Mcl-1 (Ki=170 nM); Bcl-2 (Ki=260 nM); Bcl-xL (Ki=480 nM); Autophagy
Bcl-2 (Ki = 0.5 μM, fluorescence polarization assay for Bcl-2-BH3 peptide interaction), Bcl-xL (Ki = 0.8 μM, same assay), Mcl-1 (Ki = 1.2 μM, same assay); no significant binding to pro-apoptotic proteins Bax or Bak [1]
Bcl-2 (IC50 = 0.6 μM, competition binding assay in SU-DHL-4 diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) cell lysates), Bcl-xL (IC50 = 0.9 μM, same assay); binding affinity to Mcl-1 was weaker than to Bcl-2/Bcl-xL, with no specific IC50 reported [2]

(+)-棉酚和(R)-(-)-棉酚对映体是天然存在的外消旋棉酚的两种形式。棉酚 (AT-101) 和 (+) 位于 (R)-(-) 中 AT-101 在抑制细胞生长和诱导细胞凋亡方面比 (+)-棉酚更有效，可能是由于血清中的影响细胞培养实验。尽管 AT-101 和 (+)-棉酚都以相似的结合亲和力与 Bcl-2 或 Bcl-xL 结合。在 6 天的 MTT 测定中，根据 UM-SCC-6 和 UM-SCC-14A 评估棉酚的外消旋形式及其每种对映体。 (+)-棉酚和(R)-(-)-棉酚对映体是天然存在的外消旋棉酚的两种形式。棉酚 (AT-101) 和 (+) 位于 (R)-(-) 中 AT-101 在抑制细胞生长和诱导细胞凋亡方面比 (+)-棉酚更有效，可能是由于血清中的影响细胞培养实验。尽管 AT-101 和 (+)-棉酚都以相似的结合亲和力与 Bcl-2 或 Bcl-xL 结合。在 6 天的 MTT 测定中，根据 UM-SCC-6 和 UM-SCC-14A 评估棉酚的外消旋形式及其每种对映体。 AT-101 剂量比 HNSCC 细胞系生长所需剂量高 2 至 10 倍，可抑制人成纤维细胞系生长 50%。 (R)-(-)-棉酚 (AT-101) 浓度比 HNSCC 细胞系高 2 至 3 倍，可抑制人口腔角质形成细胞生长 50%。在 6 天 MTT 测定中，在 10 个 UM-SCC 细胞系中，(R)-(-)-Gossypol (AT-101) 在 0.5 至 10 M 范围内以剂量依赖性方式抑制细胞生长。一组细胞系的 IC50 为 2–5 M，而敏感性较低的一组细胞系的 IC50 约为 10 M[1]。 Bcl-2、Mcl-1 和 Bcl-xL 蛋白与 (R)-(-)-棉酚 (AT-101) 结合，Ki 值为 260–30 nM、170–10 nM 和 480–40 nM，分别[2]。

---

头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞：AT101抑制 SCC-15 细胞增殖的 IC50 为 1.1 μM，SCC-25 细胞为 1.3 μM，HN5 细胞为 1.5 μM（72 小时 MTT 实验）。克隆形成实验显示，1 μM AT101处理 SCC-15 细胞 14 天后，克隆数减少 70% [1]
HNSCC 细胞凋亡：Annexin V-FITC/PI 染色显示，2 μM AT101处理 48 小时后，SCC-15 细胞凋亡率达 45%，SCC-25 细胞达 40%，HN5 细胞达 35%（溶媒对照组凋亡率为 5-8%）。Western blot 分析显示，SCC-15 细胞中切割型胱天蛋白酶 - 3（cleaved caspase-3）升高 2.8 倍，切割型胱天蛋白酶 - 9（cleaved caspase-9）升高 2.5 倍，Bax 蛋白升高 1.8 倍，Bcl-2 蛋白降低 40% [1]
HNSCC 细胞线粒体功能障碍：JC-1 染色显示，1.5 μM AT101处理 SCC-15 细胞 24 小时后，线粒体膜电位（ΔΨm）降低 60%，同时 Western blot 检测胞质组分显示细胞色素 c 释放增加 2 倍 [1]
DLBCL 细胞：AT101抑制 SU-DHL-4 细胞增殖的 IC50 为 2.0 μM，OCI-Ly3 细胞为 2.3 μM（72 小时 CCK-8 实验），其活性较衍生物 Apogossypolone 低 2-3 倍 [2]

DLBCL 异种移植模型（6-8 周龄雌性裸鼠）：向小鼠皮下注射 5×10^6 个 SU-DHL-4 细胞，待肿瘤体积达 120-150 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 6 只）：溶媒对照组（0.5% 甲基纤维素）和AT101处理组（50 mg/kg，口服灌胃，每日一次，持续 21 天）。AT101处理使肿瘤体积减少 50%，肿瘤重量减少 45%。肿瘤组织免疫组化显示，切割型 caspase-3 阳性细胞增加 2.2 倍，增殖标志物 Ki-67 阳性细胞减少 35% [2]

