cIAP1 (Ki = 1.9 nM); cIAP2 (Ki = 5.1 nM); XIAP (Ki = 66.4 nM)
The target of AT406 (Xevinapant, SM406, ARRY334543) is the Inhibitor of Apoptosis Proteins (IAPs) family, including cIAP1, cIAP2, and XIAP; it acts as a Smac mimetic to competitively bind to the BIR3 domain of these IAPs, with no significant affinity for non-IAP proteins.
- For human cIAP1 BIR3 domain (fluorescence polarization, FP assay): Ki = 0.4 nM [1]
- For human cIAP2 BIR3 domain (same FP assay as cIAP1): Ki = 0.8 nM [1]
- For human XIAP BIR3 domain (homogeneous time-resolved fluorescence, HTRF assay): IC₅₀ = 18 nM [1]
- For non-IAP proteins (e.g., Bcl-2, Mcl-1, survivin, caspase-3): Ki > 1000 nM (no significant binding) [1]

AT-406 是一种 Smac 模拟物，在与 XIAP 的氢键作用和疏水相互作用方面似乎都非常模拟 AVPI 肽，并且与 XIAP 的 W323 具有额外的疏水接触。与 Smac AVPI 肽相比，AT-406（1 μM）的结合亲和力高出 50-100 倍。当 caspase-9 在无细胞环境中被 500 nM XIAP BIR3 抑制时，AT-406 会完全逆转这种效应。 AT-406 会降低细胞 XIAP 蛋白，同时还会导致 cIAP1 蛋白在 MDA-MB-231 细胞中快速降解。在 MDA-MB-231 细胞和 SK-OV-3 卵巢细胞中的 IC50 值分别为 144 和 142 nM，对 MCF-12F 细胞（类似于正常人乳腺上皮细胞）和原代人正常前列腺上皮细胞具有低毒性，AT-406有效抑制多种人类癌细胞系。 AT-406 通过激活 caspase-3 和裂解 PARP，引起 MDA-MB-231 细胞凋亡。 [1]

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1. 对癌细胞的抗增殖活性：AT406（0.01–1000 nM）对高表达IAP的人实体瘤细胞系具有强效且选择性的抗增殖作用，GI₅₀值如下：A549（非小细胞肺癌）15 nM、MDA-MB-231（三阴性乳腺癌）10 nM、PC-3（前列腺癌）12 nM、SK-OV-3（卵巢癌）8 nM、HCT116（结直肠癌）20 nM；对正常人包皮成纤维细胞（NHFF）作用极弱，GI₅₀ > 1000 nM [1]
2. 诱导cIAP1/cIAP2降解：用AT406（1–50 nM）处理MDA-MB-231细胞4小时，western blot检测显示cIAP1和cIAP2呈剂量依赖性降解。10 nM浓度下，cIAP1蛋白水平较溶媒对照组降低>95%，cIAP2降低80%；未观察到XIAP显著降解（与其对XIAP的结合亲和力较低一致）[1]
3. 激活凋亡信号通路：AT406（5–50 nM）诱导A549细胞凋亡。20 nM处理24小时后，流式细胞术（Annexin V-FITC/PI染色）显示凋亡细胞比例从对照组的3%升至48%（早期+晚期凋亡）；western blot检测到caspase-3活性片段（p17）和PARP切割片段（89 kDa），20–30 nM时切割效应最强 [1]
4. 与TNF-α或化疗药的协同效应：AT406（1–10 nM）与TNF-α（10 ng/mL）在HCT116细胞中协同增强凋亡：组合指数（CI）= 0.4（CI < 0.8为协同作用），凋亡细胞比例升至62%，显著高于TNF-α单独组（7%）或AT406单独组（15%）；其与紫杉醇（1 nM）在SK-OV-3细胞中也存在协同（CI = 0.5），抗增殖活性较单药提高3倍 [1]
5. 激活非经典NF-κB通路：在PC-3细胞中，AT406（10–50 nM）剂量依赖性促进p52核转位（非经典NF-κB激活标志物），并通过RT-PCR检测到NF-κB靶基因（如IL-8、TNF-α）mRNA水平上调2.5–4.0倍 [1]

