规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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5mg |
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10mg |
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25mg |
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50mg |
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100mg |
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250mg |
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Other Sizes |
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靶点 |
CDK9/Cyclin T (IC50 = 10 nM); CDK5/p35 (IC50 = 13 nM); cdk2/cyclin A (IC50 = 47 nM); Cdk4/cyclin D1 (IC50 = 100 nM); cdk6/cyclin D3 (IC50 = 170 nM); Cdk1/cyclin B (IC50 = 210 nM); CDK7/Cyclin H/MAT1 (IC50 = 2400 nM); GSK3β (IC50 = 89 nM)
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体外研究 (In Vitro) |
体外活性:AT7519 是一种 ATP 竞争性 CDK 抑制剂,对 CDK1 的 Ki 值为 38 nM。 AT7519 对除 GSK3β 之外的所有非 CDK 激酶均无活性 (IC50 = 89 nM)。 AT7519 在多种人类肿瘤细胞系中显示出有效的抗增殖活性,IC50 值范围为 MCF-7 的 40 nM 至 SW620 的 940 nM,与 CDK1 和 CDK2 的抑制作用一致。 AT7519 在多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系中诱导剂量依赖性细胞毒性,48 小时时 IC50 值范围为 0.5 至 2 μM,最敏感的细胞系是 MM.1S (0.5 μM) 和 U266 (0.5 μM),最敏感的细胞系是 MM.1S (0.5 μM) 和 U266 (0.5 μM)。耐药 MM.1R (>2 μM)。它不会诱导外周血单核细胞 (PBMNC) 的细胞毒性。 AT7519 部分克服了 IL6 和 IGF-1 赋予的增殖优势以及骨髓基质细胞 (BMSC) 的保护作用。 AT7519 诱导 RNA pol II CTD 在丝氨酸 2 和丝氨酸 5 位点快速去磷酸化,并导致转录抑制,部分导致 AT7519 诱导的 MM 细胞细胞毒性。 AT7519 通过下调 GSK-3β 磷酸化来诱导 GSK-3β 激活,这也有助于 AT7519 诱导细胞凋亡,而与转录抑制无关。激酶测定:CDK1、CDK2 和 GSK3-β 的激酶测定均以放射滤光片结合形式进行。 CDK5 的测定采用 DELFIA 格式,CDK 4 和 6 的测定采用 ELISA 格式。对于 CDK 1 和 2,相关 CDK 和 0.12 μg/mL 组蛋白 H1 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT、0.1 中孵育mg/mL BSA、45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 和不同浓度的 AT7519 分别作用 2 或 4 小时。对于 GSK3-β,相关酶和 5 μM 糖原合酶肽 2 以及 10 mM MOPS pH 7.0、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油、0.2 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.01% β -巯基乙醇、15 μM ATP (2.31 Ci/mmol) 和不同浓度的 AT7519 孵育 3 小时。通过添加过量的正磷酸来终止测定反应,并使用 Millipore MAPH 过滤板进行过滤。然后洗涤板,添加闪烁剂并通过 Packard TopCount 上的闪烁计数测量放射性。对于 CDK5,将 CDK5/p35 和 1μM 生物素化组蛋白 H1 肽(生物素-PKTPKKAKKL)在 25 mM Tris-HCl(pH 7.5)、2.5 mM MgCl2、0.025% Brij-35、0.1 mg/mL BSA、1 mM DTT 中孵育、15 μM ATP 和不同浓度的 AT7519 30 分钟。使用 EDTA 终止测定反应,转移至中性抗生物素蛋白包被的板中,并使用兔磷酸化 cdk1 底物多克隆抗体和 DELFIA 铕标记的抗兔 IgG 二抗,使用时间分辨荧光在 λex=335nm、λem 处对磷酸化肽进行定量=620nm。对于 CDK 4 和 6 测定,板用 GST-pRb769-921 包被并用 Superblock 封闭。 CDK4或6与15 mM MgCl2、50 mM HEPES、pH 7.4、1 mM DTT、1 mM EGTA、pH 8.0、0.02% Triton X-100、2.5% DMSO和不同浓度的AT7519一起孵育;反应是通过添加 ATP 引发的。 30 分钟后,通过添加 0.5 M EDTA pH 8.0 终止反应。然后洗涤板并用 Superblock 中稀释的一抗(抗 p-Rb 丝氨酸 780)孵育一小时,然后用二抗(碱性磷酸酶连接的抗兔)再孵育一小时。使用 Attophos 系统开发板,并在 Spectramax Gemini 读板器上在激发波长 450 nm 和发射波长 580 nm 处读取荧光。在所有情况下,IC50 值均使用 GraphPad Prism 软件根据重复曲线计算得出。细胞测定:将细胞(MM.1S、MM.1R、RPMI8226、U266、RPMI8266、RPMI-Dox40、OPM1 细胞、原代 MM 细胞和 PBMNC)与不同浓度的 AT7519 在 37 °C 下孵育 24 或 48 小时。通过测量 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5 二苯基四溴化钠 (MTT) 染料吸光度来评估细胞活力。 DNA 合成通过氚化胸苷摄取 (3H-TdR) 来测量。通过使用膜联蛋白 V/PI 染色评估细胞凋亡。经历凋亡的细胞百分比定义为早期凋亡(Annexin V 阳性细胞)和晚期凋亡(Annexin V 阳性和 PI 阳性细胞)的总和。
