| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CDK9/Cyclin T (IC50 = 10 nM); CDK5/p35 (IC50 = 13 nM); cdk2/cyclin A (IC50 = 47 nM); Cdk4/cyclin D1 (IC50 = 100 nM); cdk6/cyclin D3 (IC50 = 170 nM); Cdk1/cyclin B (IC50 = 210 nM); CDK7/Cyclin H/MAT1 (IC50 = 2400 nM); GSK3β (IC50 = 89 nM)
AT-7519 targets multiple cyclin-dependent kinases (CDKs), specifically CDK1, CDK2, CDK4, CDK5, CDK6, and CDK9. The IC50 values for these targets are 210 nM for CDK1/cyclin B, 47 nM for CDK2/cyclin A, 100 nM for CDK4/cyclin D1, 13 nM for CDK5/p35, 170 nM for CDK6/cyclin D3, and <10 nM for CDK9/cyclin T. It is an ATP-competitive inhibitor and has also been found to be a human RORγt agonist. AT-7519 shows minimal activity against non-CDK kinases, with the exception of GSK3β. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在MM细胞中，AT7519盐酸盐（0–4 μM）可引起剂量依赖性细胞毒性，IC50范围为0.5–2 μM。这种细胞毒性与GSK-3β激活相关，且不依赖于拐点阻断。AT7519盐酸盐（0.5 μM）可诱导MM细胞发生时间依赖性增殖。此外，在MM.1S细胞中，AT7519盐酸盐（0.5 μM）可部分抑制RNA生成，并阻止RNA聚合酶II CTD的磷酸化[1]。AT7519盐酸盐（250 nM）可抑制人肿瘤细胞系的细胞周期进程。同样，人肿瘤细胞系在暴露于AT7519盐酸盐后也会发生肝癌[2]。AT7519盐酸盐（100–700 nM）可在空白细胞系中诱导细胞效应。在人类肿瘤细胞系中，AT7519 盐酸盐也能抑制转录。此外，AT7519 盐酸盐还能抑制 RNA 聚合酶 II 并降低抗氧化蛋白水平 [3]。体外实验表明，AT-7519 对多种人类肿瘤细胞系具有强效的抗增殖活性，IC50 值范围为 40 至 940 nM。它主要通过增加 G0/G1 期和 G2/M 期细胞的比例来诱导细胞周期阻滞，随后诱导细胞凋亡。在 MM.1S 细胞中，这种效应具有时间和剂量依赖性，表现为亚 G1 期细胞比例增加、Annexin V/PI 双染增强以及 caspase-9、-3 和 -8 的裂解。其作用机制与抑制实体瘤细胞系中的 CDK1 和 CDK2 一致。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在人多发性骨髓瘤（MM）异种移植模型中，盐酸AT7519可抑制肿瘤生长[1]。早期HCT116肿瘤异种移植模型可因盐酸AT7519（4.6和9.1 mg/kg/剂量）而生长受阻。在携带HCT116肿瘤的BALB/c裸鼠中，盐酸AT7519（10 mg/kg，腹腔注射）同样可抑制靶向CDK[2]。
在体内，AT-7519可抑制人肿瘤异种移植模型的肿瘤生长。在HCT116和HT29结肠癌异种移植模型中，每日两次给药AT-7519后观察到肿瘤消退。该化合物可导致人肿瘤细胞周期阻滞，进而诱导细胞凋亡，从而抑制肿瘤生长。这些体内研究结果表明该化合物具有作为抗癌药物的潜力，支持其进入临床试验，用于治疗多种恶性肿瘤。 |
| 酶活实验 |
采用放射性滤膜结合法进行激酶活性测定，检测 CDK1、CDK2 和 GSK3-β。CDK4 和 CDK6 采用 ELISA 法测定，CDK5 采用 DELFIA 法测定。将相应的 CDK 和 0.12 μg/mL 组蛋白 H1 分别在以下缓冲液中孵育 2 小时或 4 小时：20 mM MOPS（pH 7.2）、25 mM β-甘油磷酸钠、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT、0.1 mg/mL BSA、45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 以及不同浓度的 AT7519。为了检测 GSK3-β，加入相应的酶和 5 μM 糖原合成酶肽 2，并在含有 10 mM MOPS（pH 7.0）、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油、0.2 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.01% β-巯基乙醇和 15 μM ATP (2.31 Ci/mmol) 的反应体系中孵育 3 小时。