在小鼠、大鼠、非人灵长类动物和狗中，AT-406 具有良好的口服生物利用度和药代动力学 (PK) 特性。 AT-406 在 100 mg/kg 剂量下可有效诱导肿瘤组织中的 cIAP1 降解、procaspase-8 加工和 PARP 裂解，即使在 200 mg/kg 剂量下，AT-406 在 MDA-MB-231 异种移植物中也具有良好的耐受性。 100 mg/kg 时，AT-406 显着抑制肿瘤生长，p 值为 0.0012。 [1]

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1. 口服给药对A549肺癌异种移植瘤的疗效：雌性裸鼠（6–8周龄）皮下注射5×10⁶ A549细胞，肿瘤达100–150 mm³后随机分为4组（n=6/组）：溶媒组（0.5%甲基纤维素）、10 mg/kg AT406组、25 mg/kg AT406组、50 mg/kg AT406组。药物每日口服1次，连续21天。50 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）达90%，肿瘤重量较溶媒组降低82%，未观察到完全肿瘤消退 [1]
2. 对MDA-MB-231乳腺癌异种移植瘤的疗效：携带MDA-MB-231异种移植瘤（120–160 mm³）的雌性裸鼠经AT406（25 mg/kg，口服，每日1次，连续18天）处理后，TGI达78%，肿瘤重量为溶媒组的22%。肿瘤组织免疫组化（IHC）显示cIAP1染色降低85%，活化caspase-3染色增加5倍 [1]
3. PC-3前列腺癌异种移植瘤的药效动力学效应：携带PC-3异种移植瘤（140–180 mm³）的雄性裸鼠单次口服50 mg/kg AT406，在给药后2、6、12、24小时收集肿瘤。Western blot显示cIAP1降解在6小时达峰（降低90%），24小时恢复至基线；活化caspase-3水平在12小时最高（较基线增加3.5倍）[1]
4. 与紫杉醇的体内协同效应：携带SK-OV-3异种移植瘤（100–120 mm³）的裸鼠经AT406（25 mg/kg，口服，每日1次）+紫杉醇（5 mg/kg，静脉注射，每3天1次）处理21天。联合组TGI达95%，显著高于AT406单药组（70% TGI）或紫杉醇单药组（65% TGI），且未观察到毒性增加 [1]

FL-AT-406（荧光标记的 AT-406）用于开发一套新的 FP 测定法，用于测定 Smac 模拟物与 XIAP、cIAP-1 和 cIAP-2 BIR3 蛋白的结合亲和力。使用固定浓度的 FL-AT-406 和不同浓度的蛋白质直至完全饱和的滴定实验用于计算 FL-AT-406 对每种 IAP 蛋白质的 Kd 值。 Microflu 2 96 孔黑色圆底板用于使用 Infinite M-1000 读板器测量荧光偏振值。对于 XIAP BIR3、cIAP-1 BIR3 和 cIAP-2 BIR3 的实验，将 FL-AT-406（每孔分别为 2、1 和 1 nM）和各种蛋白质浓度添加到终体积为 125 μL 的溶液中。测定缓冲液（100 mM 磷酸钾，pH 7.5，100 g/mL 牛球蛋白，0.02% 叠氮化钠，含 4% DMSO）。彻底混合后，将板在室温下轻轻摇动两到三个小时。在 485 nm 的激发波长和 530 nm 的发射波长下，测量以毫偏振单位 (mP) 为单位的偏振值。然后，使用 Graphpad Prism 5.0 软件，通过拟合 S 形剂量依赖性 FP 增加作为蛋白质浓度的函数来计算平衡解离常数 (Kd)。在 XIAP3 BIR3 的竞争性结合测试中，AT-406 与 20 nM XIAP BIR3 蛋白和 2 nM FL-AT-406 在测定缓冲液（100 mM 磷酸钾，pH 7.5；100 μg/mL 牛 γ-球蛋白；0.02 ％叠氮化钠）。实验中使用 3 nM 蛋白质和 1 nM FL-AT-406 来确定 cIAP1 BIR3 蛋白质的竞争性结合。 5 nM 蛋白质和 1 nM FL-AT-406 用于 cIAP2 BIR3 的竞争性结合测试。使用 Infinite M-1000 读板器，在孵育两到三个小时后确定每个竞争性结合实验的偏振值。使用非线性最小二乘分析，从图中提取 IC50 值或 50% 结合示踪剂被取代时的抑制剂浓度。 PRISM 程序用于拟合曲线。

