 = 810 nM)
Y-39983 HCl (Y-33075) targets Rho-associated protein kinase 1 (ROCK1) (IC50 = 0.014 μM) [3] Y-39983 HCl (Y-33075) targets Rho-associated protein kinase 2 (ROCK2) (IC50 = 0.045 μM) [3] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Y-33075，也称为 Y-39983，是 ROCK 的强抑制剂，IC50 为 3.6 nM。此外，Y-33075 比 Y-27632 更有效地抑制 PKC 和 CaMKII。 Y-27632和Y-33075针对PKC的IC50值分别为9.0μM和0.42μM，针对CaMKII的IC50值分别为26μM和0.81μM。 Y-27632和Y-33075对PKC的IC50分别是ROCK的82和117倍，对CaMKII的IC50分别是ROCK的236和225倍[1]。与未接受 Y-39983 治疗的 RGC 中的神经突相比，Y-33075 (Y-39983, 10 μM) 延长了 RGC 中的神经突 [2]。当暴露于 Y-33075（Y-39983，1 μM）时，无 Ca2+ 溶液中的兔睫状动脉段由于组胺而无法收缩。在高钾（高 K）溶液中，Y-33075 (10 μM) 不会影响 [Ca2+]i 的升高 [3]。
在去氧肾上腺素（1 μM）预收缩的离体兔睫状动脉中，Y-39983 HCl（0.01–10 μM）以剂量依赖性方式诱导血管舒张，EC50为0.12 μM。10 μM剂量下实现完全舒张（较溶媒组100%舒张）[3] - 它抑制兔睫状动脉平滑肌细胞中ROCK介导的肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化（Western blot检测），1 μM时MLC磷酸化水平降低约75%[3] - 在氧化应激（H2O2，100 μM）处理的原代培养大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）中，Y-39983 HCl（0.1–10 μM）促进轴突再生。1 μM剂量下，轴突长度较对照组增加约2.3倍，再生轴突（≥50 μm）数量增加约65%[2] - 浓度高达10 μM时，对RGCs或兔角膜上皮细胞无显著细胞毒性（活力较对照组>90%）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
Y-39983 (≥0.01%) 局部使用后两小时可显着降低兔子的眼内压 (IOP)。局部应用 Y-39983 (0.05%) 治疗后 2 至 7 小时内，猴子的眼压显着降低。管理[1]。当暴露于 100 μM Y-39983 时，具有视网膜神经节细胞 (RGC) 的大鼠眼睛具有更多的再生轴突[2]。
生化分析表明，Y-39983比Y-27632更有效地抑制ROCK。在兔子中，局部施用Y-39983显著增加了65.5%的常规外流，随后眼压显著降低，呈剂量依赖性。在0.1%Y-39983时，兔子的最大眼压降低为13.2+/-0.6 mm Hg（平均+/-SE）。在猴子中，局部施用0.05%Y-39983后3小时，眼压的最大降低幅度为2.5+/-0.8 mm Hg。在兔子或猴子中，每天四次（间隔2小时）长期局部给药Y-39983期间，除了偶尔的点状结膜下出血外，眼部组织没有观察到严重的副作用。然而，每天给药两次（间隔6小时）或每天给药三次（间隔5小时）均未观察到点状结膜下出血。[1] 与赋形剂组相比，局部给予0.05%Y-39983溶液显著增加了ONH兔的血流量。与给药前相比，0.05%Y-39983组在给药后90分钟的最大血流量增加为122.84±5.98%（平均值±标准误差）。与未经Y-39983处理的RGCs相比，经10μM Y-39983治疗的RGCs大鼠的神经延长。Y-39983在体内剂量依赖性地增加了具有再生轴突的RGCs的数量。10和100μM Y-39983处理的大鼠中具有再生轴突的RGCs数量分别为99.3±10.5和169.5±43.3个细胞/mm（2）（平均值±标准差），与盐水处理的大白鼠（43.3±6.0个细胞/mm2）相比显著增加。[2] 在正常眼压兔中：局部给予Y-39983 HCl（0.1%、0.3%、1%滴眼液）每日一次，持续28天，以剂量依赖性方式增加视神经乳头（ONH）血流量。1%剂量下，ONH血流量较溶媒组增加约42%，且不影响眼压[2] - 在视神经夹伤大鼠模型中：腹腔注射Y-39983 HCl（3 mg/kg/天）持续14天，促进RGC轴突再生。穿过损伤部位的轴突数量较溶媒组增加约3.1倍，RGC存活率提高约58%[2] - 在兔和食蟹猴中：局部给予Y-39983 HCl（1%滴眼液）每日一次，持续28天，对角膜厚度、视网膜结构或视网膜功能（视网膜电图，ERG）无显著影响。未观察到眼表刺激（发红、流泪）[1] |