反应结束后，加入过量的磷酸终止反应，然后使用 Millipore MAPH 滤板过滤反应液。之后，清洗滤板，加入闪烁液，并使用 Packard TopCount 闪烁计数器测定放射性。将 CDK5、CDK5/p35、1 μM 生物素标记的组蛋白 H1 肽（Biotin-PKTPKKAKKL）、pH 7.5、25 mM Tris-HCl、0.025% Brij-35、0.1 mg/mL BSA、1 mM DTT、15 μM ATP 和不同浓度的 AT7519 混合，孵育 30 分钟。使用 EDTA 终止反应，并通过 λex=335 nm、λem=620 nm 的时间分辨荧光检测将混合物转移至 Neutravidin 包被的微孔板，并使用兔抗磷酸化 CDK1 底物多克隆抗体和 DELFIA 铕标记的抗兔 IgG 二抗定量磷酸化肽。 CDK4 和 CDK6 活性检测中，微孔板包被 GST-pRb769-921，并用 Superblock 封闭。为启动反应，向 CDK4 或 CDK6 中加入 ATP。孵育条件包括：15 mM MgCl2、50 mM HEPES（pH 7.4）、1 mM DTT、1 mM EGTA（pH 8.0）、0.02% Triton X-100、2.5% DMSO 以及不同浓度的 AT7519。30 分钟后，加入 0.5 M EDTA（pH 8.0）终止反应。之后，清洗微孔板，并依次与二抗（碱性磷酸酶标记的抗兔抗体）孵育 1 小时，再与稀释于 Superblock 中的一抗（抗 p-Rb Serine 780）孵育 1 小时。使用Attophos系统显色后，在Spectramax Gemini酶标仪上测量荧光强度，激发波长为450 nm，发射波长为580 nm。使用GraphPad Prism软件，根据每种情况下的重复曲线计算IC50值。
AT-7519的体外酶活性测定通常测量其抑制重组CDK/细胞周期蛋白复合物激酶活性的能力。这些无细胞测定使用纯化的酶和肽底物，并在ATP存在下进行。化合物的抑制效力（IC50）通过测量激酶活性的降低来确定，通常使用放射性或荧光检测方法。这些测定可以直接评估化合物对特定CDK靶点的效力，而不会受到细胞摄取或代谢的干扰。 |
| 细胞实验 |
采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四溴化钠 (MTT) 染料吸光度来测定AT7519对MM细胞系、原代MM细胞和PBMNCs活力的影响。三碘胸苷摄取 (3H-TdR) 用于定量DNA合成。将MM细胞（2–3 × 10⁴ 个细胞/孔）接种于96孔培养板中，在37°C下培养24或48小时，培养基中分别加入不同浓度的AT7519、重组IL-6 (10 ng/mL) 或IGF-1 (50 ng/mL)。然后测定3H-TdR的掺入量。
体外细胞实验评估AT-7519的抗增殖作用及其诱导细胞周期阻滞和凋亡的能力。将SW620、HCT116和HT29等人类肿瘤细胞系用不同浓度的化合物处理。通常在处理72-96小时后，使用MTT或CellTiter-Glo等方法检测细胞活力。采用流式细胞术结合碘化丙啶染色进行细胞周期分析，以确定细胞在细胞周期不同阶段的分布。使用Annexin V/PI染色和caspase活性检测评估细胞凋亡。 |
| 动物实验 |
为了评估AT7519的体内抗多发性骨髓瘤（MM）活性，将5×10⁶个MM.1S细胞用100 μL无血清RPMI 1640培养基皮下注射到雄性SCID小鼠体内。当肿瘤出现时，小鼠腹腔注射（IP）载体或溶于0.9%生理盐水的AT7519。第一组10只小鼠每日接受15 mg/kg的剂量，连续两周；第二组小鼠每周三次，每日接受15 mg/kg的剂量，连续四周。对照组小鼠同时单独注射载体。肿瘤体积采用公式V= 0.5 a × b²计算，其中a代表肿瘤的长径，b代表肿瘤的短径。每隔一天使用游标卡尺测量肿瘤的二维尺寸。当肿瘤出现溃疡或生长至2 cm³时，处死动物。从治疗第一天到死亡，对生存期和肿瘤生长情况进行评估。
AT-7519 的体内动物研究采用免疫缺陷小鼠的人源肿瘤异种移植模型。将肿瘤细胞（例如 HCT116 或 HT29 结肠癌细胞）皮下植入小鼠体内。肿瘤建立后，通常每日两次口服 AT-7519。定期使用游标卡尺测量肿瘤体积，并通过比较治疗组和对照组的肿瘤体积来计算肿瘤生长抑制率。研究终点包括肿瘤消退、肿瘤生长延迟以及通过免疫组织化学方法评估肿瘤组织中的细胞凋亡。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AT-7519二盐酸盐具有良好的口服生物利用度，支持其作为口服治疗药物的给药途径。作为盐酸盐，其水溶性增强。然而，现有文献中并未详细描述其半衰期、Cmax和AUC等药代动力学参数。该化合物良好的口服生物利用度使其能够在临床试验中作为口服抗癌药物进行评估。其药代动力学特征支持临床前模型中每日两次的给药方案。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有文献中关于AT-7519 diHCl的具体毒性数据并不详尽。作为一种影响细胞周期进程的CDK抑制剂，其毒性特征可能与其作用机制相关，可能影响骨髓和胃肠道等快速分裂的正常细胞。通常会进行临床前毒理学研究以评估该化合物的安全范围。该化合物已在I/II期临床试验中进行过研究，并在试验中评估了其安全性和耐受性。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