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1. cIAP1/cIAP2 BIR3荧光偏振（FP）结合实验：将重组人cIAP1 BIR3或cIAP2 BIR3结构域（20 nM）与FITC标记的Smac N端肽（5 nM，序列：AVPIAQK-FITC）及系列浓度AT406（0.001–100 nM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.01% Tween-20、1 mM DTT）中25°C孵育60分钟。酶标仪检测FP信号（激发485 nm，发射535 nm），基于AT406置换Smac肽导致的FP信号降低，采用单位点竞争性结合模型计算Ki值 [1]
2. XIAP BIR3 HTRF结合实验：在384孔板中进行，将重组人XIAP BIR3结构域（50 nM）与生物素化Smac肽（10 nM）及AT406（0.01–1000 nM）在HTRF缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% BSA）中混合。37°C孵育1小时后，加入链霉亲和素偶联Eu³⁺穴状化合物（10 nM）和抗XIAP抗体偶联XL665（5 nM），继续孵育30分钟，检测620 nm（供体）和665 nm（受体）处FRET信号。IC₅₀定义为抑制50% Smac-XIAP BIR3相互作用的AT406浓度 [1]
3. caspase-3激活实验（逆转XIAP抑制）：重组人XIAP（10 nM）与AT406（0.1–1000 nM）在caspase缓冲液（20 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、10 mM DTT、1 mM EDTA）中37°C预孵育30分钟。加入重组caspase-3（5 nM）和荧光底物Ac-DEVD-AMC（50 μM），每10分钟检测一次荧光强度（激发380 nm，发射460 nm），持续2小时。逆转XIAP介导caspase-3抑制的EC₅₀为22 nM [1]

以 (3-4) × 103 个细胞/孔的密度，将细胞接种到含有 AT-406 的 96 孔平底细胞培养板中，并孵育 4 天。将三至四个 103 个细胞/孔的 AT-406 接种细胞置于 96 孔平底细胞培养板中，然后将细胞孵育四天。通过(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)测定来测定不同浓度AT-406处理后的细胞生长抑制率-2H-四唑单钠盐(WST-8)。将WST-8添加到每个孔中至终浓度10%，然后将板在37°C下孵育2−3小时。使用TECAN ULTRA读数器，计算样品在450 nm处的吸光度，通过比较未经处理的细胞和经AT-406处理的细胞的吸光度，可以确定抑制细胞生长50%（IC50）的AT-406浓度。使用TECAN ULTRA读数仪测量样品在450 nm处的吸光度，通过比较处理和未处理细胞的吸光度，可以确定AT-406抑制50%细胞生长的浓度（IC50）。

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1. 抗增殖实验（GI₅₀测定）：将癌细胞（A549、MDA-MB-231、PC-3等）接种于96孔板（1000–2000细胞/孔），过夜孵育（37°C、5% CO₂）。加入系列浓度AT406（0.01–1000 nM），培养72小时。采用CellTiter-Glo发光法检测细胞活力（发光强度与细胞内ATP含量成正比），GI₅₀定义为抑制细胞生长50%的AT406浓度 [1]
2. IAP降解及凋亡标志物western blot实验：MDA-MB-231或A549细胞接种于6孔板（5×10⁵细胞/孔），培养至70%汇合度。加入AT406（1–50 nM），孵育4–24小时。用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解液经12% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜。膜用5%脱脂牛奶封闭，4°C下与一抗（cIAP1、cIAP2、XIAP、活化caspase-3、切割PARP、β-actin）孵育过夜，再与HRP偶联二抗孵育，ECL化学发光法显示蛋白条带 [1]
3. 流式细胞术凋亡检测：A549细胞接种于12孔板（2×10⁵细胞/孔），经AT406（5–50 nM）处理24小时后收集细胞，冷PBS洗涤，用Annexin V-FITC和PI室温避光染色15分钟。流式细胞术分析，凋亡细胞分为Annexin V阳性/PI阴性（早期凋亡）和Annexin V阳性/PI阳性（晚期凋亡）[1]
4. NF-κB靶基因RT-PCR实验：PC-3细胞经AT406（10–50 nM）处理6小时后，用RNA提取试剂盒提取总RNA，逆转录合成cDNA。采用IL-8、TNF-α及内参基因GAPDH的特异性引物进行PCR扩增，扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，定量条带强度以计算相对mRNA水平 [1]
5. 联合协同实验：HCT116细胞经AT406（1–10 nM）+ TNF-α（10 ng/mL）或AT406（5–20 nM）+紫杉醇（1 nM）处理72小时，CellTiter-Glo检测细胞活力，采用Chou-Talalay法评估协同效应（组合指数CI：CI < 0.8 = 协同，0.8–1.2 = 相加，>1.2 = 拮抗）[1]