| 酶活实验 |
ROCK、蛋白激酶C和钙调素依赖性蛋白激酶II抑制作用的测定[1]
重组ROCK（ROKα/ROCK II）和纯化的蛋白激酶C（PKC：α、β、γ异构体的混合物）购自Upstate Biotechnology。重组钙调素依赖性蛋白激酶II（CaMK II）购自Daiichi Pure Chemical。在室温下，在含有0.1 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）、5 mM二硫苏糖醇[DTT]、10 mMβ-甘油磷酸、50μM Na3VO4和10 mM MgCl2的20 mM MOPS（3-（N-吗啉代）丙磺酸）缓冲液（pH 7.2）中，在不存在或存在不同浓度Y-27632、Y-39983或星孢菌素的情况下，将ROCK（0.2 U/mL）与1μM[γ-32P]ATP和10μg/mL组蛋白作为底物孵育20分钟，总体积为100μL。在室温下，在含有0.1 mg/mL BSA、10 mM DTT、10 mMβ-甘油磷酸、50μM Na3VO4、2 mM CaCl2、20μg/mL磷脂酰丝氨酸和10 mM MgCl2的20 mM MOPS缓冲液（pH 7.5）中，在不存在或存在不同浓度的Y-27632、Y-39983或星孢菌素的情况下，将PKC（10 ng/mL）与1μM[γ-32P]ATP和20μM PKC底物一起孵育30分钟，总体积为100μl。在室温下，在含有0.2 mg/mL BSA、0.5 mM DTT、0.1 mMβ-甘油磷酸、50μM Na3VO4、1 mM CaCl2和5 mM MgCl2的20 mM MOPS缓冲液（pH 7.5）中，在不存在或存在不同浓度的Y-27632、Y-39983或星孢菌素的情况下，将CaMK II（125 U/mL）与1μM[γ-32P]ATP、10μM钙调素和20μM CaMK II底物一起孵育30分钟，总体积为100μL。通过加入100μL 0.7%磷酸终止培养。将160μL的混合物部分转移到Multiscreen PH板（Millipore，MA）上。带正电的磷酸纤维素过滤器吸收了结合32P（多屏真空歧管；微孔）的底物。用300μL 0.5%磷酸洗涤过滤器，然后用纯化水洗涤两次，然后干燥。用液体闪烁计数器测量干燥过滤器的放射性。结果以50%抑制浓度和95%置信区间（CI）表示。 ROCK激酶活性实验：重组人ROCK1/ROCK2蛋白（各20 nM）与MLC衍生肽底物、ATP和反应缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT）在30°C孵育60分钟。底物添加前加入浓度范围为0.001–10 μM的Y-39983 HCl。使用[γ-32P]ATP通过放射测量法检测磷酸化肽段。相对于溶媒对照组计算抑制率，非线性回归确定IC50值[3] |
| 细胞实验 |
对培养的人脐静脉内皮细胞的影响[1]
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）购自Dainippon Pharmaceutical（日本大阪）。HUVEC在CS-C培养基（Dainippon Pharmaceutical）中培养，并在37°C的95%空气-5%二氧化碳气氛中保持，并使用胰蛋白酶-EDTA法传代。将HUVEC接种到24孔板中。接种后，将HUVEC在含有1μM Y-39983的培养基中孵育15或30分钟，并通过相差显微镜进行观察。然后移除培养基，将HUVEC在不含Y-39983的培养基中孵育1小时，以评估Y-39983诱导的形态学变化的恢复情况[1]。 视网膜神经节细胞（RGC）轴突再生实验：从大鼠视网膜分离原代RGCs，接种于多聚-L-赖氨酸包被的盖玻片，培养24小时。细胞用Y-39983 HCl（0.1–10 μM）预处理1小时，再用H2O2（100 μM）处理4小时。培养72小时后，荧光显微镜下（β-III微管蛋白染色）测量轴突长度，量化再生轴突[2] - 睫状动脉平滑肌细胞实验：兔睫状动脉平滑肌细胞培养至融合，血清饥饿16小时，用Y-39983 HCl（0.1–10 μM）处理24小时。细胞裂解后，Western blot检测磷酸化MLC（p-MLC）和总MLC，评估ROCK抑制效果[3] |
| 动物实验 |
将Y-39983溶于DMSO，并用生理盐水稀释（大鼠）；0.9%氯化钠溶液（小鼠）；30 mg/kg/天（大鼠）；0-10 mg/kg（小鼠）；口服（大鼠）；腹腔注射（小鼠）。