AT-7519 是一种多靶点 CDK 抑制剂，已在 I/II 期临床试验中研究其治疗多种癌症的潜力。其作用机制涉及 ATP 竞争性抑制多种 CDK，从而导致细胞周期阻滞和凋亡。该化合物在多种人类肿瘤细胞系中均显示出强大的抗增殖活性，并在异种移植模型中显示出疗效。目前，该化合物尚未获准用于临床，仍处于研究阶段。此外，该化合物还被发现是一种人 RORγt 激动剂，提示其可能具有其他潜在的药理活性。
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| 分子式 |
C16H18CL3N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
418.71
|
| 精确质量 |
417.052608
|
| 元素分析 |
C, 45.90; H, 4.33; Cl, 25.40; N, 16.73; O, 7.64
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| CAS号 |
902135-91-5
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| 相关CAS号 |
AT7519;844442-38-2;AT7519 TFA;1431697-85-6
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| PubChem CID |
25033099
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| 外观&性状 |
white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
586.0±50.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
308.2±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.654
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| LogP |
0.95
|
| tPSA |
98.91
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
5
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
479
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
0
|
| InChi Key |
PAOFPNGYBWGKCO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H17Cl2N5O2.ClH/c17-10-2-1-3-11(18)13(10)15(24)22-12-8-20-23-14(12)16(25)21-9-4-6-19-7-5-9;/h1-3,8-9,19H,4-7H2,(H,20,23)(H,21,25)(H,22,24);1H
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| 化学名 |
4-[(2,6-dichlorobenzoyl)amino]-N-piperidin-4-yl-1H-pyrazole-5-carboxamide;hydrochloride
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| 别名 |
AT-7519 diHCl; AT7519; AT 7519; AT-7519
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~52 mg/mL (~124.2 mM)
Ethanol: ~28 mg/mL (~66.9 mM) Water: ~43 mg/mL (~102.7 mM) |
|---|
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3883 mL | 11.9414 mL | 23.8829 mL | |
| 5 mM | 0.4777 mL | 2.3883 mL | 4.7766 mL | |
| 10 mM | 0.2388 mL | 1.1941 mL | 2.3883 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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