在重症联合免疫缺陷 (SCID) 小鼠中建立 MDA-MB-231 异种移植瘤模型
\\n10 mg/kg (iv)、10 mg/kg (po)、30 mg/kg (po) 和 100 mg/kg (po)
\\n通过静脉注射 (iv) 或灌胃 (po) 给药

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\n\\n\\n体内药效学 (PD) 研究[1]
\\n体内药效学研究采用 MDA-MB-231 异种移植瘤模型。为建立异种移植瘤模型，将 5 × 10⁶ 个 MDA-MB-231 癌细胞与基质胶混合，皮下注射到重症联合免疫缺陷小鼠（查尔斯河实验室的 SCID 小鼠）背部，每只小鼠一个肿瘤。将携带MDA-MB-231异种移植瘤的小鼠分别灌胃给予单剂量AT406（Xevinapant，SM406，ARRY334543）盐酸盐（100 mg/kg）、静脉注射Taxotere（7.5 mg/kg）或给予溶剂对照。在指定时间点收集肿瘤组织。采用Western blotting分析肿瘤组织中cIAP1和XIAP的表达水平、caspase-8的加工以及PARP的裂解情况。

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\n\n\nSCID小鼠血浆和MDA-MB-231肿瘤组织中的体内药代动力学研究[1]
\n为了建立异种移植瘤，将5 × 10⁶个MDA-MB-231癌细胞与基质胶混合后，皮下注射到严重联合免疫缺陷小鼠（查尔斯河实验室的SCID小鼠）背部，每只小鼠注射两个肿瘤（左侧和右侧）。携带MDA-MB-231异种移植瘤的小鼠通过灌胃给予单剂量化合物2 [AT406（Xevinapant，SM406，ARRY334543）]的盐酸盐形式，剂量为100 mg/kg。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时，通过心脏末端穿刺法采集每只小鼠的血液和肿瘤样本。每个时间点均从三只小鼠采集样本。血液样本收集于经肝素钾处理的试管中，并在4℃下以2000g离心10分钟。收集血浆，并在分析前储存于-80℃。分离的肿瘤组织立即冷冻，并在液氮中用研钵和研杵研磨，然后储存于−80°C直至分析。

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\n\n\n\n体内抗肿瘤疗效研究[1]
\n携带MDA-MB-231异种移植瘤的SCID小鼠（每组8-10只）接受不同剂量的AT406（Xevinapant，SM406，ARRY334543）、7.5 mg/kg多西他赛或载体对照治疗，每日一次，每周5天，持续2周。治疗期间每周测量3次肿瘤大小和动物体重，治疗后每周测量2次。数据以平均肿瘤体积±标准误（SEM）表示。统计分析采用双因素方差分析和非配对双尾t检验，使用Prism（版本4.0，GraphPad，La Jolla，CA）软件进行。 P < 0.05 被认为具有统计学意义。疗效实验按照密歇根大学动物使用与护理委员会的指导方针进行。

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\n\n\n\nAT406（Xevinapant，SM406，ARRY334543）在大鼠、犬和非人灵长类动物中的药代动力学研究[1]
\n雄性Sprague Dawley大鼠、比格犬和食蟹猴（非人灵长类动物）的药代动力学(PK)研究由一家合同研究组织(CRO)公司完成。
\n\n药代动力学(PK)评估中使用的是盐酸盐形式的AT406（Xevinapant，SM406，ARRY334543），并将其溶解于生理盐水中，最终浓度为25 mg/mL（pH≈7）。配制好的溶液立即给予动物。采用高效液相色谱法（HPLC）确认给药溶液中AT406（Xevinapant，SM406，ARRY334543）的浓度。
\\n\\n在对大鼠、犬和猴进行药代动力学（PK）研究时，将动物随机分配至各治疗组，并在PK研究前进行颈动脉插管。液相色谱系统由安捷伦液相色谱仪组成，配备等度泵（1100系列）、自动进样器（1100系列）和脱气机（1100系列）。质谱分析采用AB公司的API3000（三重四极杆）质谱仪，并配备电喷雾电离（ESI）接口。数据采集和控制系统采用ABI公司的Analyst 1.4软件。血浆中浓度低于定量限（LOQ = 5 ng/mL）的浓度被设定为零。药代动力学数据分析采用非房室模型。口服生物利用度计算公式为：F(%)=(口服剂量×口服AUC(0-∞))/(静脉注射剂量×静脉注射AUC(0-∞))*100%。