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体内研究 (In Vivo) |
在 HCT116 和 HT29 结肠癌异种移植模型中,每天两次给予 AT7519(9.1 mg/kg)可导致早期和晚期皮下肿瘤的肿瘤消退。 AT7519 治疗 (15 mg/kg) 可抑制肿瘤生长,并延长人类 MM 异种移植小鼠模型中小鼠的中位总生存期,与 caspase 3 激活增加相关。
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酶活实验 |
使用辐射滤光片结合对 CDK1、CDK2 和 GSK3-β 进行激酶测定。 CDK 4 和 6 的测定形式为 ELISA,CDK 5 的测定形式为 DELFIA。将相关 CDK 和 0.12 μg/mL 组蛋白 H1 分别在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β 中孵育 2 或 4 小时-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT、0.1 mg/mL BSA、45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 和各种浓度的 AT7519。为了测试 GSK3-β,添加适当的酶和 5 μM 糖原合酶肽 2,并将混合物在 10 mM MOPS pH 7.0、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 下孵育三小时甘油、0.2 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.01% β-巯基乙醇、15 μM ATP (2.31 Ci/mmol),所有这些都经过测试。添加过量正磷酸以终止反应后,使用 Millipore MAPH 过滤板过滤测定反应。之后,清洁板,添加闪烁剂,并使用 Packard TopCount 闪烁计数装置测定放射性。持续 30 分钟,CDK5、CDK5/p35、1μM 生物素化组蛋白 H1 肽(生物素-PKTPKKAKKL)、pH 7.5、25 mM Tris-HCl、0.025% Brij-35、0.1 mg/mL BSA、1 mM DTT 、15 μM ATP 和不同浓度的 AT7519 进行孵育。 λex=335nm、λem=620nm 处的时间分辨荧光用于使用 EDTA 终止测定反应,将混合物转移至中性亲和素包被的板,并使用兔磷酸 cdk1 底物多克隆抗体和 DELFIA 铕标记对磷酸化肽进行定量抗兔 IgG 二抗。板用 GST-pRb769-921 包被,并用 Superblock 封闭以进行 CDK 4 和 6 测定。为了启动反应,将 ATP 添加到 CDK4 或 6 中。孵育条件包括 15 mM MgCl2、50 mM HEPES、pH 7.4、1 mM DTT、1 mM EGTA、pH 8.0、0.02% Triton X-100、2.5% DMSO 和各种浓度的 AT7519。 30 分钟后添加 0.5 M EDTA pH 8.0 终止反应。之后,清洗板并与二抗(碱性磷酸酶连接的抗兔)一起孵育一小时,并与稀释在 Superblock 中的一抗(抗 p-Rb 丝氨酸 780)一起孵育一小时。使用 Attophos 系统显色板后,在 Spectramax Gemini 读板器上测量荧光,激发波长为 450 nm,发射波长为 580 nm。使用 GraphPad Prism 软件,IC50 值是根据每种情况下的复制曲线计算得出的。
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细胞实验 |
3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5 二苯基四溴化钠 (MTT) 染料吸光度用于测量 AT7519 对 MM 细胞系、原代 MM 细胞和 PBMNC 活力的影响。三碘胸苷摄取 (3H-TdR) 用于定量 DNA 合成。将 MM 细胞(2–3 × 104 细胞/孔)在 96 孔培养板中于 37°C 下培养 24 或 48 小时,并添加培养基和不同浓度的 AT7519、重组 IL-6( 10 ng/mL) 或 IGF-1 (50 ng/mL)。然后测量 3H-TdR 掺入。
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动物实验 |
In order to assess the in vivo anti-MM activity of AT7519, 5×106 MM.1S cells are subcutaneously injected into male SCID mice using 100 μL of serum-free RPMI 1640 medium. Mice are treated intraperitoneally (IP) with vehicle or AT7519 dissolved in 0.9% saline solution when tumors are detectable. Ten mice in the first group receive a daily dose of 15 mg/kg for two weeks, while the second group receives a daily dose of 15 mg/kg three times a week for