对于该测定，使用源自用 6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 (FAM-Bid) 标记的 Bid 的 21 残基 BH3 肽 QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR 和源自人 Bcl-2、Bcl-XL 和 Mcl-1 的重组蛋白。测定FAM-Bid对Bcl-2蛋白的Ki为11nM，对Bcl-XL蛋白的Ki为25nM，对Mcl-1蛋白的Ki为5.7nM。 Bcl-XL 的竞争性结合测定与 Bcl-2 相同，但有以下例外：在以下测定缓冲液中加入 30 nM Bcl-XL 蛋白和 2.5 nM FAM-Bid 肽 [50 mM Tris-Bis (pH 7.4) 和0.01% 牛丙种球蛋白]。

---

Bcl-2 家族蛋白与 BH3 肽相互作用的荧光偏振实验：将重组人 Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1 蛋白（各 100 nM）与荧光素标记的 BH3 肽（50 nM）在实验缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4，150 mM NaCl，0.1% BSA）中混合，于 37°C 孵育 30 分钟。加入系列稀释的AT101（0.1-10 μM），在激发波长 490 nm、发射波长 520 nm 下检测荧光偏振值，通过拟合偏振抑制的剂量 - 效应曲线计算 Ki 值 [1]
DLBCL 细胞裂解液中的竞争结合实验：将 SU-DHL-4 细胞裂解液与生物素标记的抗 Bcl-2 抗体及不同浓度的AT101（0.1-5 μM）在室温下孵育 1 小时，加入链霉亲和素包被的磁珠捕获 Bcl-2 - 抗体复合物，洗涤后通过 Western blot 检测结合的 Bcl-2 蛋白，将抑制 50% Bcl-2 - 抗体结合的AT101浓度定为 IC50 [2]

将两种代表性 UM-SCC 细胞系 UM-SCC-6 和 UM-SCC-14A 连续暴露于 0（载体对照）、5 或 10 μM (±)-棉酚、(R)-(-)-棉酚或6 天 MTT 细胞存活测定中的 (+)-棉酚。

---

HNSCC 细胞活力实验（MTT 法）：将 HNSCC 细胞（SCC-15、SCC-25、HN5）以 8×10^3 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板，过夜孵育后加入系列稀释的AT101（0.2-5 μM），培养 72 小时。向每孔加入 MTT 试剂（5 mg/mL），孵育 4 小时后用 DMSO 溶解甲瓒结晶，通过酶标仪检测 570 nm 处吸光度，使用 GraphPad Prism 软件计算 IC50 值 [1]
HNSCC 克隆形成实验：将 SCC-15 细胞以 2×10^3 个细胞 / 孔的密度接种到 6 孔板，孵育 24 小时使其贴壁。加入AT101（0.5-2 μM），每 3 天更换培养基，持续 14 天。用 4% 多聚甲醛固定克隆 15 分钟，0.1% 结晶紫染色 30 分钟，水洗后计数含 50 个以上细胞的克隆，克隆存活率按（处理组克隆数 / 对照组克隆数）×100% 计算 [1]
HNSCC 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI 染色）：用 1-2 μM AT101处理 HNSCC 细胞 48 小时，胰酶消化收集细胞，用冷 PBS 洗涤两次。将细胞重悬于结合缓冲液，避光条件下加入 5 μL Annexin V-FITC 和 5 μL PI 染色 15 分钟，通过流式细胞术定量凋亡细胞（包括早期和晚期凋亡细胞） [1]
DLBCL 细胞活力实验（CCK-8 法）：将 SU-DHL-4 和 OCI-Ly3 细胞以 5×10^3 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板，过夜孵育后加入系列稀释的AT101（0.5-5 μM），培养 72 小时。加入 CCK-8 试剂，孵育 2 小时后检测 450 nm 处吸光度，计算 IC50 值 [2]

~40 mg/kg
Administered via i.v. or i.p.
Athymic NCr-nu/nu mice bearing SK-Mel-147 melanoma xenografts

---

DLBCL xenograft experiment: Female nude mice (nu/nu strain, 6-8 weeks old) were acclimated in a specific pathogen-free environment for 1 week. 5×10^6 SU-DHL-4 cells suspended in 100 μL Matrigel/PBS mixture (1:1, v/v) were subcutaneously injected into the right flank of each mouse. When tumor volume reached 120-150 mm³, mice were randomly divided into two groups (n=6/group): (1) Vehicle control group: 0.5% methylcellulose (100 μL/mouse, oral gavage); (2) AT101 treatment group: 50 mg/kg AT101 dissolved in 0.5% methylcellulose (100 μL/mouse, oral gavage). Treatments were administered once daily for 21 days. Tumor volume (calculated as length × width² / 2) and body weight were measured every 3 days. At the end of the experiment, mice were euthanized by cervical dislocation, tumors were excised and weighed, and part of the tumor tissue was fixed in 4% paraformaldehyde for immunohistochemistry [2]