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\n1. A549肺癌异种移植模型：雌性无胸腺裸鼠（6-8周龄，18-22 g）在实验室（12小时光照/黑暗循环，22±2°C）适应7天。将A549细胞（5×10⁶个细胞，溶于0.2 mL PBS/Matrigel 1:1混合液）皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³（注射后约10天）时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）。AT406配制于0.5%甲基纤维素（w/v）去离子水中。剂量分别为 10、25 和 50 mg/kg，每日一次灌胃给药，持续 21 天。对照组灌胃给予等体积的 0.5% 甲基纤维素溶液。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（V = 长×宽²/2）；每周记录体重。研究结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并储存于 -80°C 用于蛋白质印迹分析，或用 4% 多聚甲醛固定用于免疫组化分析 [1]
\n2. MDA-MB-231 乳腺癌异种移植模型：将 4×10⁶ 个 MDA-MB-231 细胞（PBS/基质胶 1:1）皮下注射到雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到 120–160 mm³ 时，将小鼠分为两组（每组 n=6）：载体组（0.5% 甲基纤维素）和 25 mg/kg AT406 组（口服，每日一次，连续 18 天）。如上所述监测肿瘤体积和体重。研究结束时，将肿瘤固定于 4% 多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，切片（5 μm），并用抗 cIAP1 和 cleaved caspase-3 抗体进行免疫组化染色 [1]
\n3. PC-3 前列腺癌药效学模型：将 6×10⁶ 个 PC-3 细胞（PBS/Matrigel 1:1）皮下注射到雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到 140–180 mm³ 时，小鼠单次口服 50 mg/kg AT406（每个时间点 n=3）。小鼠分别于给药后 2、6、12 和 24 小时处死；取出肿瘤，液氮速冻，裂解后进行 cIAP1 和 cleaved caspase-3 的蛋白质印迹分析 [1]
\n4. SK-OV-3 卵巢癌联合模型：将携带 SK-OV-3 异种移植瘤（100–120 mm³）的雌性裸鼠随机分为 4 组（每组 n=6）：载体组、AT406（25 mg/kg，口服，每日一次）、紫杉醇（5 mg/kg，静脉注射，每 3 天一次）组和联合治疗组。治疗持续 21 天。紫杉醇配制于 50% 乙醇/50% Cremophor EL（1:1）溶液中，并用生理盐水稀释。每周测量两次体重和肿瘤体积；研究结束时，对肿瘤进行称重以计算TGI[1]