four weeks in a row. The carrier is given to the control group separately at the same time. Tumor volume is calculated using the formula V= 0.5 a × b2, where a represents the tumor's long diameter and b its short diameter. Tumor size is measured every other day in two dimensions using calipers. When a tumor is ulcerated or grows to a size of 2 cm3, the animal is killed. From the first day of treatment until death, survival and tumor growth are assessed.
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参考文献 |
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分子式 |
C16H17CL2N5O2
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分子量 |
382.24
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精确质量 |
381.08
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元素分析 |
C, 50.28; H, 4.48; Cl, 18.55; N, 18.32; O, 8.37
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CAS号 |
844442-38-2
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相关CAS号 |
AT7519 TFA;1431697-85-6;AT7519 Hydrochloride;902135-91-5
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外观&性状 |
Solid powder
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SMILES |
C1CNCCC1NC(=O)C2=C(C=NN2)NC(=O)C3=C(C=CC=C3Cl)Cl
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InChi Key |
OVPNQJVDAFNBDN-UHFFFAOYSA-N
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InChi Code |
InChI=1S/C16H17Cl2N5O2/c17-10-2-1-3-11(18)13(10)15(24)22-12-8-20-23-14(12)16(25)21-9-4-6-19-7-5-9/h1-3,8-9,19H,4-7H2,(H,20,23)(H,21,25)(H,22,24)
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化学名 |
4-[(2,6-dichlorobenzoyl)amino]-N-piperidin-4-yl-1H-pyrazole-5-carboxamide
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别名 |
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HS Tariff Code |
2934.99.9001
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存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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溶解度 (体外) |
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溶解度 (体内) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 30% Propylene glycol , 5% Tween 80 , 65% D5W: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
1 mM | 2.6162 mL | 13.0808 mL | 26.1616 mL | |
5 mM | 0.5232 mL | 2.6162 mL | 5.2323 mL | |
10 mM | 0.2616 mL | 1.3081 mL | 2.6162 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
NCT02503709 | Active Recruiting |
Drug: CDK Inhibitor AT7519 Drug: Onalespib |
Advanced Malignant Solid Neoplasm Unresectable Solid Neoplasm |
National Cancer Institute (NCI) |
April 8, 2016 | Phase 1 |
NCT00390117 | Completed | Other: laboratory biomarker analysis Drug: CDKI AT7519 |
Unspecified Adult Solid Tumor, Protocol Specific Lymphoma |
NCIC Clinical Trials Group | January 5, 2007 | Phase 1 |