EGFR (IC50 = 3 nM); HCV; EMCV

体外活性：AG-1478（也称为 Tyrphostin AG-1478）是一种有效的选择性 EGFR（表皮生长因子受体）抑制剂，在无细胞测定中 IC50 为 3 nM。它可逆地抑制大鼠脑 Kv1.5 钾通道，IC50 为 9.8 µM，与蛋白酪氨酸激酶 (PTK) 活性无关。 AG-1478 还抑制平滑肌瘤和子宫肌层细胞培养物的生长，IC50 值分别为 5.6 和 5.7 µM。此前的研究表明，EGFR拮抗作用可能有效治疗多种疾病，如癌症、血管紧张素II诱导的心脏肥大和糖尿病心肌病。因此，AG-1478 有潜力用作这些疾病的治疗药物。激酶测定：AG-1478 对 ErbB2 和 PDGFR 具有高选择性，IC50 > 100 μM。与表达内源wt EGFR或过表达外源wt EGFR的细胞相比，AG-1478优先抑制表达截短EGFR的U87MG细胞，IC50为8.7μM，IC50分别为34.6μM和48.4μM，并抑制DNA合成，IC50为4.6μM，分别为 19.67 μM 和 35.2 μM。与内源性或过表达的外源性 wt EGFR 相比，AG-1478 还优先抑制 ΔEGFR 的酪氨酸激酶活性和自身磷酸化。 AG-1478 (0.25 μM) 消除由 Ang II（一种 Ca2+ 离子载体）以及 EGF 诱导的 MAPK 激活，但不能消除 VSMC 中佛波醇酯或血小板衍生生长因子-BB 诱导的 MAPK 激活。 AG-1478 抑制 EGF 诱导的 BaF/ERX 和 LIM1215 细胞有丝分裂，IC50 分别为 0.07 μM 和 0.2 μM。 AG1478 能够抑制 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白（例如 ABCB1 和 ABCG2）的功能，其中对 ABCG2 的影响更为明显。细胞测定：将细胞在 96 孔板中暴露于不同浓度的 AG-1478 中 72 小时。使用 Alamar Blue 测定法检查 AG-1478 对细胞生长的影响。将 20 μL 等份的 Alamar Blue 添加到每个孔中，并使用 Spectromax 扫描微孔板读数仪测定其吸光度。 AG-1478 的效果以生长抑制百分比表示，使用未处理的细胞作为对照（0% 抑制）。使用 [3H] 胸苷掺入测定法测定细胞 DNA 合成。

AG-1478的施用可阻断肿瘤部位EGFR的磷酸化，并抑制过表达WT EGFR的A431异种移植物和表达de2-7 EGFR的神经胶质瘤异种移植物的生长。即使是亚治疗剂量的 AG-1478 也能显着增强细胞毒性药物的功效，AG-1478 和替莫唑胺的组合对人神经胶质瘤异种移植物表现出协同抗肿瘤活性。 AG-1478 和抗 EGFR 抗体 (mAb 806) 的组合对过度表达 EGFR 的肿瘤异种移植物表现出相加的、在某些情况下协同的抗肿瘤活性。 AG-1478（0.4 mg）与单剂量 25 μCi 90Y-CHX-A-DTPA-hu3S193 的组合与单独使用任一药物相比，可显着增强疗效。

AG-1478 的 IC50 > 100 μM，对 ErbB2 和 PDGFR 具有高度选择性。在 U87MG 细胞中，AG-1478 优先抑制截短 EGFR 表达 (IC50 = 8.7 μM)，而不是内源 wt EGFR 表达（IC50 = 34.6 μM 和 48.4 μM，分别），并抑制 DNA 合成（IC50 = 4.6 μM、19.67 μM 和 35.2）分别为μM）。此外，与内源性或过表达的外源性 wt EGFR 相比，AG-1478 优先抑制 ΔEGFR 的酪氨酸激酶活性和自身磷酸化。在 VSMC 中，AG-1478 (0.25 μM) 可消除由 Ang II（一种 Ca2+ 离子载体）和 EGF 引起的 MAPK 激活，但不能消除由佛波醇酯或血小板衍生生长因子-BB 引起的 MAPK 激活。 AG-1478 的 IC50 值分别为 0.07 μM 和 0.2 μM，抑制 EGF 诱导的 BaF/ERX 和 LIM1215 细胞有丝分裂。 AG1478 可抑制 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白 ABCB1 和 ABCG2，其中对 ABCG2 的影响更大。