1. 小鼠口服生物利用度：雄性CD-1小鼠（每时间点n=3）分别经口灌胃（25 mg/kg，溶于0.5%甲基纤维素）或静脉注射（5 mg/kg，溶于10% DMSO/30% Cremophor EL/60%生理盐水）给予AT406。分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和12小时采集血浆。采用LC-MS/MS法测定药物浓度。口服生物利用度(F) = 35%；口服Cmax = 3.8 μM，Tmax = 1小时。末端半衰期 (t₁/₂) = 4.2 小时 [1]
2. 血浆蛋白结合：将人血浆和鼠血浆 (500 μL) 与 AT406 (0.1–10 μM) 混合，并使用 12–14 kDa 截留分子量的透析膜在 37°C 下透析 4 小时。采用 LC-MS/MS 法测定透析液中游离药物浓度。血浆蛋白结合率：96.5%（人），95.2%（鼠）[1]
3. 小鼠组织分布：小鼠口服 AT406 (25 mg/kg)，并在 1 小时后处死 (Tmax)。收集组织（肝脏、脾脏、肺、肿瘤、脑、肾脏），在 PBS (1:1, w/v) 中匀浆，并采用 LC-MS/MS 法测定药物浓度。肝脏（12.5 μM）和脾脏（9.8 μM）中的浓度最高；肿瘤中的浓度为 4.2 μM（肿瘤/血浆比 = 1.1）；脑组织中的浓度较低（0.3 μM，脑/血浆比 = 0.08）[1]
4. 体外代谢（肝微粒体）：将AT406（1 μM）与人肝微粒体（HLMs）或小鼠肝微粒体（MLMs）在 NADPH（1 mM）存在下于 37°C 孵育。分别于 0、5、10、20、30 和 60 分钟收集样品。半衰期（t₁/₂）：55 分钟（HLMs），48 分钟（MLMs）；固有清除率 (CLint)：28 μL/min/mg 蛋白（人肝微粒体），32 μL/min/mg 蛋白（黏液微粒体）。主要代谢物经 LC-MS/MS 鉴定为单羟基化衍生物 [1]
5. 肾脏和粪便排泄：小鼠口服 AT406 (25 mg/kg)。收集 24 小时内的尿液和粪便。采用 LC-MS/MS 测定药物浓度。约12%的剂量以原形经尿液排出，28%以原形经粪便排出（总原形排出量：40%）[1]
6. CYP酶抑制：AT406（0.1–100 μM）与人肝微粒体和CYP1A2、2C9、2C19、2D6、3A4的特异性底物孵育。所有CYP的IC₅₀均>50 μM，表明药物相互作用风险低[1]

1. 小鼠急性毒性：雄性和雌性CD-1小鼠（每性别每剂量组n=4）单次口服AT406（75、100、150、200 mg/kg）。观察小鼠14天。最大耐受剂量（MTD）为150 mg/kg：200 mg/kg导致40%的小鼠死亡（每性别每组5只小鼠中有2只死亡），并伴有嗜睡和食物摄入量减少的症状（给药后24小时出现）。在150 mg/kg剂量下，观察到短暂的体重减轻（最大6%，第4天恢复）；未观察到其他毒性症状（例如腹泻、竖毛）[1]
2. 异种移植模型中的亚急性毒性：在 A549 和 MDA-MB-231 异种移植研究中（50 mg/kg，口服，每日一次，持续 21/18 天），AT406 未引起显著的体重减轻（<5%）或异常临床症状。研究结束时采集的血清显示，与载体组相比，ALT、AST（肝功能）、BUN 或肌酐（肾功能）均无显著变化[1]
3. 血液学毒性：对接受 AT406 治疗（50 mg/kg，口服，每日一次，持续 21 天）的小鼠进行了全血细胞计数 (CBC) 检测。与载体组相比，白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板或血红蛋白均未观察到显著变化，表明未发生骨髓抑制[1]
4. 组织毒性：对接受 50 mg/kg AT406（口服，每日一次，持续 21 天）治疗的小鼠的肝脏、肾脏、脾脏和肺脏进行组织病理学分析，结果显示与载体组相比，未出现显著病变（例如坏死、炎症）[1]

[1]. A potent and orally active antagonist (SM-406/AT-406) of multiple inhibitor of apoptosis proteins (IAPs) in clinical development for cancer treatment. J Med Chem. 2011;54(8):2714-2726.

Xevinapant 是一种口服有效的类固醇，模拟天然线粒体来源的第二种半胱天冬酶激活剂 (Smac) 和凋亡抑制蛋白 (IAP) 抑制剂，具有潜在的免疫调节、诱导细胞凋亡、化疗/放疗增敏和抗肿瘤活性。口服后，Xevinapant 可靶向并结合 IAP 上的 Smac 结合槽，包括直接半胱天冬酶抑制剂 X 染色体连锁 IAP (XIAP) 以及细胞 IAP 1 (c-IAP1) 和 2 (c-IAP2)。这会抑制这些 IAP 的活性并促进细胞凋亡的诱导。此外，由于 Xevinapant 可抑制 IAP 的活性，因此它可能与细胞毒性药物和/或放射疗法产生协同作用，从而克服肿瘤细胞的凋亡抵抗。由于IAPs调控核因子κB (NF-κB)信号通路，进而驱动参与免疫和炎症反应的基因表达，因此，当与某些免疫调节剂（例如免疫检查点抑制剂）联合使用时，xevinapant可能增强抗肿瘤免疫反应。IAPs在多种癌细胞类型中过度表达，并通过其杆状病毒lAP重复序列(BIR)结构域与活性caspase结合并抑制其活性，从而抑制细胞的内在和外在凋亡。它们导致癌细胞对某些细胞毒性药物和放射线产生化疗和放疗耐药性，促进肿瘤细胞存活，并与某些类型癌症的不良预后相关。 SMAC 是一种促凋亡线粒体蛋白，也是 IAP 家族细胞蛋白的内源性抑制剂。
另见：盐酸赛维那泮（其活性成分）。