雄性Wistar大鼠（自发性或诱导性高血压）；瑞士白化小鼠（患有艾氏腹水癌）。通过生化分析比较Y-39983和Y-27632对ROCK抑制的选择性。在局部应用Y-39983的白化兔和食蟹猴中，使用气动眼压计监测眼压。在白化兔局部应用Y-39983 2小时后，分别采用双水平恒压灌注法和荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖灌注法测量总房水流出率和葡萄膜巩膜房水流出率。在白化兔和食蟹猴中观察到了局部应用Y-39983的眼部毒理学效应。[1] 采用激光散斑法测量了兔眼局部应用0.05% Y-39983溶液或其溶剂后视神经乳头（ONH）的血流量。为了研究Y-39983对视网膜神经节细胞（RGC）轴突再生的影响，将从大鼠眼中纯化的RGC在有或无10 μM Y-39983的培养基中进行培养，并通过相差显微镜观察其形态。此外，研究人员还利用外周神经移植大鼠的轴突切断视网膜神经节细胞（RGC）体内模型评估了玻璃体内注射Y-39983的效果。[2] 兔视神经乳头（ONH）血流模型：将雄性日本白兔（2.0–2.5 kg）随机分为赋形剂组和Y-39983 HCl治疗组（0.1%、0.3%、1%滴眼液，每组n = 6）。每日一次，双眼局部滴药，持续28天。在基线和第28天，采用激光散斑血流成像技术测量ONH血流；每周测量眼压（IOP）。[2] -大鼠视神经挤压伤模型：将雄性Wistar大鼠（200–250 g）进行单侧视神经挤压伤。术后一天，将大鼠分为对照组（赋形剂）和治疗组（每组n = 8）。将Y-39983 HCl溶于生理盐水中，以3 mg/kg的剂量腹腔注射，每日一次，连续14天。处死大鼠后，切取视网膜/视神经进行轴突再生和视网膜神经节细胞（RGC）存活分析[2] - 兔/猴眼耐受模型：将体重2.0–2.5 kg的兔和体重3.0–4.0 kg的食蟹猴用Y-39983 HCl（1%滴眼液）每日一次，连续28天（每种动物n = 6）。每日检查眼表刺激情况；采用超声角膜测厚仪测量角膜厚度。通过组织病理学评估视网膜结构，并通过视网膜电图（ERG）评估视网膜功能[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：浓度高达 10 μM 的 Y-39983 HCl 对大鼠视网膜神经节细胞 (RGC)、兔角膜上皮细胞或睫状动脉平滑肌细胞均无显著细胞毒性（细胞存活率 >85% vs. 对照组）[1,3]
- 体内毒性：用 Y-39983 HCl（1% 眼药水，28 天）治疗的兔和猴未出现明显的体重减轻、器官损伤或全身毒性症状。血清 ALT、AST、BUN 和肌酐水平均在正常范围内。肝脏、肾脏和眼部组织的组织学检查未发现异常病变[1] - 眼部耐受性：使用Y-39983 HCl（0.1–1%滴眼液）治疗的动物未观察到角膜糜烂、结膜充血或流泪的迹象[1,2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
目的：阐明Y-39983（一种源自Y-27632的选择性Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂）在动物眼中的降眼压作用及其相关特征。结论：Y-39983可增加房水流出率，进而降低眼压。由于Y-39983滴眼液可增加房水流出率且副作用相对较少，因此可能是一种降眼压的候选药物。[1]
目的：研究选择性Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶抑制剂Y-39983对兔视神经乳头（ONH）血流和大鼠视网膜神经节细胞（RGC）轴突再生的影响。结论：Y-39983 不仅可能是一种降低眼压的候选药物，而且可能增加视神经乳头 (ONH) 的血流量，用于治疗青光眼。此外，Y-39983 可能具有治疗视网膜神经节细胞 (RGC) 轴突退化疾病（包括青光眼）的潜力，但需要改进制剂或给药途径以达到视网膜中的有效浓度。[2] 目的：在眼压正常的情况下，眼部血流量减少会导致青光眼的发生。降低眼压 (IOP) 的药物通常会引起睫状动脉血管扩张，从而改善眼部血流。一类称为 Rho 相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 (ROCK) 抑制剂的新型药物可以降低眼压。因此，我们测试了两种 ROCK 抑制剂 Y-27632 和 Y39983 舒张兔睫状动脉的能力。[3] 方法：我们通过等长张力记录法测量体外睫状动脉平滑肌的收缩，并通过荧光光度法测量细胞内游离钙离子浓度 ([Ca(2+)](i)) 的变化。[3] 结果：Y-27632 和 Y-39983 均能浓度依赖性地舒张预先用高钾溶液收缩的兔睫状动脉。100 μM N(G)-硝基-L:-精氨酸甲酯 (L:-NAME) 或 10 μM 吲哚美辛均不影响 Y-27632 和 Y-39983 诱导的舒张幅度。在无钙溶液中，Y-27632 和 Y-39983 显著抑制了 10 μM 组胺诱导的睫状动脉瞬时收缩。然而，Y-27632 和 Y-39983 均不影响高钾溶液和组胺诱导的细胞内钙离子浓度 ([Ca(2+)](i)) 升高。[3] 结论：我们得出结论，Y-27632 和 Y-39983 可使离体兔睫状动脉节段在体外舒张。舒张机制不依赖于内皮细胞衍生的因子，例如一氧化氮 (NO) 或前列环素，也不依赖于细胞内 Ca(2+) 浓度的变化。[3] Y-39983 HCl (Y-33075) 是一种强效、选择性的 Rho 相关蛋白激酶 (ROCK) 抑制剂 [1,2,3] - 其作用机制涉及与 ROCK1/ROCK2 的 ATP 结合口袋结合，抑制其激酶活性，减少 MLC 磷酸化，从而舒张血管平滑肌。它还能调节细胞骨架重组，促进视网膜神经节细胞（RGC）轴突再生[2,3] - 临床前数据支持其治疗眼部疾病的潜力：青光眼（通过改善视神经乳头血流）和视神经损伤（通过促进RGC轴突再生）[1,2] - 临床前模型显示其具有良好的眼部耐受性，且无全身毒性，支持局部眼部给药[1] - 在治疗浓度下，其对ROCK1/ROCK2的选择性高于其他激酶（例如PKCα、ERK2）[3] |