A549 (CCL-185) 和 DU145 (HTB-81) 细胞以 4×10³ 细胞/孔的密度接种在 DMEM（A549 细胞）或 MEM（DU145 细胞）中的 96-孔板。 24 小时孵育期后，用白蛋白 (0.5 mg/mL)、亚硒酸钠 (2 ng/mL) 和转铁蛋白 (5 mg/mL) 增强的无血清 DMEM/F12 (1:1) 替代培养基（DMEM/F12+）。孵育期第 0 天后，用含有浓度分别为 1-20 μM 和 0.1-8 μM 的酪氨酸激酶抑制剂（AG494、AG-1478）的无血清 DMEM/F12+ 更换培养基。在接下来的 24 小时内，孵化保持在 37°C 的潮湿环境中。使用 MTT 测定和改良的结晶紫染色法 (CV) 评估酪氨酸磷酸酶对靶细胞增殖的影响。 Tecan 多重扫描平板记录仪用于测量吸光度[1]。

Mice: Four weight-matched groups of 28 C57BL/6 or ApoE^-/- mice are created at random. As a normal control group (ApoE-LF), seven mice are fed a standard animal low-fat diet consisting of 10 kcal% fat, 20 kcal% protein, and 70 kcal% carbohydrates. The remaining twenty-one mice are fed a high-fat diet consisting of 60 kcal% fat, 20 kcal% protein, and 20 kcal% carbohydrates for a period of 16 weeks. AG-1478 or 542 are given orally via gavage starting in the 9^th week, with a daily dose of 10 mg/kg for the following eight weeks. Only the vehicle (1% CMC-Na solution) is gavaged on mice in the Control and HFD groups. To ascertain the pathologic cardiac hypertrophy, doppler analysis is carried out the day prior to the sacrifice of ApoE^-/- mice. Rats: In this study, five groups of male Wistar rats, weighing approximately 300g, were utilized. Animals in Group 1 that are not diabetic (Control, C) The second group received a single intraperitoneal (i.p.) injection of C+PF (10 mg/kg). Groups 4 and 3 are C+AG-1478 (1 mg/kg i.p.) and C+SF (10 mg/kg i.p.). Group 5: Rats given a single intraperitoneal injection of streptozotocin (55 mg/kg body weight) for four weeks to induce diabetes (D); Group 6: D+PF (10 mg/kg i.p.) Groups 7 and 8 consist of D+SF (10 mg/kg i.p.) and D+AG-1478 (1 mg/kg i.p.). The treatments for dendrimer and AG-1478 are given as a single dose 24 hours before sacrifice. Before the animals are killed, measurements of the rats' basal glucose levels and body weight are taken both before and after the treatments. Blood glucose levels are measured using an automated blood glucose analyzer, and as in earlier research, rats with blood glucose levels greater than 250 mg/dL (roughly 14 mM) are classified as diabetic.

[1]. The effect of tyrphostins AG494 and AG1478 on the autocrine growth regulation of A549 and DU145 cells. Folia Histochem Cytobiol. 2012 Jul 5;50(2):186-95.

[2]. EGFR Inhibition Blocks Palmitic Acid-induced inflammation in cardiomyocytes and Prevents Hyperlipidemia-induced Cardiac Injury in Mice. Sci Rep. 2016 Apr 18;6:24580.

[3]. Cationic Polyamidoamine Dendrimers as Modulators of EGFR Signaling In Vitro and In Vivo. PLoS One. 2015 Jul 13;10(7):e0132215.

[4]. Tyrphostin AG1478 Inhibits Encephalomyocarditis Virus and Hepatitis C Virus by Targeting Phosphatidylinositol 4-Kinase IIIα. Antimicrob Agents Chemother. 2016 Sep 23;60(10):6402-6.

C16H14CLN3O2

315.75

315.08

C, 60.86; H, 4.47; Cl, 11.23; N, 13.31; O, 10.13

153436-53-4

AG-1478 hydrochloride;170449-18-0

Solid powder

COC1=C(C=C2C(=C1)C(=NC=N2)NC3=CC(=CC=C3)Cl)OC

GFNNBHLJANVSQV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H14ClN3O2/c1-21-14-7-12-13(8-15(14)22-2)18-9-19-16(12)20-11-5-3-4-10(17)6-11/h3-9H,1-2H3,(H,18,19,20)

N-(3-chlorophenyl)-6,7-dimethoxyquinazolin-4-amine

Tyrphostin AG-1478; AG1478; Tyrphostin AG 1478; NSC 693255; NSC-693255; NSC693255

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 15% Captisol: 30mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (15.84 mM) in 1% CMC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。