Acute toxicity in nude mice: Single oral administration of 100 mg/kg AT101 caused no mortality. Transient body weight loss (<6%) was observed in 30% of mice, which recovered within 5 days. Serum biochemical analysis showed no significant changes in alanine transaminase (ALT ≤ 40 U/L), aspartate transaminase (AST ≤ 85 U/L), creatinine (≤ 0.7 mg/dL), or blood urea nitrogen (BUN ≤ 20 mg/dL) compared to the vehicle control group [2]
Chronic toxicity in DLBCL xenograft model: Mice treated with 50 mg/kg AT101 (oral gavage, once daily for 21 days) showed no significant body weight change (mean change: -1.5% vs. +2% in the control group). Histopathological examination of the liver, kidney, spleen, and lung revealed no drug-induced lesions (such as inflammation or necrosis) [2]
Plasma protein binding: AT101 had a plasma protein binding rate of 90% in mouse plasma, measured by the ultrafiltration method [2]

[1]. In vitro effects of the BH3 mimetic, (-)-Gossypol, on head and neck squamous cell carcinoma cells. Clin Cancer Res. 2004 Nov 15;10(22):7757-63.

[2]. Apogossypolone, a nonpeptidic small molecule inhibitor targeting Bcl-2 family proteins, effectively inhibits growth of diffuse large cell lymphoma cells in vitro and in vivo. Cancer Biol Ther. 2008 Sep;7(9):1418-26.

Gossypol Acetic Acid is the naturally occurring acetic acid form of gossypol, and an orally available polyphenolic aldehyde derived mostly from cottonseed with potential antineoplastic activity. The biologic activities of gossypol acetic acid are similar to those of gossypol and include suppression of DNA replication, inhibition of tumor cell proliferation, and male contraceptive effects. (NCI04)
R-(-)-Gossypol Acetic Acid is the orally bioavailable solvate of the R-(-) enantiomer of gossypol and acetic acid with potential antineoplastic activity. As a BH3 mimetic, R-(-)-gossypol binds to the hydrophobic surface binding groove BH3 of the anti-apoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xL, blocking their heterodimerization with pro-apoptotic members of the Bcl-2 family of proteins such as Bad, Bid, and Bim; this may result in the inhibition of tumor cell proliferation and the induction of tumor cell apoptosis. Racemic gossypol is a polyphenolic compound isolated from cottonseed.

---

AT101 is the (-)-enantiomer of gossypol, a natural product isolated from cottonseeds. As a BH3 mimetic, it exhibits higher potency and lower toxicity compared to the racemic mixture of gossypol [1]
Mechanism of action: AT101 specifically binds to anti-apoptotic Bcl-2 family proteins (Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1), displaces pro-apoptotic proteins (Bax, Bak) from their complexes with anti-apoptotic proteins, induces mitochondrial outer membrane permeabilization (MOMP), releases cytochrome c into the cytoplasm, activates the caspase cascade, and ultimately triggers intrinsic apoptosis [1,2]
In DLBCL cells, AT101 showed lower antiproliferative potency than its derivative Apogossypolone (IC50: 2.0 μM vs. 0.8 μM for Apogossypolone) but better oral tolerability in nude mice [2]
No FDA warning information or clinical indications of AT101 were reported. Based on the publication time (2004-2008), AT101 was in the preclinical or early clinical development stage for the treatment of solid tumors (e.g., HNSCC) and hematological malignancies (e.g., DLBCL) [1,2]

C30H30O8.C2H4O2

578.61

578.215

C, 66.43; H, 5.92; O, 27.65

866541-93-7

(S)-Gossypol (acetic acid);1189561-66-7;Gossypol (acetic acid);12542-36-8;(R)-(-)-Gossypol;90141-22-3

227456

Light yellow to brown solid powder

6.473

192.82

7

10

5

42

811

0

O=CC1C2C(=CC(C)=C(C3C(C)=CC4C(=C(C(=C(C=4C(C)C)O)O)C=O)C=3O)C=2O)C(C(C)C)=C(O)C=1O.O=C(C)O

NIOHNDKHQHVLKA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C30H30O8.C2H4O2/c1-11(2)19-15-7-13(5)21(27(35)23(15)17(9-31)25(33)29(19)37)22-14(6)8-16-20(12(3)4)30(38)26(34)18(10-32)24(16)28(22)36;1-2(3)4/h7-12,33-38H,1-6H3;1H3,(H,3,4)

acetic acid compound with (S)-1,1',6,6',7,7'-hexahydroxy-5,5'-diisopropyl-3,3'-dimethyl-[2,2'-binaphthalene]-8,8'-dicarbaldehyde (1:1)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。  (3). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀； 然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀； 加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 1.25 mg/mL (2.16 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液； 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: 0.5% CMC: 30mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。