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药物适应症
治疗头颈部上皮恶性肿瘤

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1. 背景：AT406（赛维那泮，SM406，ARRY334543） 是一种强效的口服活性 Smac 模拟物和 IAP 蛋白选择性抑制剂，被开发为癌症治疗的临床候选药物。IAP 蛋白在超过 50% 的人类实体瘤中过度表达，它们通过结合并抑制 caspase 来抑制细胞凋亡； Smac 模拟物如 AT406 通过将 caspase 从 IAP 中置换出来来抵消这种抑制作用，从而恢复细胞凋亡信号传导 [1]
2. 作用机制：AT406 以高亲和力与 cIAP1 和 cIAP2 的 BIR3 结构域结合，诱导其自身泛素化和蛋白酶体降解。cIAP 的降解释放 TNF 受体相关因子 2 (TRAF2)，激活非经典 NF-κB 通路（增强免疫细胞募集）并解除 caspase 抑制——这些共同作用导致癌细胞凋亡。 AT406 对 XIAP 的中等亲和力可通过逆转 XIAP 介导的 caspase 抑制作用进一步促进细胞凋亡 [1]
3. 临床开发优势：与早期的 IAP 抑制剂（例如，GDC-0152，仅可静脉给药）不同，AT406 具有良好的口服生物利用度（小鼠体内为 35%），便于慢性癌症的口服治疗。其对 IAP 的选择性和较低的脱靶激酶活性降低了不良反应的风险 [1]
4. 潜在适应症：临床前数据支持 AT406 用于治疗 IAP 高表达的实体瘤，包括非小细胞肺癌、三阴性乳腺癌、前列腺癌和卵巢癌。它还显示出与免疫疗法（由于 NF-κB 激活）或化疗（例如紫杉醇）联合使用以增强疗效的潜力[1]
5. 临床现状：截至本文发表时（2011 年），AT406 正处于临床前开发阶段，计划推进至实体瘤的 I 期临床试验。其口服活性和可控的毒性被认为是其临床转化的关键优势[1]

C32H43N5O4

561.71

561.331

C, 68.42; H, 7.72; N, 12.47; O, 11.39

1071992-99-8

Xevinapant hydrochloride;1071992-57-8

25022340

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

840.5±65.0 °C at 760 mmHg

462.1±34.3 °C

0.0±3.1 mmHg at 25°C

1.603

2.09

117.83

3

5

9

41

896

4

O=C1[C@]([H])(C([H])([H])N(C(C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C([H])([H])[C@@]2([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C(N([H])C([H])(C3C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=3[H])C3C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=3[H])=O)N21)N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])[H])N([H])C([H])([H])[H])=O

LSXUTRRVVSPWDZ-MKKUMYSQSA-N

InChI=1S/C32H43N5O4/c1-21(2)19-28(38)36-18-17-25-15-16-27(37(25)32(41)26(20-36)34-30(39)22(3)33-4)31(40)35-29(23-11-7-5-8-12-23)24-13-9-6-10-14-24/h5-14,21-22,25-27,29,33H,15-20H2,1-4H3,(H,34,39)(H,35,40)/t22-,25+,26-,27-/m0/s1

(5S,8S,10aR)-N-benzhydryl-5-[[(2S)-2-(methylamino)propanoyl]amino]-3-(3-methylbutanoyl)-6-oxo-1,2,4,5,8,9,10,10a-octahydropyrrolo[1,2-a][1,5]diazocine-8-carboxamide

DeBio-1143; DeBio1143; DeBio 1143; Xevinapant; AT 406; AT-406; AT406; SM406; SM 406; N65WC8PXDD; SM-406; UNII-N65WC8PXDD; Xevinapant; ARRY-334543; ARRY 334543; ARRY334543

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% Propylene glycol , 5% Tween 80 , 65% D5W: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。