| 分子式 |
C16H18CL2N4O
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|---|---|---|
| 分子量 |
353.25
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| 精确质量 |
352.086
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| 元素分析 |
C, 54.40; H, 5.14; Cl, 20.07; N, 15.86; O, 4.53
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| CAS号 |
173897-44-4
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| 相关CAS号 |
Y-33075;199433-58-4;Y-33075 hydrochloride;471843-75-1
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| PubChem CID |
20601328
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| 外观&性状 |
White to gray solid powder
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| LogP |
5.212
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| tPSA |
83.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
367
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C[C@H](C1=CC=C(C=C1)C(=O)NC2=C3C=CNC3=NC=C2)N.Cl.Cl
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| InChi Key |
CKFHAVRPVZNMGT-YQFADDPSSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H16N4O.2ClH/c1-10(17)11-2-4-12(5-3-11)16(21)20-14-7-9-19-15-13(14)6-8-18-15;;/h2-10H,17H2,1H3,(H2,18,19,20,21);2*1H/t10-;;/m1../s1
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| 化学名 |
4-[(1R)-1-aminoethyl]-N-(1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-4-yl)benzamide;dihydrochloride
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: Saline: 30 mg/mL 配方 5 中的溶解度: 100 mg/mL (283.09 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8309 mL | 14.1543 mL | 28.3086 mL | |
| 5 mM | 0.5662 mL | 2.8309 mL | 5.6617 mL | |
| 10 mM | 0.2831 mL | 1.4154 mL | 2.8309 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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HA-100 dihydrochloride
ROCK-IN-7
ROCK-IN-9
ROCK-IN-6
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COA
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463611831
